Name: Visualizando neuroblasto Cytokinesis Durante C. elegans Embriogênese (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-12T18:05:00.000+00:00
Duration: 9 min 52 s
Description: Aprenda a visualizar citocinese em neuroblastos durante a embriogênese de Caenorhabditis elegans usando marcadores transgênicos e microscopia confocal. Este método permite estudar genes essenciais para a divisão celular em tecidos em desenvolvimento.

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Os autores gostariam de reconhecer que este trabalho foi apoiado pelas Ciências Naturais e Council of Canada (NSERC) concessão de Pesquisa de Engenharia.

<ol><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77, 71-94 (1974).</li>
<li>Fire, A., Xu, S., Montgomery, M. K., Kostas, S. A., Driver, S. E., Mello, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potent+and+specific+genetic+interference+by+double-stranded+RNA+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 391, 806-811 (1998).</li>
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<li>Ikegami, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Semaphorin+and+Eph+receptor+signaling+guide+a+series+of+cell+movements+for+ventral+enclosure+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Semaphorin and Eph receptor signaling guide a series of cell movements for ventral enclosure in C. elegans.</a> Curr. Biol. 22, 1-11 (2012).</li>
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<li>Wang, X., Roy, P. J., Holland, S. J., Zhang, L. W., Culotti, J. G., Pawson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+Ephrins+Control+Cell+Organization+in+C.+elegans+Using+Kinase-Dependent+and+-Independent+Functions+of+the+VAB-1+Eph%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Multiple Ephrins Control Cell Organization in C. elegans Using Kinase-Dependent and -Independent Functions of the VAB-1 Eph.</a> Mol. Cell. 4, 903-913 (1999).</li>
<li>Chin-Sang, I. D., Moseley, S. L., Ding, M., Harrington, R. J., George, S. E., Chisholm, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+divergent+C.+elegans+ephrin+EFN-4+functions+in+embryonic+morphogenesis+in+a+pathway+independent+of+the+VAB-1+Eph+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The divergent C. elegans ephrin EFN-4 functions in embryonic morphogenesis in a pathway independent of the VAB-1 Eph receptor.</a> Development. 129, 5499-5510 (2002).</li>
<li>Ghenea, S., Boudreau, J. R., Lague, N. P., Chin-Sang, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+VAB-1+Eph+receptor+tyrosine+kinase+and+SAX-3%2FRobo+neuronal+receptors+function+together+during+C.+elegans+embryonic+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The VAB-1 Eph receptor tyrosine kinase and SAX-3/Robo neuronal receptors function together during C. elegans embryonic morphogenesis.</a> Development. 132, 3679-3690 (2005).</li>
<li>Bernadskaya, Y. Y., Wallace, A., Nguyen, J., Mohler, W. A., Soto, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((UNC-40%2FDCC%2C+SAX-3%2FRobo%2C+and+VAB-1%2FEph+polarize+F-actin+during+embryonic+morphogenesis+by+regulating+the+WAVE%2FSCAR+actin+nucleation+complex%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">UNC-40/DCC, SAX-3/Robo, and VAB-1/Eph polarize F-actin during embryonic morphogenesis by regulating the WAVE/SCAR actin nucleation complex.</a> PLoS Genet. 8, (2012).</li>
<li>Piekny, A. J., Werner, M., Glotzer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokinesis%3A+welcome+to+the+Rho+zone%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Cytokinesis: welcome to the Rho zone.</a> Trends Cell Biol. 15, 651-658 (2005).</li>
<li>Piekny, A. J., Maddox, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+myriad+roles+of+Anillin+during+cytokinesis%5BTitle%5D)+AND+%22Sem.+Cell+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The myriad roles of Anillin during cytokinesis.</a> Sem. Cell Dev. Biol. 21, 881-891 (2010).</li>
