Visualizando a migração de células da crista neural em um embrião de peixe-zebra usando imagens de lapso de tempo multifóton

Comece com um embrião de peixe-zebra transgênico vivo e descorionado embebido em agarose de baixo ponto de fusão e colocado em uma câmara cheia de meio embrionário.

O embrião expressa células da crista neural marcadas com proteína fluorescente verde aprimorada (EGFP).

Posicione a câmara no microscópio stage. Usando iluminação de campo claro, ajuste a objetiva para focar e centralizar o embrião no campo de visão.

Mude para o objetivo de imersão em água e concentre-se novamente no embrião.

Ajuste os parâmetros de imagem para adquirir imagens Z-stack da borda lateral para a medial, capturando a largura do olho.

Desligue a iluminação de campo claro, cubra o palco e inicie a imagem de lapso de tempo.

Reabasteça a câmara com mídia conforme necessário durante a geração de imagens.

Sob iluminação a laser, as células da crista neural fluorescem.

Visualize a migração dessas células do tubo neural para as regiões craniofaciais, ao redor do olho em desenvolvimento para preencher o mesênquima periocular e o processo frontonal, e ventralmente para formar os arcos faríngeos.

Depois de colocar toda a configuração no palco do microscópio, de acordo com o protocolo de texto, use a objetiva de cinco vezes pa