Name: Um método simples e barato para a determinação da sensibilidade Fria e Adaptação no Mice (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-17T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 35 s
Description: Aprenda a medir a sensibilidade ao frio e adaptação térmica em camundongos usando o ensaio Cold Plantar. Este método simples avalia respostas de retirada da pata em temperaturas entre 30°C e 5°C.

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Os autores gostariam de agradecer as contribuições de todo o Gereau Lab para a edição do manuscrito. Este trabalho é apoiado pelos fundos NINDS 1F31NS078852 para DSB e fundo NINDS NS42595 para RWG.

Todos os protocolos de mouse estavam de acordo com os institutos nacionais de saúde e orientações foram aprovadas pelo Comitê de animal Estudos da Escola de Medicina da Universidade de Washington (St. Louis, MO). 1. Preparando a Placa e Recintos Testing <ol><li> Limpar a superfície do vidro. </li><li> Segurar a sonda termopar filamento do tipo T à superfície no meio da placa de vidro com fita adesiva de laboratório. </li><li> Colocar o animal independente sobre a placa de vidro em uma única linha ao longo do meio da placa. </li><li> Passe a sonda termopar através do cerco animal centro e ligar para o registrador de dados. Vire o registrador de dados enquanto a desativação do recurso de auto-desligamento, e anexar o registrador de dados para o computador com o cabo fornecido. <ol><li> Se a gravação da temperatura da placa durante o experimento, abra o software registrador de dados para começar a gravar temperaturas placa. </li><li> Se necessário, ajustar o software de recabo a temperatura da placa de uma vez a cada segundo. </li><li> Começar a gravar temperaturas usando o software fornecido com o registrador de dados térmico. </li></ol></li><li> Separe o recinto com pastilhas pretas para evitar a interação visual entre camundongos. </li><li> Posição espelhos por baixo do vidro de modo que a parte de baixo das caixas é visível a partir de uma posição sentada confortável. </li></ol> 2. O aquecimento / resfriamento da placa de vidro <ol><li> Preencha caixas de alumínio com água aquecida, gelo molhado, ou gelo seco e posicioná-los de forma adequada sobre a placa de vidro (pacotes de folhas de alumínio preenchidos com gelo seco também pode ser usado para resfriar o vidro; Figura 1) 2. <ol><li> Para os testes, a 30 ° C, posicione as caixas de alumínio de aproximadamente 0,25 &#39;&#39; longe dos recintos de animais (Figura 2B) 2. <ol><li> Definir um circulador de água aquecida em ambos os lados da placa de vidro. Definir o circulador para 45 - 60 ° C, e nósenviar um e-lo para preencher as caixas de alumínio com um fluxo constante de água quente (Figura 1C) 2. </li><li> Posicionar os circuladores de tal modo que a água quente a partir das caixas de alumínio escoa directamente de volta para dentro do reservatório da bomba de circulação em cada um dos lados (Figura 1C) 2. </li></ol></li><li> Para os testes à temperatura ambiente, deixar as caixas vazias (Figura 2) 2. </li><li> Para os testes a 17 ° C, posicione as caixas de aproximadamente 0,25 &#39;&#39; longe dos recintos de animais de cada lado e encher com gelo molhado (Figura 2) 2. </li><li> Para os testes a 12 ° C, posicionar as caixas de aproximadamente 1,25 &#39;&#39; distância das caixas de cada lado e encher com gelo seco (Figura 2) 2. </li><li> Para os testes, a 5 ° C, posicionar as caixas de aproximadamente 0,25 &#39;&#39; distância das caixas de cada lado e encher com gelo seco (Figura 2) 2.<ol><li> Quando arrefecer o copo com gelo seco, verifique se não há ventilação suficiente para evitar o acúmulo de CO 2 no quarto. </li></ol></li></ol></li><li> Espera para o vidro para atingir a gama de temperatura desejada. </li><li> Adicionar os ratos para os compartimentos da placa. NOTA: Um gerador de ruído branco podem ser utilizados para diminuir as perturbações de ruído. </li><li> Aguarde até que os ratos para se aclimatar. NOTA: Em nosso serviço isso leva aproximadamente 2,5 horas, mas isso pode variar significativamente com base nas condições de manipulação e de alojamento dos animais. </li><li> Manter o vidro no intervalo de