<li>Zhao, W. M., Fang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anillin+is+a+substrate+of+anaphase-promoting+complex%2Fcyclosome+%28APC%2FC%29+that+controls+spatial+contractility+of+myosin+during+late+cytokinesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Anillin is a substrate of anaphase-promoting complex/cyclosome (APC/C) that controls spatial contractility of myosin during late cytokinesis.</a> J. Biol. Chem. 280, 33516-33524 (2005).</li>
<li>Piekny, A. J., Glotzer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anillin+is+a+scaffold+protein+that+links+RhoA%2C+actin+and+myosin+during+cytokinesis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Anillin is a scaffold protein that links RhoA, actin and myosin during cytokinesis.</a> Curr. Biol. 18, 30-36 (2008).</li>
<li>Hickson, G. R., O’Farrell, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rho-dependent+control+of+anillin+behavior+during+cytokinesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Rho-dependent control of anillin behavior during cytokinesis.</a> J. Cell Biol. 180, 285-294 (2008).</li>
<li>Fraser, A. G., Kamath, R. S., Zipperlen, P., Martinez-Campos, M., Sohrmann, M., Ahringer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+genomic+analysis+of+C.+elegans+chromosome+I+by+systematic+RNA+interference%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Functional genomic analysis of C. elegans chromosome I by systematic RNA interference.</a> Nature. 408, 325-330 (2000).</li>
<li>Kamath, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+functional+analysis+of+the+Caenorhabditis+elegans+genome+using+RNAi%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Systematic functional analysis of the Caenorhabditis elegans genome using RNAi.</a> Nature. 421, 231-237 (2003).</li>
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<li>Maddox, A. S., Habermann, B., Desai, A., Oegema, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+roles+for+two+C.+elegans+anillins+in+the+gonad+and+early+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Distinct roles for two C. elegans anillins in the gonad and early embryo.</a> Development. 132, 2837-2848 (2005).</li>
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<li>Audhya, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+complex+containing+the+Sm+protein+CAR-1+and+the+RNA+helicase+CGH-1+is+required+for+embryonic+cytokinesis+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A complex containing the Sm protein CAR-1 and the RNA helicase CGH-1 is required for embryonic cytokinesis in Caenorhabditis elegans.</a> J. Cell Biol. 171, 267-279 (2005).</li>
<li>Maddox, A. S., Lewellyn , L., Desai, A., Oegema, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anillin+and+the+septins+promote+asymmetric+ingression+of+the+cytokinetic+furrow%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">Anillin and the septins promote asymmetric ingression of the cytokinetic furrow.</a> Dev. Cell. 12, 827-835 (2007).</li>
<li>Dorn, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actomyosin+tube+formation+in+polar+body+cytokinesis+requires+Anillin+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Actomyosin tube formation in polar body cytokinesis requires Anillin in C. elegans.</a> Curr. Biol. 20, 2046-2051 (2010).</li>
<li>Calixto, A., Ma, C., Chalfie, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+neuronal+RNAi+in+C.+elegans+using+SID-1%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Enhanced neuronal RNAi in C. elegans using SID-1.</a> Nat. Methods. 7, 554-559 (2010).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Este protocolo descreve o uso de vários tipos de microscopia de divisões celulares imagem durante meados embriogénese. Em particular, este protocolo destaca como a imagem da divisão de neuroblastos, células que podem facilitar epidérmica morfogênese. Comunicação célula-célula é importante para a formação de tecidos durante o desenvolvimento de metazoários e C. elegans é um excelente modelo para estudar a formação de tecido in vivo. Um evento que retrata muito bem a interação de tecidos é epidérmica mor...

