Um ensaio bactericida sérico para a atividade bactericida mediada por complemento de anticorpos

Pegue uma amostra de soro diluída em série contendo anticorpos monoclonais contra lipopolissacarídeos, ou LPS - um componente da membrana externa de bactérias gram-negativas.

Introduza bactérias gram-negativas. Os anticorpos séricos se ligam ao LPS bacteriano.

Adicione proteínas do complemento. O complexo C1 liga-se a anticorpos ligados ao LPS, formando um C1 enzimaticamente ativo.

C1 ativado cliva C4 e C2 para formar C3 convertase, que cliva C3 para formar C5 convertase. A convertase cliva C5 para produzir C5b, que recruta C6 e C7. O complexo resultante se insere na membrana externa e se associa a C8 e C9 múltiplo, formando um poro.

O dano à membrana externa desestabiliza a membrana interna, causando lise celular.

Coloque a mistura em um prato de ágar e espalhe. Incubar para crescimento bacteriano. Cubra a placa com ágar contendo cloreto de trifenil tetrazólio, ou TTC, que é reduzido por desidrogenases microbianas, conferindo uma cor vermelha às colônias bacterianas.

O número de colônias aumenta com a diluição da amostra, indicando atividade bactericida reduzida com menor concentração de anticorpos.

Para começar, incube as amostras em banho-maria morno a 56 graus Celsius por 30 mi