temperatura desejado, garantindo que as caixas são mantidas cheias de água aquecida, gelo molhado, ou gelo seco. NOTA: Com o nosso aparelho as caixas precisam ser recarregados com gelo aproximadamente a cada 90 min. NOTA: Para a 17 ° C condição, é útil para esvaziar a maior parte da água das caixas de alumínio através dos furos de drenagem antes de enchê-lo com gelo. Isto irá estabilizar a temperatura melhor, e prevento estouro NOTA: A quantidade exacta do gelo seco irá variar sazonal, mas, em geral, mantendo as caixas de mais do que ¼ cheio ao longo de todo o comprimento da caixa, será manter a temperatura constante. </li></ol> 3. Teste o Mice em temperaturas fixas <ol><li> Do lado de fora da sala de comportamento, encher um balde de gelo sobre meio cheio de gelo seco. </li><li> Usando um martelo ou malho, esmagar o gelo seco em um pó fino. NOTA: O excesso de balde irá tornar mais difícil para esmagar completamente o gelo seco em pó. </li><li> Usando uma lâmina de navalha ou tesoura, corte a parte de cima de uma seringa de 3 ml. </li><li> Usando uma agulha de 21 G, picar 3 furos em lados opostos da seringa (total de 6 furos). NOTA: Estes furos vai diminuir a pressão gerada por sublimação, enquanto comprime o gelo seco. A seringa de corte pode ser reutilizada para vários experimentos. </li><li> Pegue na seringa, o pó de gelo seco, e um cronômetro de mão na sala de comportamento. </li><li> Encha a câmara de seringa meio cheio de pó de gelo seco. Segurar a extremidade cortada da seringa de encontro a um objecto chato, e firmemente comprimir o pó usando o êmbolo. Seja cuidadoso; o êmbolo plástico pode entortar ou quebrar com a pressão. Se isso acontecer, substitua o êmbolo de uma seringa nova. </li><li> Estender a ponta do comprimido sedimento gelo seco além da extremidade da seringa. </li><li> Ratos de teste que são completamente em repouso. <ol><li> A 30 ° C, 23 ° C e 17 ° C, os ratinhos de teste, que têm todas as 4 patas sobre o vidro e não se deslocam, mas não totalmente 19 adormecido. </li><li> A 12 ° C e 5 ° C, os ratos de teste que são em 2 patas ou 4 patas e não em movimento ou de salto. </li></ol></li><li> Usando os espelhos para segmentação, gentil mas firmemente alisar o resplendor pellet contra a superfície de vidro debaixo da pata traseira do mouse (Figura 1A) 2. Comece a mão-timer. </li><li> Parar o temporizador e remover o sedimento quando o rato afasta-se do vidro arrefecida. NOTA: O movimento de retrocesso pode ser vertical ou horizontal. <ol><li> Se o mouse se move muito rapidamente a pata e, em seguida, retorna para a superfície de refrigeração, continuar a cronometragem e estimulando até que o rato faz um movimento permanente de distância. NOTA: O nosso laboratório usa um tempo máximo de 20 segundos de estímulo para os ratos, na maioria dos casos. </li></ol></li><li> Repita este procedimento até que o teste pelo menos três valores em cada pata de cada animal são coletados. Experimentações separadas testando as patas opostos no mesmo rato por, pelo menos, 7 min, e ensaios consecutivos separados em qualquer única pata por, pelo menos, 15 min. </li><li> Se for necessário, utilizam diferentes espessuras de vidro para gerar diferentes taxas de arrefecimento (Figura 3) 1. NOTA: A taxa de arrefecimento está inversamente correlacionada com a espessura do vidro. </li></ol> 4. Testando o Ratos Durante Fria Adaptação NOTA: Este é um protocolo alternativo que permite testar como o plat de vidroe esfria, ao invés de uma vez que a placa se estabilizou e os ratos estão totalmente adaptados ao ambiente frio. <ol><li> Siga as instruções listadas na Seção 1 para configurar o aparelho. </li><li> Siga as instruções indicadas no parágrafo 3 a tomar medidas de base na RT (Figura 7A) 2. </li><li> Pré-resfriar as caixas de alumínio com gelo seco. </li><li> Uma vez que as latências de retirada da linha de base foram medidos, posicione as caixas prï¿½arrefecida na placa aproximadamente 1,25 &#39;&#39; longe dos gabinetes de ambos os lados (Figura 7A, seta rotulado como &quot;gelo seco adicionado&quot;) 2. </li><li> Siga as instruções indicadas no parágrafo 3 a tomar medidas como a placa de vidro esfria, tomando medidas o mais rápido possível. </li></ol>