Embora existam protocolos que descrevem como a divisão celular imagem no início do C. elegans embrião, este protocolo descreve como a divisão celular imagem dentro de um tecido em meados embriogênese. Um dos maiores desafios em imagem organismos durante o desenvolvimento tem sido a sua sensibilidade a fototoxicidade. No entanto, o aumento da acessibilidade a fiação microscópios confocal disco ou microscópios de campo varreram permitiu aplicações de imagem mais difundida. Ambos os sistemas utilizam lasers de estado sólido e de luz difusa, o que limita os níveis de UV que os organismos são expostos. No entanto, estandes Widefield ainda pode ser usado para geração de imagens in vivo, particularmente se eles são equipados com câmeras com alta sensibilidade (por exemplo EMCCD), controle de abertura e controle de luz (por exemplo, LEDs ou lâmpadas de mercúrio ajustável). Este protocolo descreve como usar um sistema confocal base ou um sistema de campo amplo para a divisão celular imagem dentro desenvolvimento C. elegans &lt;/ Em&gt; embriões. Como um exemplo, nós descrevemos como a imagem da divisão celular neuroblasto. Os neuroblastos podem facilitar epidérmico morfogénese fornecendo estímulos químicos ou mecânicos para as células epidérmicas sobrepostas, e fornecer um excelente exemplo da importância da comunicação intercelular para a formação dos tecidos. Caenorhabditis elegans é um organismo modelo ideal para estudos baseados microscopia devido à sua transparência e organização do tecido simples 1. Além disso, C. elegans é passível de métodos genéticos e RNAi, e uma vez que muitos dos seus genes têm homólogos humanos, ele pode ser usado para identificar os mecanismos conservadas para a formação de tecido de 2-5. Em C. elegans formação da epiderme ocorre durante o meio embriogênese, quando o embrião tem&gt; 300 células. Epidermal morfogénese consiste em várias fases principais durante os quais o embrião é colocado entre uma camada de células epidérmicas que se contraem e se estendem ao transformar o embryo de uma forma ovóide na forma alongada de um verme 6. Invólucro ventral descreve um desses eventos morfogenéticas, quando as células da epiderme ventral migrar em direcção à linha média ventral, para cobrir a superfície ventral do embrião (figura 1). Em primeiro lugar, dois pares de células anteriores localizado Leading Edge migrar para a linha média ventral, onde se aderem e se fundem com seus vizinhos contralateral 6. Esta é seguida pela migração de células de bolso posterior localizado, que formam cunha como formas criando uma bolsa ventral 6-7. O mecanismo que fecha a bolsa não é bem compreendida. Uma possibilidade é que uma estrutura contrátil actina miosina supracellular liga as células de bolso juntos em um cordão da bolsa como a moda, semelhante a cicatrização de feridas 8. Curiosamente, a migração de algumas das células de bolso é mediada por subconjuntos específicos de neuroblastos subjacentes 9 (precursores neuronais que são encontrados sob a epidermis, Figura 1B). Estudos anteriores mostraram que os neuroblastos regular a migração das células da epiderme ventral e invólucro ventral. VAB-1 (receptor de Efrina) e VAB-2 (ligando de Efrina) são altamente expressas em neuroblastos e facilitar a separação do anterior e posterior neuroblastos um do outro, e mutações em vab-1 ou vab-2 causa recinto ventral fenótipos 10-13. No entanto, as experiências mostraram que o promotor de salvamento também é necessário vab-1 nas células da epiderme ventral sobrepostas e receptores para outras pistas de orientação secretadas pelas neuroblastos são expressos nas células da epiderme ventral 9. Embora as mutações em qualquer um desses receptores causar fenótipos gabinete ventral, não está claro se os defeitos surgem devido a problemas no posicionamento neuroblasto ou devido à falha das células epidérmicas ventrais para responder a orientação cues 14. Alterando a divisão de neuroblastos without afetando sua capacidade de secretar pistas de orientação poderia lançar luz sobre o papel de neuroblastos e sua capacidade de fornecer entrada mecânica durante epidérmica morfogênese. Recentemente, verificou-se que um gene de divisão celular, ani-1 (anillin) é altamente expressa em neuroblastos (Figura 2A) e a sua exaustão faz com defeitos divisão neuroblastos. Curiosamente, estes embriões exibir fenótipos gabinete ventral (Fotopoulos, Wernike e Piękny, observações não publicadas). Anillin é necessário para a divisão celular e, particularmente, para a citocinese, a qual descreve o processo pelo qual uma célula mãe divide fisicamente em duas células filhas. Cytokinesis é impulsionada pela formação de um anel contrátil actomiosina, que precisa ser rigidamente controlado no espaço e no tempo para garantir que ele está corretamente juntamente com a segregação de cromátides irmãs. O regulador mestre de citocinese metazoan é RhoA (RHO-1 em C. elegans), uma pequena GTPase que é umctive em sua forma ligada a GTP. O GEF Ect2/ECT-2 ativa RhoA, após o qual RhoA-GTP interage com efetores downstream que formam o anel contrátil e mediam seu ingresso 15. Anillin é uma proteína do domínio de multi que se liga a RhoA, através do seu terminal C e a actina e miosina, através do seu terminal-N. Anillin é necessário para estabilizar a posição do anel contráctil, em células de mamíferos ou de Drosophila S2 16. Esgotamento Anillin provoca anéis contráteis a sofrer oscilações laterais e citocinese eventualmente falhar formando células multinucleadas 17-19. Curiosamente, apesar de C. elegans ani-1 Coordenadas actomiosina contratilidade no embrião inicial, isso não é essencial para a citocinese. No entanto, como descrito acima, é necessária uma ani-1 para neuroblastos citocinese durante meados de embriogénese (Fotopoulos, Wernike e Piękny, observações não publicadas). Falha Cytokinesis alteraria o número ea posição dos neuroblastos e poderia afetar o locção de pistas de orientação química, ou que poderiam alterar as propriedades mecânicas do tecido. Ambos os modelos destacam o papel não-autônomos de neuroblastos para o gabinete de ventral, ea importância da comunicação tecido-tecido durante o desenvolvimento embrionário. Este protocolo experimental descreve como a divisão celular durante a imagem C. elegans meados embriogênese usando microscopia de fluorescência. A maioria dos ensaios que estudam os mecanismos de divisão celular foram realizados em células individuais dentro de pratos de cultura (p. ex. HeLa ou células S2) ou em embriões precoces, com um número limitado de células (por exemplo, C. elegans embrião de uma célula, de Xenopus, ou Echinoderm embriões). No entanto, é importante também para estudar a divisão celular nos tecidos, uma vez que existem sinais externos que podem influenciar o tempo e de colocação do plano de divisão. Além disso, as células podem fornecer pistas químicas ou mecânicas para influenciar o desenvolvimento do tecido vizinhos, e é importante para entender como comunicação intercelular ajuda para formar tecidos durante o desenvolvimento.

