Examine o comportamento de prevenção de quimioterapia em vermes transgênicos usando o ensaio de prevenção osmótica

Nos nematóides, os neurônios quimiossensoriais - ASH - podem sentir mudanças de osmolaridade em seus arredores causadas por repelentes químicos. Em resposta, esses vermes se afastam dos repelentes, levando a um comportamento de quimioevitação.

A agregação anormal de proteínas dentro dos neurônios ASH pode levar a alterações no comportamento de quimioevitação.

Para examinar o comportamento de evitação osmótica em vermes, comece com larvas de nematóides transgênicos com agregados de proteínas em neurônios ASH. Trate os nematóides com compostos bioativos que reduzem a agregação de proteínas e restauram o comportamento de evitação em alguns vermes.

Transfira os vermes tratados para uma placa de mídia pré-preparada e sem alimentos para mantê-los no estágio larval. A placa tem glicerol - um produto químico de alta força osmótica - presente em seu centro, criando uma barreira osmótica para dividir a placa em duas zonas, uma zona normal e uma zona de armadilha.

Complemente a zona da armadilha com anestesia para interromper o movimento dos vermes que atravessam a barreira. Adicione uma gota de butanodiona na zona da armadilha para atrair todos os vermes, fazendo com que eles se movam em direção a ela.

Os vermes com agregação de proteínas não podem sentir o estresse osmótico, cruzar a linha de barreira e ficar anestesiados na zona da armadilha. Os vermes com comportamento de quimioevitação restaurado se afastam do glicerol e permanecem dentro da zona normal.

O número de vermes na zona normal se correlaciona com a eficácia dos compostos bioativos na restauração do comportamento de quimioevitação.

Para o ensaio de prevenção osmótica, divida uma placa NGM sem alimentos em zonas normais e armadilhas, criando uma linha de glicerol de 8 molares no meio. Em seguida, espalhe uma linha de azida sódica de 200 milimolares a cerca de 1 centímetro de distância da linha de glicerol para paralisar os nematóides que atravessam a barreira de glicerol para a zona da armadilha.

Transfira cerca de 200 nematóides cada para a zona normal de três placas replicadas para cada grupo. Em seguida, adicione uma gota de 1% de butanodiona na zona da armadilha para atrair os nematóides. Cubra a tampa da placa de Petri imediatamente e incube a 23 graus Celsius por 90 minutos.

Marque o número de nematóides em ambas as zonas ao microscópio e calcule o índice de evitação.