<ol><li>Brenner, D. S., Golden, J. P., Gereau, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Behavioral+Assay+for+Measuring+Cold+Sensation+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+ONE%22%5BJournal%5D)">A Novel Behavioral Assay for Measuring Cold Sensation in Mice.</a> Plos ONE. 7 (6), 8(2012).</li>
<li>Brenner, D. S., Vogt, S. K., Gereau, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+to+measure+cold+adaptation+in+freely+behaving+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A technique to measure cold adaptation in freely behaving mice.</a> Journal of Neuroscience Methods. , (2014).</li>
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<li>Fujita, F., Uchida, K., Takaishi, M., Sokabe, T., Tominaga, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ambient+Temperature+Affects+the+Temperature+Threshold+for+TRPM8+Activation+through+Interaction+of+Phosphatidylinositol+4%2C5-Bisphosphate%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Ambient Temperature Affects the Temperature Threshold for TRPM8 Activation through Interaction of Phosphatidylinositol 4,5-Bisphosphate.</a> Journal of Neuroscience. 33 (14), 6154-6159 (2013).</li>
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</ol>

Os autores não têm nada a revelar

O CPA pode ser usado para avaliar a sensibilidade ao frio e a adaptação ao frio em camundongos. Ele fornece uma maneira acessível e eficiente de medir as respostas ao frio em animais não contidos e aclimatados em uma ampla variedade de faixas de temperatura. Ele também fornece uma resposta comportamental inequívoca com uma variável de saída facilmente quantificada e analisada. Já foi usado para avaliar alterações na sensibilidade ao frio induzidas por inflamação1, lesão neuropática1, analgésicos...

