Eletroforese capilar de afinidade por deslocamento de mobilidade: um método para analisar as interações amostra-ligante dependendo da migração diferencial de complexos proteína-ligante

Ligantes, como íons metálicos, ligam-se de forma não covalente a uma proteína específica, formando um complexo íon proteína-metal. Essa ligação altera a carga geral da proteína, o que permite a caracterização desses complexos por meio de eletroforese capilar de afinidade.

Para começar, pegue um capilar de vidro fino e pré-condicionado com grupos de silanol carregados na superfície interna. Enxágue o capilar com solução de EDTA. O EDTA é um agente quelante que remove quaisquer impurezas de íons metálicos. Agora, injete hidrodinamicamente a solução de amostra contendo a proteína desejada no capilar a partir de sua extremidade positiva ou ânodo.

Aplique uma alta voltagem para criar um fluxo eletro-osmótico, forçando as proteínas em sua conformação nativa com cargas inerentes a se moverem dentro do capilar em direção ao cátodo. Registre o padrão de migração de proteínas não ligadas do capilar.

Em seguida, introduza uma solução de ligante específica no capilar junto com as amostras de proteína e aplique a mesma voltagem. Dentro do capilar, as moléculas ligantes se ligam de forma não covalente à proteína alvo, formando complexos.

Isso induz uma mudança conformacional nas proteínas, levan