Transformação gênica baseada em vetor cromossômico artificial bacteriano binário em plantas de Arabidopsis: uma técnica para gerar plantas transgênicas com inserção de cópia única

Comece com plantas Arabidopsis com cabeças de flores imaturas. Mergulhe as cabeças das flores em suspensão de células Agrobacterium carregando T-DNA clonado com cromossomo artificial bacteriano binário ou BIBAC, um vetor que se replica nos sistemas E. coli e Agrobacterium. Este vetor binário de T-DNA pode fornecer grandes transgenes, como gene de resistência a herbicidas e marcadores selecionáveis fluorescentes ao longo de um promotor específico de sementes.

Enquanto as cabeças das flores ainda estão imersas, agite suavemente as plantas para aumentar seu contato com a Agrobacterium. Com sua capacidade inerente de infectar plantas, o Agrobacterium transfere o transgene para a célula floral. À medida que o transgene entra na célula, ele se move para o núcleo e se funde com o genoma da planta.

Agora, embrulhe a planta em filme plástico e incube no escuro para reter a umidade para melhorar a transformação. Remova o filme e cultive as plantas em condições fisiológicas até que produzam sementes.

Em seguida, colha as sementes e observe ao microscópio de fluorescência para selecionar os transformantes. Agora, cultive as sementes transformadas em condições adequadas até a germinação. Pulver