Medir a capacidade de resposta fria em roedores é importante para melhorar a compreensão dos potenciais mecanismos de sensibilidade frio em seres humanos, tanto em condições normais e patológicas. The Cold Plantar Assay (CPA), originalmente desenvolvido há vários anos um, é projetado para gerar, respostas inequívocas murino comportamentais reprodutíveis a um estímulo frio entregue na RT. Mais recentes melhorias deste ensaio permitiu a medida reprodutível de sensibilidade frio a uma vasta gama de temperaturas de 2. Ambas as versões também são projetados para ser relativamente alto rendimento, e barato de usar. Uma grande quantidade de progresso tem sido feito na compreensão dos mecanismos de sensibilidade frio usando outros métodos comportamentais. Um método é o teste de evaporação de acetona, enxugando ou que envolve a pulverização acetona na pata do rato e medindo a quantidade de tempo que o rato gasta sacudindo a 3,4 pata. Infelizmente,as respostas a acetona evaporação são confundidos pela sensação molhada e o cheiro da acetona. Além disso, o estímulo frio que é aplicado no teste de acetona evaporação pode variar de acordo com a quantidade de acetona aplicada, e é difícil de quantificar. Finalmente, os ratinhos lesionados têm respostas mínimas para acetona a linha de base, o que torna impossível de medir a analgesia na ausência de hipersensibilidade com este método. Outro ensaio clássico para respostas frias é o ensaio da ponta da cauda, ​​onde a latência para retirada é medida após a cauda está imerso em 5,6 água fria. Enquanto as respostas comportamentais neste ensaio são inequívocos e o ensaio mede as respostas a uma temperatura específica, os animais devem ser imobilizados durante os testes, o que pode alterar a capacidade de resposta fria através bem descritos mecanismos analgésicos estresse induzido por 7. Outra ferramenta utilizada é o teste de placa fria, que mede o comportamentorespostas dos ratos depois de serem colocados sobre uma placa arrefecida com Peltier 8-10. Enquanto esta ferramenta fornece informações sobre as respostas de animais em temperaturas específicas, ele também tem sido usado de forma inconsistente; diferentes grupos foram medidos diferentes tipos de resposta incluindo o número de saltos 8,11, a latência a primeira resposta 8,11- 13, e o número de pata elevadores 11,13,14 com resultados muito diferentes. O teste de placa de frio é também relativamente baixa taxa de transferência uma vez que apenas um animal pode ser testada ao mesmo tempo, e necessitam de um dispositivo de Peltier caros e frágeis. O teste de preferência temperatura 2 placa é um derivado normalmente usado para o teste de placa fria, que mede a quantidade relativa de tempo em que os animais passam em 2 placas conectadas de diferentes temperaturas 9,15- 17. Outro ensaio utilizado é semelhante ao ensaio de gradiente térmico, em que a quantidade de tempo que os ratos passam em diferentes zonas de temperaturavariando entre 5 ° C e 45 ° C em uma placa de metal é medida a longo 16. Enquanto estes ensaios permitir a comparação das temperaturas, não está claro se o comportamento representa aversão temperatura ou a preferência de temperatura. Finalmente, o ensaio de placa fria dinâmica tem sido usado para medir como ratos responder às mudanças nas temperaturas ambiente 18. Este método envolve a colocação de ratos em um dispositivo Peltier RT e aumentando-a para 1 ° C enquanto mede o quanto os ratos saltar ou lamber as patas em diferentes temperaturas de placas. Enquanto isto testa como ratos se adaptar a um ambiente de arrefecimento, ele não fornece uma maneira de testar como os ratos responder a um estímulo frio na definição de uma temperatura ambiente mais fresco. Além disso, requer equipamentos caros para realizar e não fornece uma maneira de se aclimatar ratos para o equipamento de teste antes de medir a sua sensibilidade frio. Para complementar estes ensaios, o CPA testa a ACCLIMAted respostas a um estímulo frio bem definida em uma variedade de faixas de temperatura, ou durante o processo de adaptação a temperaturas ambientes frios. Pode testar-se a 14 ratinhos de cada vez com o nosso aparelho actual, com o potencial de ser barata aumentada a escala para ensaios de elevado rendimento.

<table><tbody><tr><td>Sonda termopar tipo T</td><td>Physitemp</td><td>IT-24p</td><td>Usado para medir a temperatura da superfície do vidro (http://www.physitemp.com/products/probesandwire/)Placa de</td></tr> <tr><td>vidro</td><td>Empresa local de vidro (em St. Louis, Stemmerich Inc)</td><td></td><td>Usamos vidro pirex (flutuador de borosilicato). Nosso laboratório geralmente usa 1/4'', mas 3/16'' e 1/8'' também são úteis</td></tr><tr><td>Registrador de dados térmicos</td><td>Extech</td><td>EA15</td><td>Thermologger para acompanhar a temperatura do vidro (http://www.extech.com/instruments/product.asp?catid=64&prodid=408)</td></tr><tr><td>3 ml Seringa</td><td>BD</td><td>309657</td><td>A parte superior é cortada e o gelo seco é comprimido na seringa para gerar uma sonda fria</td></tr><tr><td>Computador</td><td>Se estiver usando o registrador Extech, qualquer caixa de alumínio funcionará</td><td></td><td></td></tr> As <tr>caixas<td>de oficina</td><td></td><td></td> de máquinas da Universidade de Washington em St. Louis <td>têm 3' de comprimento, 4,5'' de largura e 3'' de altura com uma tampa selada.&nbsp; Há um furo de 1/2 '' perfurado em um lado curto de cada caixa, perto do fundo. Esses orifícios são preenchidos com torneiras de borracha quando as caixas são preenchidas com gelo úmido ou água quente.</td></tr><tr><td>Circulador de água aquecida</td><td>VWR</td><td></td><td>Qualquer modelo de circulador de água com bomba funcionará</td></tr><tr><td>Agulha de 21 G</td><td>BD</td><td>305165</td><td>O tamanho exato da agulha não é importante</td></tr><tr><td>Temporizador</td><td></td><td></td> manual <td>Qualquer temporizador manual funcionará</td></tr><tr><td>Espelho</td><td></td><td></td><td>Qualquer espelho plano funcionará</td></tr></tbody></table>

