Ensaio de Deslocamento de Mobilidade Eletroforética para Detecção de Complexos de Fator de Transcrição-DNA

Proteínas reguladoras, como fatores de transcrição, reconhecem e se ligam a sequências específicas de DNA em regiões promotoras, regulando a expressão gênica.

Para detectar interações específicas do fator de transcrição-DNA usando o ensaio de mudança de mobilidade eletroforética, comece com um tubo contendo um fator de transcrição desejado e sondas de DNA marcadas com corante fluorescente e infravermelho curtas específicas em um tampão de ligação. Incubar no escuro, evitando o fotobranqueamento do corante.

A força iônica e o pH do tampão fornecem condições adequadas para o fator de transcrição identificar e ligar sequências de ligação específicas na sonda de DNA. Os íons de magnésio no tampão estabilizam ainda mais os complexos proteína-DNA.

Adicione um corante de carga adequado à mistura, ajudando a visualizar a progressão da eletroforese. Carregue esta mistura e sondas de DNA nos poços de um gel de poliacrilamida pré-moldado e não desnaturante.

Realize eletroforese no escuro.

O campo elétrico aplicado faz com que sondas de DNA de baixo peso molecular, não ligadas e carregadas negativamente se movam através do gel em direção a ânodos carregados positivamente. No entanto, os grande