Métodos para a detecção quantitativa de anticorpos induzida pela ativação do complemento no Glóbulos Vermelhos

O objetivo geral do experimento a seguir é avaliar a ativação do complemento por anticorpos contra glóbulos vermelhos ou hemácias no soro do paciente. Isso é obtido incubando glóbulos vermelhos com soro do paciente na presença de anticorpo anti C cinco bloqueador para induzir a deposição de C quatro e C3 na superfície das hemácias. Em seguida, as hemácias são coradas com anticorpos anti C quatro e anti C3 marcados com fluorescência, e a quantidade de deposição de complemento nas hemácias pode então ser analisada por citometria de fluxo em um método alternativo.

As hemácias são incubadas com soro do paciente na ausência de anti C cinco para induzir a lise mediada pelo complemento. A porcentagem de hemácias lisadas pode então ser determinada medindo a quantidade de hemoglobina liberada pelas células por espectrometria. A principal vantagem dessa nova técnica sobre os métodos existentes, como a hemólise ou o teste de antiglobulina usados em diagnósticos de rotina, é que ela é de natureza quantitativa e podemos detectar diferenças abaixo do ideal na ativação do complemento.