Modificação e funcionalização do Grupo de guanidina por precursores sob medida

O objetivo geral deste procedimento é fornecer um acesso sintético conveniente aos peptídeos funcionalizados com guanidina. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da química dos peptídeos musculares, como o desenvolvimento de ligantes de integrina ou ligantes GPCR. A principal vantagem desta técnica é que permite um acesso fácil e sintético a guanidinas funcionalizadas, totalmente compatíveis com SPPS.

A tecnologia será especialmente valiosa para moléculas táteis porque os grupos funcionais, que são modificados, são tipicamente biomoléculas em deterioração. No nosso caso, buscamos moléculas que possam ser usadas para imagens moleculares de propriedades distintas de cânceres individuais e para seu tratamento específico; uma questão importante para a medicina personalizada. Para iniciar este procedimento específico, adicionar um grama de boc-pirazol carboxamaidina e um grama de PPh3 a um balão de fundo redondo de 50 ml.

Em seguida, adicione 10 mililitros de THF seco a um balão de fundo redondo de 50 mililitros em uma atmosfera inerte por meio de um septo de borracha. Usando uma seringa, adicione 194 microlitros de metanol seco. Agite a solução à temperatura ambiente.

Usando uma seringa, adicione uma solução preparada de azodicarboxilato de diisopropila em THF gota a gota por 15 minutos. Em seguida, deixe a solução mexer por duas horas em temperatura ambiente. Usando um evaporador rotativo, remova o solvente sob pressão reduzida.

Depois disso, dissolva o produto bruto em um mililitro de DCM. Em seguida, deixe uma coluna flash com 100 gramas de sílica, em acetato de etila a 10% em uma solução de pentano. Carregue o produto bruto dissolvido na coluna e adicione o solvente sob pressão.

Recolha, identifique e combine as frações conforme descrito no protocolo de texto. Em seguida, usando um evaporador rotativo, evaporar o solvente sob pressão reduzida para obter o composto desejado como um óleo amarelo e viscoso. Primeiro, adicione um grama de boc-pirazol carboxamidina, um grama de PPH3 e 0,9 gramas de Dde-6-Aminohexanol a um balão de fundo redondo de 50 mililitros.

Em seguida, adicione 10 mililitros de THF seco em uma atmosfera inerte usando um septo de borracha. Em seguida, dissolva os materiais de partida à temperatura ambiente. Usando uma seringa, adicione uma solução preparada de azodicarboxilato de diisopropila em THF gota a gota por 15 minutos.

Mexa a solução por duas horas em temperatura ambiente. Depois disso, use um evaporador rotativo para remover o solvente sob pressão reduzida. Dissolva o produto bruto em 1 mililitro de DCM.

Em seguida, coloque uma coluna flash com 100 gramas de sílica em uma solução dois a um de pentano e acetato de etila. Colocar o produto bruto dissolvido na coluna e adicionar o solvente sob pressão. Recolha, identifique e combine as frações conforme descrito no protocolo de texto.

Usando um evaporador rotativo, evapore o solvente sob pressão reduzida para obter o produto desejado. Para começar, dissolva 1,4 gramas de S-metilisotioureia e 2,2 gramas de boc-anidrido em uma solução bifásica vigorosa de DCM e bicarbonato de sódio aquoso saturado. Deixe a mistura mexer por 24 horas em temperatura ambiente.

Depois disso, despeje a mistura em um funil separador. Separar as camadas e extrair a fase aquosa três vezes com DCM. Em seguida, combine as fases orgânicas.

Seque as fases orgânicas combinadas com sulfato de sódio. Depois de remover o solvente usando um evaporador rotativo, dissolva o produto bruto em 2 mililitros de hexano. Carregar uma coluna flash com 100 g de sílica numa solução quatro para uma de hexano e acetato de etilo.

Depois disso, coloque o produto bruto dissolvido na coluna e adicione o solvente sob pressão. Depois de coletar e identificar as frações, combine as frações desejadas. Usando um evaporador rotativo, evaporar o solvente sob pressão reduzida para obter 1,1 gramas de Boc-S-metilisotioureia.

Dissolver 250 miligramas da Boc-S-metilisotioureia recolhida em 10 ml de DMF seco num balão de fundo redondo de 50 ml numa atmosfera inerte à temperatura ambiente. Use uma seringa para adicionar 440 microlitros de DIPEA. Usando uma seringa, adicione 245 microlitros de anidrido acético gota a gota, mexendo.

Deixe a mistura mexer por uma hora em temperatura ambiente. Em seguida, use uma seringa para adicionar dois mililitros de metanol e mexa por 15 minutos. Depois de remover o solvente sob pressão reduzida, usando um evaporador rotativo, dissolver o produto bruto em um mililitro de DCM.

Carregar uma coluna flash com 60 g de sílica numa solução de três para um de hexano e acetato de etilo. Em seguida, carregue o produto bruto dissolvido e adicione o solvente sob pressão. Recolha, identifique e combine as frações conforme descrito no protocolo de texto.

Usando um evaporador rotativo, evapore o solvente sob pressão reduzida para obter 210 miligramas do produto desejado como um sólido branco. Para começar, dissolva uma pequena quantidade do peptídeo cíclico ortogonalmente desprotegido em um pequeno volume de DMF. Adicione dois equivalentes de DIPEA.

E dois equivalentes do precursor da guanidinilação. Em seguida, deixe a solução mexer por duas horas em temperatura ambiente. Quando a reação estiver concluída, remova o solvente.

Dissolva novamente o peptídeo cíclico guanidinilado em acetil nitrilo e execute a purificação semipreparativa por HPLC conforme descrito no protocolo de texto. Depois disso, em um pequeno vidro, adicione uma solução preparada de ácido trifluoroacético, água e triisopropilsilano ao produto purificado. Mexa esta mistura por uma hora em temperatura ambiente e, em seguida, observe a desproteção completa com ESIMS.

Adicione 10 mililitros de éter gelado a um tubo de centrífuga de 50 mililitros. Usando uma pipeta Pasteur, adicione o peptídeo desprotegido gota a gota ao éter. Centrifugar a suspensão a 5 000 vezes por cinco minutos.

Depois disso, lave o pellet com éter gelado. Em centrifugação a 5 000 vezes g durante cinco minutos. Repita esta lavagem e centrifugação mais uma vez.

Em seguida, dissolva o produto em 2 mililitros de água de grau HBLC e purifique o produto usando HPLC semipreparativo, conforme descrito no protocolo de texto. Neste estudo, é apresentado um método fácil na modificação do grupo guanidina em gliginas peptídicas. O progresso das reações é monitorado usando cromatografia líquida de alta pressão.

Para resíduos maiores no grupo guanidina, duas horas geralmente não é tempo suficiente para que a reação atinja a conclusão. Assim, a reação é continuada e os compostos são purificados por HPLC semi-preparativa. Uma pequena quantidade é então diluída com DMSO para obter uma solução de caule para a avaliação biológica em um ensaio de ligação em fase sólida al-ee-so-like.

Todos os compostos analisados apresentam uma afinidade relativamente alta do subtipo integrante alfa v beta três, e alta seletividade contra o subtipo integrante alfa cinco beta um. Tivemos a ideia para esse método pela primeira vez quando estávamos procurando um método padrão para guanidinilação durante a SPPS. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como preparar precursores de guanidinilação feitos sob medida, a fim de modificar ou funcionalizar o grupo guanidina do seu peptídeo alvo.