Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 3:22 min. • January 30th, 2026
Pegue glóbulos vermelhos de ovelha (SRBCs) com IgM-opsonizado com anticorpos IgM ligados aos antígenos da superfície celular.
Adicione soro contendo proteínas complementares, exceto C5.
O complexo C1 se liga aos anticorpos e se torna ativo.
O C1 ativado cliva C4 e C2, formando a convertase C3, que então cliva C3 e deposita C3b nas SRBCs.
Sem C5, C3b se degrada para C3bi.
Adicione os SRBCs a uma cultura de macrófagos.
O C3bi se liga ao receptor do macrófago, desencadeando a fagocitose do SRBC.
Adicione uma solução hipotônica para lisar e remova os SRBCs não internalizados.
Adicione um tampão de lise para lisar as células e libere hemoglobina SRBC.
Introduza um reagente de detecção.
Na presença de ureia, a hemoglobina catalisa a oxidação do diaminofluoreno pelo peróxido de hidrogênio, produzindo um produto colorido.
Meça a absorvância do produto colorido, que é proporcional aos SRBCs fagocitados.
Este ensaio modela a fagocitose de bactérias marcadas por anticorpos usando SRBCs opsonizados para imitar alvos bacterianos.
Para um ensaio de opsonização, incube 2 vezes 10 até o oitavo glóbulos vermelhos de ovelha ou SRBCs com 50 microlitros de imunoglobulina anti-SRBC de coelho M ou IgM por 30 minutos
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