Medindo a atividade neural em uma fatia de cérebro de camundongo após incubação prolongada

Prenda uma fatia de cérebro de camundongo em uma câmara de gravação, perfundida com aCSF oxigenado após incubação prolongada.

As células da fatia são carregadas com um indicador de cálcio, facilitando as medições de cálcio intracelular.

Pegue uma pipeta de registro contendo um eletrodo em uma solução eletrolítica.

Identifique um neurônio alvo. Posicione a pipeta de registro com pressão positiva na membrana celular, criando uma covinha.

Aplique pressão negativa para criar uma vedação hermética.

Além disso, aplique pulsos de pressão negativa, rompendo a membrana e estabelecendo uma configuração de célula inteira.

Perfundir aCSF com alta concentração de potássio, que despolariza a membrana do neurônio.

A despolarização abre os canais de sódio, desencadeando um potencial de ação, que por sua vez ativa os canais de cálcio dependentes de voltagem e permite o influxo de cálcio.

Os íons de cálcio se ligam ao indicador, aumentando a fluorescência, que pode ser visualizada sob iluminação adequada.

O aumento da fluorescência intracelular, causado pelo influxo de cálcio após a aplicação de potássio, indica viabilidade neuronal após incubação prolongada.

Para registro, coloque o tecido em uma c