Um dispositivo de geração de Gradient microfluídicos de Biologia Celular

Meu nome é Jiang. Sou bolsista de pôster em Harvard e no MIT Health, Science and Technology. E meu nome é Amir Manchi e sou professor estudante de graduação no laboratório SANE em Harvard, MIT, divisão de Ciências e Tecnologia da Saúde.

Este slide mostra o processo de esquema de como fazer o dispositivo, então eu apenas giro o revestimento SUA 50 em cima do vapor de silicone e, em seguida, coloco uma máscara mais adiante sobre um vapor de silicone e, em seguida, exporei e desenvolvo. Podemos finalmente obter, colocar essas almofadas no vapor de silicone. Depois disso, podemos simplesmente lançar o PDMS e, em seguida, rastejar e assar e dar um pequeno soco e, em seguida, podemos simplesmente unir a ligação entre o dispositivo PDMS e o glac de reta usando o plasma de oxigênio.

Ok, agora estamos na sala de microfabricação dentro do laboratório e vamos começar fazendo algumas camadas de PDMS. O que quero dizer com PDMS, o termo científico real é polimetil suboxano e é um polímero orgânico. É o polímero orgânico à base de silício mais amplamente utilizado.

Na verdade, é uma mistura de duas coisas diferentes, é uma mistura de base de elastômero de silício e também de agente de cura de elastômero de silício. Portanto, a proporção é 10 de base e uma de agente de cura. Precisamos de cerca de 10 gramas de base e, portanto, precisamos de cerca de um grama de agente de cura de elastômero e tentarei misturar essa base e o agente de cura vestível um ao outro.

Vou usar pipetas. Então, agora que a mistura está pronta, vou realmente despejá-la em cima do wafer de silício. Portanto, a ideia é que esses wafers de silício tenham alguns padrões em cima deles.

Na verdade, eles ajudam esse polímero PDMS a obter o padrão e usamos esses padrões para ter canais e ranhuras e/ou qualquer outro padrão que precisemos nesses polímeros. Então, o próximo passo é que, como temos muitas bolhas dentro dessa mistura, vamos tentar colocá-la dentro do vácuo para evitar essas bolhas dentro do nosso polímero. Vou colocar os géis PDMS no wafer de silício dentro da câmara de vácuo.

Vou fechar a câmara e vou abrir o vácuo. Depois que as bolhas desaparecerem, talvez cerca de alguns minutos, vamos colocá-las dentro do forno durante a noite, o que é cerca de 70 graus Celsius e isso fará com que elas se solidifiquem. O padrão que eu quero que você preste atenção são essas três guerras de reserva diferentes para fazer gradientes de modo que tivéssemos concentração zero de um lado e tivéssemos uma quantidade específica de concentração deste lado e nos movêssemos uniformemente em direção a isso e faremos um pequeno soco na outra extremidade, que seria nossa saída neste caso.

O próximo passo é cortar um desses padrões e transferir para um prato patriota, com as superfícies do padrão voltadas para cima. Então, espero que você possa ver as três entradas e uma saída que expliquei a vocês sobre esses padrões. Usaremos pequenos punções para nossa entrada para poder usar tubos de polietileno e eu vou usar grandes socos para minha saída para ter uma guerra de reserva.

Então, vamos começar com a primeira entrada. Vou dar um soco, a mesma coisa com o segundo e também outro pequeno soco para o terceiro. O último passo é dar um grande soco na tomada.

Então, quando terminarmos, teremos a camada APDS, que é a camada superior e vou usar outra camada de vidro na parte inferior. E esses micro slides serão minha camada inferior nos dispositivos microfólicos. Agora estamos na sala de microfabricação e eu tenho um vidro e uma camada PDMS e quero anexá-los um ao outro.

