Tandem congelamento de pressão alta e rápida substituição em congelamento dos tecidos vegetais por Microscopia Eletrônica de Transmissão

O objetivo geral do experimento a seguir é imobilizar as estruturas celulares das células vegetais por alta pressão, congelamento e substituição por congelamento rápido para visualização subsequente por microscopia eletrônica de transmissão. Isso é conseguido preparando cuidadosamente uma amostra de tecido para congelamento, codificando-a com um crioprotetor para garantir que o tecido seja minimamente danificado durante o congelamento de alta pressão. Como segunda etapa, a amostra é rapidamente congelada sob alta pressão, o que imobiliza os componentes celulares e limita a formação de gelo cristalino, resultando em células com morfologia intacta.

Em seguida, a substituição rápida e livre é realizada para substituir a água celular por solventes orgânicos e introduzir fixadores como o tetróxido de ósmio, ligando e estabilizando as ultraestruturas celulares. São obtidos resultados que mostram que o congelamento de alta pressão e a substituição rápida por congelamento preservam efetivamente as estruturas celulares e a morfologia da planta com base na microscopia eletrônica de transmissão. A principal vantagem desta técnica sobre os métodos existentes, como a fixação química convencional, é que o HPF imobiliza o conteúdo celular em milissegundos, minimizando a formação de artefatos.