Amostragem de microextração em fase sólida: uma técnica baseada em sonda para extração de amostras de tecidos de enxerto

O armazenamento a longo prazo de um enxerto de órgão afeta seu perfil metabólico, que é um indicador da função do órgão e da rejeição do órgão em estágio inicial.

Para isolar esses metabólitos, comece fazendo uma microextração fina em fase sólida ou sonda SPME revestida com um adsorvente biocompatível. Mergulhe a sonda em uma solução de limpeza hidroalcoólica para hidratar o adsorvente revestido e soltar quaisquer impurezas ligadas.

Agite a sonda para remover as impurezas. Em seguida, coloque a sonda em uma solução de ativação e agite novamente. Os produtos químicos na solução de ativação modificam a superfície da sonda, aumentando seu potencial de adsorção. Enxágue a sonda com água e esterilize-a para remover contaminantes microbianos.

Agora, insira a sonda estéril e ativada no enxerto de órgão, de modo que a matriz do tecido cubra toda a superfície do sorvente. O material adsorvente atrai metabólitos polares e apolares livres do enxerto, permitindo a adsorção em sua superfície. Retraia a sonda e enxágue-a com água para remover qualquer tecido residual.

Em seguida, coloque a sonda em uma solução de dessorção, que interage com os metabólitos adsorvidos. Agitar a sonda para separar e solubilizar os metabolitos capturados na solução de dessorção. Por fim, remova a sonda e processe a mistura de metabólitos resultante para análise subsequente.

Comece preparando uma mistura de pré-condicionamento composta por 1 a 1 metanol e água. Pipete 1 mililitro da solução em cada frasco de vidro de 2 mililitros e coloque uma sonda em cada frasco. Agite os frascos em um agitador de vórtice a 1.200 rpm por 1 hora. Em seguida, enxágue as sondas com água de grau LC-MS e esterilize-as de acordo com o protocolo de esterilização cirúrgica padrão ou no departamento de processamento estéril.

Quando estiver pronto para extrair a amostra, abra a embalagem estéril e insira duas sondas diretamente no córtex renal por 10 minutos por ponto de tempo, certificando-se de que todo o comprimento do revestimento seja coberto pela matriz do tecido. Certifique-se de acompanhar o tempo de amostragem para cada sonda. Retraia a sonda puxando-a para fora do tecido e enxágue imediatamente o revestimento com água de grau LC-MS para remover qualquer sangue restante, certificando-se de enxaguar longe do local da cirurgia.

Para transportar as sondas, coloque-as em frascos separados e feche-as. Em seguida, coloque os frascos em uma caixa cheia de gelo seco ou nitrogênio líquido. Armazene as amostras a 80 graus Celsius negativos ou prossiga imediatamente com a dessorção.

Preparar uma solução de dessorção composta de acetonitrila e água para análise metabolômica e outra composta de isopropanol e metanol para análise lipidômica. Adicione 100 microlitros da solução às inserções nos frascos rotulados de 2 mililitros e coloque uma sonda em cada frasco. Agite os frascos a 1.200 rpm por 2 horas. Em seguida, remova as sondas dos frascos e prossiga com a análise LC-MS.