um método simples e barato para a determinação da sensibilidade fria e adaptação no mice

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

A hipersensibilidade ao frio é um problema clínico grave, afetando um amplo subconjunto de pacientes e causando reduções significativas na qualidade de vida. O ensaio plantar frio permite a avaliação objetiva e barata da sensibilidade ao frio em camundongos e pode quantificar tanto a analgesia quanto a hipersensibilidade. Os ratos são aclimatados em uma placa de vidro e uma pelota de gelo seco comprimido é mantida contra a superfície de vidro sob a pata traseira. A latência para retirada do vidro de resfriamento é usada como uma medida de sensibilidade ao frio.
A sensação de frio também é importante para a sobrevivência em regiões com mudanças sazonais de temperatura e, para manter a sensibilidade, os animais devem ser capazes de ajustar seus limiares de resposta térmica para corresponder à temperatura ambiente. O Cold Plantar Assay (CPA) também permite o estudo da adaptação às mudanças na temperatura ambiente, testando a sensibilidade ao frio de camundongos em temperaturas que variam de 30 °C a 5 °C. Os ratos são aclimatados conforme descrito acima, mas a placa de vidro é resfriada até a temperatura inicial desejada usando caixas de alumínio (ou pacotes de papel alumínio) cheias de água quente, gelo úmido ou gelo seco. A temperatura da placa é medida no centro usando uma sonda de termopar tipo T de filamento. Quando a placa atingir a temperatura inicial desejada, os animais são ensaiados conforme descrito acima.
Este ensaio permite testar camundongos em temperaturas que variam de inócuas a nocivas. O CPA produz respostas comportamentais inequívocas e consistentes em camundongos não feridos e pode ser usado para quantificar tanto a hipersensibilidade quanto a analgesia. Este protocolo descreve como usar o CPA para medir a hipersensibilidade ao frio, analgesia e adaptação em camundongos.

As respostas comportamentais induzidos de ratinhos a partir de 30 ° C, 23 ° C, 17 ° C, e 12 ° C são altamente reprodutível (Figura 4A) 20. A fim de medir o estímulo frio sendo gerado sob a pata traseira, os ratos foram anestesiados com uma mistura de cetamina / xilazina / acepromazina e cocktail suas patas foram assegurados no vidro na parte superior de um termopar de tipo T filamento (Figura 4B) 20. O vidro foi arrefecida ou aquecida para a faixa de teste desejada...

O Ensaio Plantar a Frio (CPA) mede a capacidade de resposta ao frio entre 30 °C e 5 °C e também pode medir a adaptação ao frio. Este protocolo descreve como usar o CPA para medir a hipersensibilidade ao frio, analgesia e adaptação em camundongos.

