Avaliando Murino Resistência Função Usando Miografia Pressão Arterial

O objetivo geral do experimento a seguir é determinar a reatividade vascular em tempo real da artéria resistente de camundongos in vitro em condições fisiológicas próximas. Isso é conseguido montando um pequeno segmento do vaso em duas microcânulas e mantendo-o à pressão luminal fisiológica. O vaso é então contraído com um agonista do receptor alfa um fenilefrina para estudar a capacidade de qualquer droga de dilatar o vaso.

Desafiar o vaso contraído com acetilcolina avalia sua capacidade de dilatar em tempo real por meio de um mecanismo dependente do endotélio. Os resultados mostram a variação percentual no diâmetro do lúmen em resposta à acetilcolina e verificam que a deficiência de SGC alfa um resulta em vasodilatação dependente do endotélio prejudicada. A principal vantagem dessa técnica em comparação com os métodos existentes, como a mamografia de fio, é que a mamografia de pressão permite a caracterização de pequenos microvasos, que são mais relevantes na manutenção da homeostase da pressão arterial do que os vasos de condutância maiores.

Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo cardiovascular, como a hipertensão, onde os vasos macrorresistentes desempenham um papel crítico. Comece sacrificando um camundongo com pentobarbital. Agora abra a cavidade abdominal e comece a dissecar o tecido mesentérico.

Agora identifique uma artéria mesentérica de terceira ordem e isole-a do tecido conjuntivo e adiposo. A diferenciação entre artérias e veias no nível dos microvasos é problemática quando não há sangue nos vasos. Portanto, fazer isso no animal intacto é preferível.

Em seguida, corte um segmento de dois a três milímetros de comprimento da artéria mesentérica de terceira ordem e coloque-o em um prato contendo montes. Buffer PSS. O segmento arterial não deve conter nenhuma ramificação.

Prepare a câmara myo enchendo suavemente as cânulas através das válvulas de entrada e saída com heaps Solução PSS A partir de uma seringa de 10 mililitros, esteja ciente de que a pressão excessiva pode danificar o frágil transdutor conectado às cânulas. Depois de encher bem as cânulas, feche as duas válvulas. Agora transfira o segmento arterial isolado para a câmara e monte uma extremidade do vaso na cânula direita.

Amarrando-o cuidadosamente com um fio fino de sutura de náilon usando uma seringa, lave e preencha o recipiente com solução de pilha através da válvula de entrada. Agora monte a outra extremidade do vaso na cânula esquerda e prenda a cânula ao vaso com a sutura de náilon. Encha a câmara com até 10 mililitros de solução heap.

Verifique se há vazamento empurrando suavemente a solução heap através da válvula de entrada com a ajuda de uma seringa. Agora coloque a câmara sob a câmera de vídeo. Inicie o oxigênio e aqueça a câmara a 37 graus Celsius enquanto a válvula de entrada está fechada, conectada ao tubo P um do primeiro reservatório de solução em pilha.

Deixe qualquer bolha e solução passar pelo tubo até que não haja bolhas no tubo. Em seguida, abra a válvula. Conecte à válvula esquerda da câmara com o tubo P dois.

Vindo do regulador de pressão, certifique-se de que não haja bolhas ou vazamentos em todo o sistema. Vá para o menu de pressão no painel de interface myo ou no software e ligue a bomba enquanto desliga o fluxo. Abra o programa e clique em coletar.

O monitoramento e a análise do lúmen do vaso, do diâmetro do vaso e da espessura da parede agora são possíveis. Para aumentar gradualmente a pressão interluminal, selecione a pressão P um e insira uma sequência de pressão ascendente. Valores de cinco a 60 milímetros de vasos de mercúrio, às vezes torcem ou se contorcem enquanto a pressão aumenta, então ajuste a tensão ou tensão de acordo com a ajuda de um micro posicionador vertical ou longitudinal.

Quando a pressão estiver em 60 milímetros e o banho estiver em 37 graus Celsius, equilibre o vaso por pelo menos 45 minutos e até uma hora durante o período de equilíbrio. Troque a solução do banho uma vez com pilhas pré-aquecidas. Agora que a seção arterial está equilibrada, aplique 10 mililitros de solução despolarizante de cloreto de potássio a 37 graus Celsius.

O músculo liso se despolarizará totalmente e atingirá a constrição máxima. Depois de obter uma constrição estável, enxágue o banho com solução de pilha três vezes em intervalos de 10 minutos. Agora verifique a viabilidade do vaso e a integridade do endotélio.

Primeiro, pré-contraia o vaso adicionando fenilefrina para tender aos cinco moles negativos por litro. Quando uma constrição estável for obtida, execute uma curva de resposta de vasodilatação de concentração cumulativa pela adição sequencial de doses crescentes de acetilcolina de 10 para o negativo, nove para 10 para os cinco moles negativos por litro após a última dose de acetilcolina. Enxágue a preparação com montes três vezes em intervalos de 10 minutos.

Agora, determine o diâmetro passivo do lúmen aplicando PSS livre de cálcio contendo dois milimoles de EGTA por litro dos traçados registrados. Meça o diâmetro do lúmen para cada resposta à dose, que será usado para calcular todos os parâmetros. Expresse a resposta de relaxamento da acetilcolina como uma comparação entre o tratamento com o agonista e o tampão livre de cálcio em termos de quanto cada um alterou o diâmetro do lúmen da constrição induzida pela fenilefrina.

A miografia de pressão de estado foi usada para estudar o relaxamento vascular em resposta à acetilcolina em artérias de resistência mesentérica isoladas de camundongos knockout do tipo selvagem e SGC alfa um nos fundos S seis e preto seis e pré-constrito com fenilefrina. A deficiência de SGC alfa um foi associada à diminuição da capacidade da acetilcolina de induzir relaxamento vascular, independentemente do histórico genético dos camundongos estudados. No entanto, o relaxamento dependente do endotélio de camundongos SGC Alpha one null foi mais acentuadamente prejudicado no fundo S seis do que no fundo preto seis.

Juntos, esses achados sugerem que a diminuição da sensibilidade da vasculatura ao relaxamento dependente endotelial pode contribuir para a hipertensão específica em camundongos knockout para SGC Alpha one Uma vez dominada, essa técnica pode ser feita em uma ou duas horas se for realizada corretamente. Além desse procedimento, outros métodos, como a microscopia confocal, podem ser realizados simultaneamente nos vasos sanguíneos vitais. Isso permitiria, por exemplo, a medição das concentrações intracelulares de ferro que podem ajudar a identificar mecanismos de sinalização subjacentes.