Microscopia eletrônica de transmissão para quantificar a distribuição de glicogênio em músculos esqueléticos humanos

O glicogênio, um polímero de glicose ramificado, é uma reserva de energia nos compartimentos intermiofibrilares, intramiofibrilares e subsarcolemais subcelulares dentro do músculo esquelético humano.

Para quantificar a distribuição de glicogênio subcelular usando microscopia eletrônica de transmissão, TEM, obtenha tecido muscular esquelético humano isolado. Fixe com glutaraldeído para preservar a estrutura do tecido. Fixe o tecido em uma solução de tetróxido de ósmio e ferrocianeto de potássio.

O complexo ósmio-ferrocianeto reduzido liga-se aos grupos hidroxila no glicogênio, melhorando o contraste das partículas de glicogênio no músculo. Além disso, as membranas e o retículo sarcoplasmático - uma organela ligada à membrana - são corados.

Desidratar o tecido em concentrações crescentes de etanol. Incorpore em resina, formando um bloco sólido. Obter cortes ultrafinos com fibras musculares orientadas longitudinalmente; transferir para grades TEM.

Mergulhe as grades em acetato de uranila, solução de metal pesado. Os íons de uranila se ligam a lipídios e proteínas carregados negativamente, tornando-os densos em elétrons. Manchar com solução de citrato de chumbo.

Os íons de chumbo se li