Isolamento e Quantitative Immunocytochemical caracterização de células Miogênica primários e fibroblastos de músculo-esquelético humano

O objetivo geral deste procedimento é separar as duas principais populações de células obtidas a partir de amostras de biópsia muscular humana com alta eficiência e rendimento para permitir a avaliação de marcadores fenotípicos e de fatores de transcrição específicos. Isso é conseguido pela primeira dissociação, uma amostra de biópsia de músculo humano em uma única suspensão de célula na segunda etapa. Após uma cultura de sete dias, as células são separadas por esferas imunomagnéticas classificadas em CD 56 positivas, que são células miogênicas e frações CD 56 negativas, que são os fibroblastos.

As células são então coradas e fotografadas para os marcadores fenotípicos e proteicos desejados de interesse. Em última análise, a microscopia de imunofluorescência e a análise quantitativa de imagens podem ser usadas para medir a intensidade de fatores de transcrição localizados nucleares selecionados dentro das populações de células classificadas. As principais vantagens desta técnica, que usa classificação de células imunomagnéticas em relação aos métodos existentes, como classificação de células ativadas por fluorescência, são que ela é suave, permite excelente classificação de células musculares primárias humanas com alto rendimento e viabilidade e pode ser realizada rapidamente.