<table><tbody><tr><td>Agar</td><td>BioShop Canadá Inc.</td><td>#AGR001.1</td><td>Para fazer placas C. elegans NGM e RNAi</td></tr><tr><td>Agar</td><td>Bio Basic Inc.</td><td>#9002-18-0</td><td>Para fazer placas de ágar LB de bactérias</td></tr><tr><td>Agarose</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#AGA001.500</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo anti-camundongo Alexa Fluor 488</td><td>Life Technologies Corporation (Invitrogen)</td><td>#A11029</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo anti-camundongo anti-GFP</td><td>Roche Applied Science</td><td>#11814460001</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo anti-coelho Alexa Fluor 568</td><td>Life Technologies Corporation (Invitrogen)</td><td>#A11011</td><td></td></tr><tr><td>Ampicilina</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#AMP201.5</td><td>Armazene o pó a 4 &graus; C e ampicilina dissolvida a -20 &ampicilina; C</td></tr><tr><td>Bactopetone&nbsp; (peptona-A)</td><td>Bio Básico Inc.</td><td></td><td></td>#G213</tr><tr><td>CaCl2 (cloreto de cálcio)</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#C302.1</td><td></td></tr><tr><td>Colesterol</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#CHL380.25</td><td>Dissolver em etanol</td></tr><tr><td>DAPI&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>#D9542</td><td>Use para corar ácidos nucleicos (DNA)</td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#GLY001.1</td><td></td></tr><tr><td>IPTG (isopropiltio-&beta;-galactosídeo)</td><td>Bio Basic Inc.</td><td># 367-93-1</td><td>Armazene o pó e o IPTG dissolvido a -20 &deg; C</td></tr><tr><td>KH2PO4 (fosfato de potássio, monobásico)</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#PPM666.1</td><td></td></tr><tr><td>K2HPO4 (fosfato de potássio, dibásico)</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#PPD303.1</td><td></td></tr><tr><td>L4440&nbsp; (vetor de alimentação)</td><td>Addgene</td> <td># 1654</td><td>Mantenha como estoque de glicerol em -80 &deg; C</td></tr><tr><td>MgSO4&nbsp; &nbsp; (sulfato de magnésio)</td><td>BioShop Canadá Inc.</td><td>#MAG511.500</td><td></td></tr><tr><td>NaCl (cloreto de sódio)</td><td>Bio Basic Inc.</td><td>#7647-14-5</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4 (fosfato de sódio, dibásico)</td><td>Bio Basic Inc.</td><td>#7558-79-4</td><td></td></tr><tr><td>Soro de Burro Normal (NDS)</td><td>Wisent Bioproducts</td><td>#035-110</td><td></td></tr><tr><td>n-Propil-3,4,5-trihidroxibenzoato (galato de propila)</td><td>Alfa Aesar</td><td>#A10877</td><td></td></tr><tr><td>Poli-L-lisina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>#P8920</td><td>Para resultados ótimos, revestirá lâminas de microscópio três vezes&nbsp;</td></tr><tr><td>Estreptomicina</td><td>BioShop Canadá Inc.</td><td>#STP101,50</td><td>Armazene o pó a 4 & C e estreptomicina dissolvida a -20 &graus; C</td></tr><tr><td>Tetraciclina</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#TET701.10</td><td>Armazene o pó a 4 & graus; C e tetraciclina dissolvida a -20 & C</td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Bio Basic Inc.</td><td>CAS # 9005-64-5</td><td></td></tr><tr><td>Triptona</td><td>BioShop Canadá Inc.</td><td>#TRP402.500</td><td></td></tr><tr><td>Extrato de Levedura</td><td>Bio Basic Inc.</td><td>#8013-01-2</td><td></td></tr></tbody></table>

