Registros Eletroencefalográficos Simultâneos e Potenciais de Campo Local em um Rato Anestesiado

Prenda um rato anestesiado a uma estrutura estereotáxica com o crânio exposto.

O rato tem um orifício no crânio com a dura-máter perfurada, uma incisão no pescoço e eletrodos estimulantes presos às almofadas do bigode.

Fixe um eletroencefalograma, ou EEG, eletrodo de aranha untado com pasta condutora no crânio, mantendo o orifício da rebarba limpo.

O eletrodo de aranha mede o EEG de superfície, refletindo a atividade neuronal geral da área cortical abaixo dele.

Monte um microeletrodo linear multicanal em um micromanipulador.

Insira o microeletrodo no córtex cerebral através do orifício da broca a uma profundidade de 1500 micrômetros.

O microeletrodo mede o potencial de campo local, ou LFP, refletindo a atividade neuronal cortical.

Coloque os eletrodos de referência EEG e LFP dentro da incisão do pescoço.

Conecte os eletrodos de gravação e referência a um préamplifier ligado a uma unidade de aquisição de dados.

Aplique estímulos elétricos nas almofadas do bigode e ajuste a profundidade do microeletrodo para maximizar a amplitude do LFP evocado. Registre os sinais de EEG e LFP co-localizados.

Neste procedimento, limpe e seque o crânio ao redor do orifício da rebarba usando um cotonete. Aplique cuidadosamente a pasta condutora de EEG em um lado plano de um eletrodo de aranha de EEG. Deixe um pequeno orifício livre de pasta de EEG no eletrodo de aranha para permitir que um microeletrodo multilaminar passe pelo orifício sem entrar em contato com a pasta e o eletrodo de aranha.

Alinhe o eletrodo de aranha com o orifício da broca no crânio com a pasta de EEG voltada para o crânio. Pressione cuidadosamente o eletrodo de aranha no crânio, fazendo contato firme com o crânio através da pasta de EEG.

Remova qualquer pasta que obscureça o orifício da rebarba usando uma agulha em uma seringa e remova o excesso de pasta de EEG além da periferia do eletrodo de aranha, de modo que o contato entre o eletrodo de aranha e o crânio seja espacialmente restrito ao tamanho do eletrodo. Em seguida, esfregue a pasta de EEG no eletrodo de referência para o EEG e coloque-o firmemente dentro da incisão na parte de trás do pescoço do rato.

Em seguida, conecte os eletrodos de EEG ao pré-amplificador por meio de um divisor de sinal passivo para sinais de baixa impedância. Nesta fase, teste a resistência da sonda de EEG para certificar-se de que está abaixo de cinco kiloohms. Caso contrário, adicione mais pasta de EEG e certifique-se de que o eletrodo da aranha faça um bom contato com o crânio.

Em seguida, monte um braço micromanipulador na estrutura estereotáxica. Conecte um microeletrodo linear de 16 canais a um estágio de cabeça aguda de 16 canais preso com segurança no braço do micromanipulador. Em seguida, esfregue a pasta de EEG no eletrodo de referência para o microeletrodo e, em seguida, coloque-o firmemente dentro da incisão ao lado do eletrodo de referência para o EEG. Ajuste o ângulo do braço do micromanipulador para que o microeletrodo fique perpendicular à superfície cortical.

Agora, abaixe o microeletrodo sob um microscópio de modo que a ponta do microeletrodo fique voltada para a pequena abertura na parte inferior do orifício da broca, até que o eletrodo superior penetre na superfície cortical. Deve-se tomar cuidado para evitar forçar o microeletrodo na superfície da dura-máter, pois isso quebraria o eletrodo.

Insira o microeletrodo na superfície cortical a uma profundidade de 1500 micrômetros. Microajuste a profundidade aplicando um trem de estímulo à almofada do bigode e observando o LFP evocado de 16 canais em um monitor de PC. Gire cuidadosamente o botão do eixo z no micromanipulador até que ocorra a maior amplitude do LFP evocado, pois isso coincide com a camada 4 no córtex.