O que vamos usar agora é uma máquina chamada limpador de plasma. O que vai acontecer dentro da câmara é que o plasma ajuda a quebrar o fraco equilíbrio da superfície e substituí-lo por grupos químicos altamente reativos e também a superfície se tornaria hidrofílica. O que vai acontecer agora é que vou pegar o molde PDMS, que era a camada superior e tinha alguns canais dentro, e vou tirar a fita que coloquei antes para evitar que a poeira se prenda ao nosso molde.

Vou colocá-lo dentro da câmara. A próxima coisa a fazer é que eu tenha uma camada de vidro, que é uma lâmina de microscópio, e essa será nossa camada inferior dentro do dispositivo. Então, vou colocar este dentro da câmara também.

E eu fecho a câmara totalmente quando ela está fechada, primeiro a energia e depois bombeio e então temos que voltar a esta máquina daqui a cerca de cinco minutos. O que vou fazer é desligar a máquina. Então eu desligo a bomba primeiro e a energia em seguida e abro a câmara.

Este som é realmente devido à pressão negativa que foi aplicada durante o processo dentro da câmara. Então, vou retirar as diferentes camadas e quero juntá-las. Como o vidro é a camada inferior, vou pegá-lo na minha mão esquerda e consertá-lo e vou pegar a camada PDMS e colocá-la em cima da minha camada de vidro.

Mas como os padrões estão voltados para cima agora, vou inverter a camada PDMS. Vou colocá-lo no vidro depois de pressioná-los juntos. Eles são facilmente fixados e parte da vantagem desse processo de tratamento com plasma é a força adesiva e a permanência.

É assim que fica no final. Então, novamente, essas são nossas entradas e isso está na minha saída e estamos prontos para passar para a próxima etapa. O cozimento de fibra dentro do dispositivo e depois para a incubadora por uma hora e, em seguida, retire uma amostra SIM da incubadora após uma hora e, em seguida, coloque o alimento da piscicultura e faça a solução.

Para fazer a solução EGF, basta colocar os dois meios de cultura de moinho como Azure, pois acabamos de colocar os 15 nanogramas por EGF e 10 micromolares 50 D executam essa solução com muita dificuldade para visualizar o gradiente EGF através do canal. Então nós apenas pegamos duas mídias de fábrica, mídia virtual e colocamos aqui outras duas mídias de fábrica. Essas duas sessões são apenas culturas normais, infusão de cultura normal e normal no dispositivo.

Então eu removo a bolha, eu conecto novamente, esta também é a bolha móvel M descendo novamente. E então eu só uso 15 nanogramas er EGF e 10 micromolares fi dextra e dois mil meios da retirada, a amostra e colocar a seringa e então você conhece a bolha. E então é só trocar a solução, voltar.

A solução é entrar na seringa do tipo gás e empurrar SH por várias vezes para remover a bolha, a solução da seringa de todos os interruptores está chegando aqui primeiro e, em seguida, troque a barra e a solução através da barra de três vias e nem a tubulação e a solução saindo da tubulação. E depois que a mistura sai, a solução está saindo, podemos simplesmente inserir a tubulação no dispositivo My Predict e, em seguida, todas as três soluções são as mesmas. Você pode simplesmente conectar suavemente, conectar a rede do canal de infusão.

Então, finalmente, dois é a mídia cultural normal. Um deles é a mídia cultural com o EGF e para confirmar o perfil gradiente do EGF. Esta é a célula na rede, célula na rede.

Isso fará a saída da célula, então gradiente gerando usando o canal de três hubs e, em seguida, gere o grad dentro da área da célula. Então, normalmente, o que eu quero fazer, basta fazer o assento da célula, a suspensão da célula, o assento da saída e, em seguida, podemos apenas aspirar suavemente na rede e, em seguida, a célula flui através da área da célula está automaticamente sentada e eles estabelecem o revestimento e, em seguida, certificando-se de que a célula se espalhe completamente. E depois de fazer, depois de garantir que a célula se espalhe completamente, podemos simplesmente começar a infundir e depois estudar a migração celular usando o dispositivo gerador de rádio.