Manchar o tecido correto Every Time nos Blocos Multi-tecidos

O objetivo geral deste procedimento é construir uma ferramenta para auxiliar na identificação de tecidos em blocos de parafina multitecidual. Isso é feito combinando primeiro o HistoGel com o corante de marcação de tecido para formar um tampão de gel de cores vivas. A segunda etapa é processar e incorporar os plugues HistoGel coloridos seguindo as técnicas padrão de processamento e incorporação de tecidos.

Em seguida, um punção de biópsia é usado para remover os pequenos cilindros. Estas são etiquetas de orientação de espécimes ou pontos. A etapa final é incorporar o local em um bloco de tecido múltiplo com a localização do local e cada amostra cuidadosamente documentada para facilitar a referência.

Em última análise, o ponto fornece uma indicação visual clara para orientação e identificação da amostra em microarrays de tecido e blocos de vários tecidos. A principal vantagem desta técnica em relação aos métodos existentes, como suturas ou núcleos assimétricos, é que a mancha não altera o tecido e permite flexibilidade na disposição das amostras para uma análise ideal. Tivemos a ideia desse método pela primeira vez quando recebemos solicitações de investigadores para combinar amostras de tecido de vários animais em um único bloco de parafina para economizar dinheiro e simplificar a análise Para preparar as manchas, comece adicionando 50 miligramas de BSA de grau bioquímico a um mililitro de corante de marcação de tecido em um tubo cônico de 15 mililitros.

Vortex a mistura por pelo menos um minuto até que esteja completamente dissolvida. Em seguida, carregue nove mililitros de gel de processamento hidroxietilaros em um tubo cônico de 15 mililitros e aqueça-o no micro-ondas a 30% da potência. Pulsar o calor em incrementos de dez segundos até que o gel esteja completamente derretido.

Agora combine o gel de processamento derretido e a solução de BSA de corante em um único tubo cônico de 15 mililitros e misture bem com uma pipeta. Em seguida, vortex a solução e transfira-a para uma geladeira por algumas horas para solidificar. Uma vez endurecido, remova o sólido dilatado no gel, soltando-o suavemente com uma espátula estreita.

Corte o plugue em seções de cinco milímetros de espessura. Não use as extremidades arredondadas. Transfira de três a seis seções para um de histologia e mergulhe-as em etanol a 70%, troque a solução de etanol a 70% a cada duas a quatro horas e pelo menos três vezes em 24 horas até que os plugues estejam totalmente desidratados.

Eles vão lixiviar um pouco do corante de marcação na solução de etanol. O uso de mudanças de etanol fresco inicialmente ajuda a eliminar parte do excesso de corante, resultando em um tampão mais limpo com menos probabilidade de lixiviar a cor. Em seguida, transfira os para etanol a 80% e depois para etanol a 95% por uma hora em cada banho.

O corante pode vazar do tampão de gel, o que pode afetar outros tecidos e os reagentes líquidos em um processador de tecidos automatizado. Como tal, a desidratação manual é altamente recomendada. No entanto, o processamento automatizado é igualmente eficaz.

Complete a desidratação com três lavagens em etanol 100% por uma hora cada. Limpar as amostras por imersão em hidrocarbonetos áticos ou xilenos três vezes durante uma hora em cada banho. Agora infiltre-se nas seções com três banhos de uma hora.

Em parafina fundida. Incorpore as seções processadas como de costume e, quando o bloco estiver em temperatura ambiente, use uma agulha de punção dérmica para fazer núcleos pontuais. Um bloco pode fazer núcleos de 22 milímetros ou até mais núcleos de 1,5 milímetro.

Comece fazendo um diagrama para indicar os locais e identidades desejados de todas as peças de tecido individuais a serem incorporadas juntas e a localização do local. Prepare uma cópia para manter à mão. O uso bem-sucedido de etiquetas de orientação de espécimes requer um mapa de bioespécimes claro e fácil de seguir que detalhe com precisão todos os bioespécimes, sua localização e sua posição em relação ao local.

Depois de processar os pedaços de tecido, organize-os na estação de incorporação. De acordo com o diagrama de orientação do tecido, a orientação correta é absolutamente crítica. Também é vital que o núcleo do ponto seja mais alto do que todas as peças de tecido que serão incorporadas no bloco.

Depois de concluir o arranjo do tecido, incorpore as manchas. Segure cada ponto na vertical com uma pinça até que a parafina se solidifique para que não tombe. Um ou dois minutos devem ser suficientes.

Para um kit TMA manual, encha o molde TMA com parafina derretida. À medida que o molde esfria, prenda os pontos de maneira semelhante nas margens da matriz. Agora divida e manche as seções com a mancha.

Usando uma abordagem padrão, cinco seções de mícron são feitas aqui. Para colocar as seções em lâminas, flutue-as em um banho-maria de 40 graus Celsius e, em seguida, transfira-as para lâminas de vidro carregadas positivamente. Uma vez presos às lâminas, seque-os a 60 graus Celsius por pelo menos 20 minutos.

As lâminas agora podem ser coradas manualmente ou em um sistema de coloração automatizado. Para coloração h e d de rotina, colorações especiais ou manchas de imuno-histoquímica apareceram como um redondo de cores vivas. no bloco de parafina e em todas as seções de parafina.

Os pontos permitiram fácil orientação e identificação de tecidos em blocos de múltiplos tecidos contendo tecidos de aparência semelhante de diferentes indivíduos e grupos de tratamento. Quando usados em um tecido, os pontos de microarray permitiram que cada núcleo fosse utilizado para amostras valiosas de tecido e os pontos poderiam ser facilmente escolhidos adjacentes a um núcleo de microarray de tecido. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar que a documentação precisa e clara do bioespécime e do ponto no bloco é fundamental para seu uso bem-sucedido.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como criar e usar facilmente a etiqueta de orientação da amostra como um auxiliar de identificação de tecido em blocos de parafina multitecidos.