Um método simples e barato para a determinação da sensibilidade Fria e Adaptação no Mice

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

O objetivo geral deste procedimento é medir a resposta ao frio em camundongos. Isso é realizado primeiramente resfriando ou aquecendo o vidro até a temperatura desejada. O segundo passo é aclimatar os camundongos até que estejam em repouso.O terceiro passo é comprimir o pó de gelo seco em um pellet dentro de uma seringa. O passo final é testar os camundongos utilizando o pellet de gelo seco e um cronômetro para medir a latência de retirada. Em última análise, o ensaio com o aplicador de frio é usado para medir a resposta ao frio e a adaptação em camundongos livres para se movimentar.A principal vantagem do nosso ensaio em comparação com ensaios atualmente existentes, como o teste da acetona e o teste da placa fria, é que podemos avaliar tanto a hipersensibilidade quanto a analgesia em condições basais sob diversas circunstâncias ambientais. Embora este método possa fornecer informações sobre a resposta ao frio dos camundongos, ele também pode ser utilizado em outros sistemas, como o macaco, o rato e os seres humanos. O procedimento será demonstrado por Daniel Brenner, um estudante de pós-graduação no meu laboratório.Após limpar a superfície de vidro, fixe o termopar do tipo T à superfície no centro da placa de vidro com fita laboratorial. Coloque as recintos para animais sobre a placa de vidro em uma única linha ao longo do centro. Em seguida, passe o termopar através do recinto central para animais e conecte-o ao registrador de dados.Ligue o registrador de dados e desative a função de desligamento automático. Conecte o registrador de dados ao computador com o cabo fornecido. Separe as áreas de alojamento dos animais com divisórias pretas para evitar interações visuais entre os camundongos e posicione espelhos sob o vidro para permitir a visualização da parte inferior das áreas.Para iniciar os testes, coloque caixas de alumínio sobre a placa de vidro em ambos os lados do animal, com as caixas a uma distância fixa. Se o teste for realizado a 30 graus Celsius, conecte circuladores de água aquecida às caixas de alumínio posicionadas a 0,25 polegadas da caixa que contém o animal. Encha as caixas com água até a metade, com os orifícios de drenagem tampados.Posicione os circuladores de modo que a água quente dos recipientes de alumínio escoe diretamente de volta para o reservatório do circulador em cada lado. Você precisará adicionar água a cada circulador. Uma vez que as caixas metálicas estejam cheias, ajuste os circuladores para 45 a 60 graus Celsius e encha as caixas de alumínio com um fluxo contínuo de água quente.Quando os vidros atingirem a faixa de temperatura desejada, coloque os camundongos nas cercas sobre a placa. Permita que os camundongos se aclimatizem ao aparelho e à temperatura. Esses camundongos irão se aclimatar por 2,5 horas.Quando estiver próximo ao fim do período de aclimatação, encha um balde de gelo até metade com gelo seco e use um martelo ou marreta para triturar o gelo seco em pó. Faça isso fora da sala de comportamento para evitar perturbar os camundongos. Em seguida, use uma lâmina de barbear ou tesoura para cortar a parte superior de uma seringa de três mililitros.Em seguida, use uma agulha de 21 gauge para fazer dois conjuntos de três furos em lados opostos da seringa, a fim de reduzir a pressão gerada pela sublimação ao comprimir o gelo seco novamente na sala comportamental; encha a câmara da seringa até a metade com pó de gelo seco. Mantenha a extremidade cortada da seringa contra um objeto plano e comprima firmemente o pó usando o êmbolo. Estenda a ponta da pastilha de gelo seco comprimido para além da borda da seringa.Agora, teste os camundongos que têm as quatro patas no vidro e não estão se movendo, mas que não estão completamente adormecidos. Usando os espelhos para mirar, pressione suave mas firmemente o comprimido plano contra a superfície de vidro sob a pata traseira do camundongo. Simultaneamente, pressione o botão de início em um cronômetro.Quando o camundongo se afastar do vidro resfriado, seja verticalmente ou horizontalmente, pare