visualizando neuroblasto cytokinesis durante<em&gt; c. elegans</em&gt; embriogênese

Visualizing Neuroblast Cytokinesis During C. elegans Embryogenesis

Este protocolo descreve a utilização de microscopia de fluorescência para a imagem a divisão das células dentro desenvolvendo Caenorhabditis elegans embriões. Em particular, este protocolo se concentra em como a imagem dividindo neuroblastos, que são encontrados debaixo das células da epiderme e podem ser importantes para epidérmica morfogênese. Formação de tecido é crucial para o desenvolvimento metazoan e depende de estímulos externos a partir de tecidos vizinhos. C. elegans é um excelente organismo modelo para estudar a morfogênese do tecido in vivo devido à sua transparência e organização simples, fazendo com que seus tecidos fáceis de estudar via microscopia. Invólucro ventral é o processo em que a superfície ventral do embrião é coberto por uma única camada de células epiteliais. Este evento é pensado para ser facilitado pelas neuroblastos subjacentes, que fornecem sinais de orientação química de mediar a migração das células epiteliais sobre jacentes. No entanto, os neuroblastos são altamente proliferativo e também podem agircomo um substrato mecânico para as células da epiderme ventral. Estudos utilizando este protocolo experimental pode descobrir a importância da comunicação intercelular durante a formação do tecido, e pode ser utilizada para revelar o papel dos genes envolvidos na divisão celular em tecidos em desenvolvimento.

Este protocolo experimental descreve como a divisão celular imagem em C. elegans embriões durante meados embriogênese. Em particular, ela descreve como neuroblastos de imagem, o que pode facilitar epidérmica morfogênese. Epidermal morfogênese ocorre devido a uma combinação de mudanças no formato de células epidérmicas, migração e adesão, mas também depende de estímulos químicos ou mecânicos dos neuroblastos subjacentes (Figura 1B). Os neuroblastos secretam pistas de orientação que são recebidos...

Este protocolo descreve como as células em divisão imagem dentro de um tecido em Caenorhabditis elegans embriões. Embora vários protocolos descrevem como a divisão celular imagem no embrião precoce, este protocolo descreve como imagem divisão celular dentro de um tecido em desenvolvimento em meados embriogénese tardia.

Visualizando neuroblasto Cytokinesis Durante<em&gt; C. elegans</em&gt; Embriogênese

This protocol describes the use of fluorescence microscopy to image dividing cells within developing Caenorhabditis elegans embryos. In particular, this ...

O objetivo geral do experimento a seguir é observar células em divisão dentro de um tecido em desenvolvimento durante a embriogênese de C. elegans. Para estudar genes que controlam a divisão celular, isso é realizado criando ou obtendo uma linhagem de C. elegans que expressa de forma estável marcadores transgênicos que rotulam as células de interesse. Como segundo passo, realiza-se a inativação seletiva de um gene de interesse por meio da alimentação de larvas L4 com D-S-R-N-A por 24 a 48 horas.Os embriões RNAi são coletados de hermafroditas gr&aacute;ficos e transferidos para uma placa de aros para imagem em tempo real. Em seguida, utilizando microscopia de campo amplo ou confocal, os embriões s&atilde;o analisados para visualizar fen&oacute;tipos de divis&atilde;o celular. Os resultados mostrar&atilde;o como os neuroblastos se dividem durante a embriog&ecirc;nese de sea elgin e o papel dos genes necess&aacute;rios para sua divis&atilde;o.Este método pode ajudar a revelar questões fundamentais na área da biologia do desenvolvimento e celular. Por exemplo, este método poderia identificar genes e mecanismos envolvidos na regulação da mitose durante o desenvolvimento tecidual, comunicação célula-célula, migração celular ou polaridade cel

visualizing-neuroblast-cytokinesis-during-c-elegans-embryogenesis

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Nós descrevemos o procedimento para preparar...

