Registro da atividade neural do tecido hipocampal desdobrado usando matriz de microeletrodos penetrantes

Pegue uma câmara de gravação contendo o arranjo de microeletrodos penetrantes ou PMEA, que registra sinais elétricos do tecido neural.

Conecte a entrada a frascos contendo aCSF oxigenado e aCSF oxigenado com 4-aminopiridina ou 4-AP usando um conector trivalve.

Conecte a saída a um tubo de vácuo.

Aqueça a tubulação entre a entrada e o trivalve até a temperatura fisiológica.

Com a entrada e a saída fechadas, transfira o hipocampo desdobrado para a câmara.

Sob um microscópio, posicione o hipocampo no PMEA.

Remova a solução da câmara.

Coloque uma âncora de tecido para segurar o tecido nos eletrodos PMEA.

Abra a entrada e a saída para iniciar o fluxo de aCSF.

Incube o tecido com aCSF para permitir a aclimatação neuronal.

Em seguida, flua em aCSF com 4-AP. O 4-AP bloqueia os canais neuronais de potássio, prolongando a duração do potencial de ação.

O PMEA captura os sinais elétricos proporcionais ao disparo neural aprimorado dos neurônios do hipocampo.

Neste procedimento, encha um frasco com aCSF normal e outro frasco com 4-AP aCSF. Borbulhe as soluções com 95% de oxigênio e 5% de dióxido de carbono desde o início dos experimentos. Use um conector trivalve para controlar qual solução será selecionada durante um experimento.

Em seguida, conecte um tubo de vácuo à saída da câmara para remover a solução em um recipiente de pó. Aqueça a tubulação antes de entregar a solução na câmara de registro e mantenha-a a uma temperatura controlada de 35 graus Celsius. Depois de fechar a entrada e a saída da câmara de gravação, use um conta-gotas de pipeta de vidro feito sob medida para transferir o hipocampo desdobrado para a câmara de gravação.

Sob o microscópio, posicione o hipocampo desdobrado com o lado óbvio voltado para baixo, a área CA3 apontando para longe e o campo CA1 apontando para o pesquisador. Aspirar cuidadosamente a solução na câmara utilizando uma pipeta de vácuo da borda da câmara de registo até que a câmara esteja seca e o tecido assente na matriz.

Em seguida, coloque cuidadosamente uma âncora de tecido feita sob medida no topo do tecido para segurar o hipocampo desdobrado na matriz. Reabasteça a câmara de gravação com algumas gotas de solução. Abra gradualmente a entrada e a saída para ajustar a taxa de fluxo para cerca de duas gotas por segundo na câmara de gotejamento IV.

Incubar o tecido na câmara de registo com aCSF normal durante cerca de um minuto. Em seguida, mude o fornecimento da solução para 4-AP dissolvido aCSF e ajuste a taxa de fluxo corretamente. Incube o tecido em 4-AP dissolvido aCSF por cerca de 5 a 10 minutos antes da gravação.