o cronômetro e remova o pellet de gelo seco. No entanto, se o camundongo mover brevemente a pata e depois retorná-la à superfície de resfriamento, continue a contagem do tempo e a estimulação até que o camundongo se afaste permanentemente. Se o camundongo não se afastar do vidro resfriado, interrompa o estímulo após 20 segundos.Repita este procedimento de teste até que pelo menos três valores sejam coletados em cada pata do animal para testar camundongos a 17 graus Celsius. Repita o experimento conforme acabou de ser demonstrado, mas, em vez de encher as caixas de alumínio com água aquecida, utilize gelo úmido e posicione as caixas a aproximadamente 0,25 polegadas de distância das instalações para testar os camundongos. A 12 graus Celsius, utiliza-se gelo seco, mas as caixas são colocadas a 1,25 polegadas de distância das instalações.Este protocolo alternativo testa os camundongos enquanto a temperatura da placa está diminuindo, ao invés de fazê-lo após a estabilização da temperatura. Isso nos permite testar a adaptação dos camundongos enquanto ela está ocorrendo. Após montar o equipamento, realize o experimento conforme descrito anteriormente para obter medidas à temperatura ambiente.Uma vez que as latências basais tenham sido medidas à temperatura ambiente, utilize o procedimento previamente demonstrado para preencher as caixas de alumínio vazias com gelo seco e coloque-as a 1,25 polegadas das cubas, em ambos os lados. Por fim, repita o experimento para obter novas medidas de latência à medida que a placa de vidro esfria.Realizar medições com a maior frequência possível. Este gráfico mostra a latência média de retirada em camundongos iniciando em 12 graus Celsius, 17 graus Celsius, 23 graus Celsius ou 30 graus Celsius. As latências de retirada são consistentes em todas as temperaturas.Os efeitos analgésicos podem ser medidos utilizando o teste do plantar frio, conforme mostrado aqui. A injeção subcutânea de 1,5 miligramas por quilograma de morfina aumenta a latência de retirada dos camundongos 30 minutos após a injeção, conforme medido por uma análise inovadora de dois fatores com teste post-hoc de Bonferroni 60 minutos após a injeção. Não há diferença significativa entre os grupos injetados com morfina e com solução salina.A hipersensibilidade de camundongos também pode ser medida aqui. A injeção intraplantar de 10 microlitros de adjuvante completo de Freund reduz significativamente a latência de retirada dos camundongos duas e três horas após a injeção, conforme medido por uma análise de variância de dois fatores com teste post hoc de Bonferroni. Os mesmos camundongos receberam injeções subcutâneas de morfina após quatro horas e todas as latências de retirada às 4,5 horas foram significativamente maiores em comparação com as três horas, conforme medido por uma análise de variância de um fator com teste post hoc de Bonferroni.Uma vez que a morfina foi metabolizada, 5,5 horas após a injeção, os camundongos injetados com CFA ainda apresentavam latências de retirada menores do que os camundongos injetados com solução salina, conforme medido por um teste de análise de variância bidirecional com teste post-hoc de Bonferroni. A adaptação a mudanças ambientais de resfriamento pode ser medida em tempo real com este ensaio. Camundongos selvagens apresentam a mesma latência de retirada à medida que a placa de vidro esfria, sugerindo que eles se adaptam a temperaturas mais baixas mais rapidamente do que pode ser medido com o CPA, o qual não apresentou diferenças significativas entre quaisquer grupos.No entanto, quando os camundongos são injetados com U 7 3 1 2 2 para bloquear a hidrólise do PIP dois, sua latência diminui à medida que a temperatura da placa diminui, sugerindo uma adaptação prejudicada. Uma vez dominada, esta técnica pode ser realizada em cinco horas, incluindo o tempo de aclimatação. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como medir a sensação de frio e a adaptação em camundongos acordados e livremente comportados. Não se esqueça de que trabalhar com gelo seco pode ser excepcionalmente perigoso e de que é necessário garantir ventilação adequada e livre circulação de ar durante este método.