Visualização do Sistema Nervoso embrionárias no Whole-mount Drosophila Os embriões

Este artigo descreve uma técnica para a visualização dos eventos iniciais da embriogênese do...

Lapso de tempo Microscopia de embriogênese inicial em Caenorhabditis elegans

Fonte: Williams, A. L., et al. Imagem de lapso de tempo multifóton para visualizar o desenvolvimento em tempo real: visualização de células migratórias da crista neural em embriões de peixe-zebra. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo mostra um protocolo de imagem de lapso de tempo multifóton para visualizar a migração de células da crista neural em um embrião de peixe-zebra em tempo real com alta resolução.

Visualizando a migração de células da crista neural em um embrião de peixe-zebra usando imagens de lapso de tempo multifóton

Neural mitose de células progenitoras é um parâmetro crítico da neurogénese. Muito do nosso entendimento da mitose progenitor neural é baseado na análise de tecido fixo. Imagens ao vivo em fatias de cérebro de embriões é uma técnica versátil para avaliar a mitose com resolução temporal e espacial de alta em um ambiente controlado.

Imagens ao vivo da mitose no desenvolvimento Cortex embrionárias de camundongos

Aqui é mostrado como rastrear e quantificar os processos de desenvolvimento em C. elegans. Os métodos apresentados são baseados em ferramentas de código aberto que podem ser facilmente implementadas. É demonstrado como reconstruir modelos 3D de forma celular, como rastrear manualmente estruturas subcelulares e como analisar o fluxo contrátil cortical.

Rastreamento e quantificação processos de desenvolvimento em<em&gt; C. elegans</em&gt; Como usar as ferramentas de código aberto

Este trabalho detalha um método de imuno-histoquímica padrão para visualizar as projeções de neurônios motores de embriões de Drosophila melanogaster em estágio final 16. A preparação em fileira de embriões fixos corados com anticorpo FasII fornece uma ferramenta poderosa para caracterizar os genes necessários para a identificação do axônio do motor e o reconhecimento do alvo durante o desenvolvimento neural.

Visualização do Padrão de Projeção Axonal de Neurônios de Motor Embrionários em<em&gt; Drosophila</em

Aqui, nós apresentamos uma aproximação combinatória usando a microscopia de alta resolução, as ferramentas computacionais, e a rotulagem da único-pilha em embriões vivos de C. elegans para compreender a única dinâmica da pilha durante o neurodevelopment.

Microscopia de folha de luz isotrópica e análise de linhagem de células automatizadas para catalogar Caenorhabditis elegans Embryogenesis com resolução subcelular

Este trabalho descreve um protocolo semi-alta de supressão que permite imagens simultâneas de lapso de tempo 3D de embriaênese embrionária em embriões de 80-100 C. elegans em uma única corrida noturna. Além disso, as ferramentas de processamento e visualização de imagens são incluídas para simplificar a análise de dados. A combinação destes métodos com tensões personalizadas do repórter permite a monitoração detalhada do embryogenesis.

Um método de imagem semi-alta-fonte e um kit de ferramentas de visualização de dados para analisar o desenvolvimento embrionário de C. elegans

Aqui, apresentamos um protocolo para preparar e montar embriões de Caenorhabditis elegans , registrando o desenvolvimento sob um microscópio 4D e traçando a linhagem celular.

Microscopia 4D: Desvendando caenorhabditis elegans Desenvolvimento Embrionário usando Microscopia Nomarski

Aqui, apresentamos protocolos e ferramentas para visualizar o cálcio durante a fertilização e embriogênese inicial usando um repórter de cálcio geneticamente codificado expresso na linha germinativa do nematóide modelo C. elegans.

Visualização in vivo de transientes de cálcio durante a fertilização e desenvolvimento inicial em C. elegans

Aprenda a visualizar citocinese em neuroblastos durante a embriogênese de Caenorhabditis elegans usando marcadores transgênicos e microscopia confocal. Este método permite estudar genes essenciais para a divisão celular em tecidos em desenvolvimento.

Visualizando neuroblasto Cytokinesis Durante

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