a-simple-inexpensive-method-for-determining-cold-sensitivity

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Aqui, nós descrevemos um procedimento rápido, simples e confiável para determinar a menor temperatura em que ratos ou camundongos mostram comportamento...

Determinação rápida do limiar térmico nociceptivo em ratos diabéticos

As medições eletrônicas de von Frey são uma alternativa eficaz e aprimorada aos filamentos de von Frey clássicos, pois permitem a medição rápida e precisa das mudanças nos limiares de retirada mecânica de roedores para estímulos de pressão aplicados continuamente antes e depois de um evento inflamatório.

Medindo Mudanças na Tátil sensibilidade na pata traseira de ratos utilizando um aparelho eletrônico von Frey

As reações alérgicas, caracterizada pela ativação de mastócitos e basófilos, são movidos pela ligação cruzada de IgE e liberação de mediadores pró-inflamatórios. A avaliação quantitativa da resposta alérgica pode ser conseguido através de corante azul de Evans para monitorar alterações na permeabilidade vascular após o desafio alérgeno.

Medindo Anafilaxia locais em Ratos

Este manuscrito descreve um protocolo para examinar o sistema olfativo de roedores. O teste de habituação/deshabituação olfativa permitirá que os investigadores determinem se um camundongo se habitua a um odor apresentado repetidamente e se o camundongo demonstra deshabituação quando apresentado a um novo odor.

Testes para Odor Discriminação e habituação em ratos

Apresentamos um teste olfativo simples e imparcial em camundongos. Com este protocolo, a discriminação olfativa, a preferência, a evitação e a sensibilidade a um novo odor em comparação com a água podem ser avaliadas em sessões comportamentais únicas. Este método é indicado para um único experimentador e a análise é baseada no processamento de vídeo assistido por computador.

Simples e Testes Olfativo para Ratos assistido por computador

Aqui demonstramos um novo ensaio para estudar nocicepção frio em larvas de Drosophila. Este ensaio utiliza uma sonda de Peltier-construído sob encomenda capaz de aplicar um estímulo frio nocivo focal e resulta em comportamento quanto ao frio quantificáveis. Esta técnica permitirá ainda dissecção celular e molecular da nocicepção frio.

Romance Ensaio para Fria nocicepção em<em&gt; Drosophila</em&gt; Larvas

Neste artigo nós fornecemos detalhes para os métodos de produção e controle de qualidade de uma proteína de fusão recombinante IL4-10. Também mostramos como testar a eficácia desta proteína para resolver a dor em um modelo do rato da dor inflamatória.

Desenvolvimento de proteínas recombinantes para tratar a dor crônica

Aqui nós apresentamos um novo método para medir com precisão as diferenças de temperatura de corpo em anafilaxia sistêmica passiva (PSA) e modelos de rato de alergia alimentar usando um termômetro infravermelho. Este procedimento tem sido duplicado com precisão em resultados anteriores de PSA.

Medição de temperatura de corpo do mouse usando o termômetro infravermelho durante passiva anafilaxia sistêmica e avaliação de alergia alimentar

Camundongos e ratos são implantados cirurgicamente com transponders de temperatura remotos e, em seguida, habituados ao ambiente de teste e procedimento. As mudanças na temperatura muscular são medidas em resposta a estímulos farmacológicos ou contextuais na gaiola doméstica ou durante a atividade física prescrita (ou seja, caminhada em esteira a uma velocidade constante).

Medindo a termogênese do músculo esquelético em camundongos e ratos

A hipersensibilidade de contato (CHS) é um modelo experimental de murina de dermatite de contato alérgico (ACD). O CHS baseia-se na sensibilização com hapten reativo pintando a pele raspada do peito e abdômen, com um subsequente desafio da pele do ouvido com um hapten diluído, causando uma reação de inchaço que é avaliada de várias maneiras.

Entrar em contato com a Hipersensibilidade como modelo murino de dermatite de contato alérgico

Aprenda a medir a sensibilidade ao frio e adaptação térmica em camundongos usando o ensaio Cold Plantar. Este método simples avalia respostas de retirada da pata em temperaturas entre 30°C e 5°C.

Um método simples e barato para a determinação da sensibilidade Fria e Adaptação no Mice

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