Name: Medir a funcionalidade da junção Neuromuscular (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 40 s
Description: Aprenda a avaliar a funcionalidade da junção neuromuscular em preparações ex vivo de músculo e nervo. Este método utiliza estímulo direto e indireto para medir respostas contráteis em modelos de camundongo.

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Trabalho no laboratório dos autores foi apoiado pela Fondazione Roma e Teleton (conceder n. GGP14066).

<ol><li>Dadon-Nachum, M., Melamed, E., Offen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%26%2334%3Bdying-back%26%2334%3B+phenomenon+of+motor+neurons+in+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The &#34;dying-back&#34; phenomenon of motor neurons in ALS.</a> J Mol Neurosci. 43 (3), 470-477 (2011).</li>
<li>Dobrowolny, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+Muscle+Is+a+Primary+Target+of+SOD1G93A-Mediated+Toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Skeletal Muscle Is a Primary Target of SOD1G93A-Mediated Toxicity.</a> Cell Metab. 8 (5), 425-436 (2008).</li>
<li>Mantilla, C. B., Zhan, W. Z., Sieck, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotrophins+improve+neuromuscular+transmission+in+the+adult+rat+diaphragm%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Neurotrophins improve neuromuscular transmission in the adult rat diaphragm.</a> Muscle Nerve. 29 (3), 381-386 (2004).</li>
<li>Prakash, Y. S., Miyata, H., Zhan, W. Z., Sieck, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivity-induced+remodeling+of+neuromuscular+junctions+in+rat+diaphragmatic+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Inactivity-induced remodeling of neuromuscular junctions in rat diaphragmatic muscle.</a> Muscle Nerve. 22 (3), 307-319 (1999).</li>
<li>Sieck, D. C., Zhan, W. Z., Fang, Y. H., Ermilov, L. G., Sieck, G. C., Mantilla, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure-activity+relationships+in+rodent+diaphragm+muscle+fibers+vs.+neuromuscular+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Physiol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Structure-activity relationships in rodent diaphragm muscle fibers vs. neuromuscular junctions.</a> Respir Physiol Neurobiol. 180 (1), 88-96 (2012).</li>
<li>Van Lunteren, E., Moyer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+DAP+on+diaphragm+force+and+fatigue%2C+including+fatigue+due+to+neurotransmission+failure%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effects of DAP on diaphragm force and fatigue, including fatigue due to neurotransmission failure.</a> J Appl Physiol. 81 (5), 2214-2220 (1996).</li>
<li>Van Lunteren, E., Moyer, M., Kaminski, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adverse+effects+of+myasthenia+gravis+on+rat+phrenic+diaphragm+contractile+performance%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Adverse effects of myasthenia gravis on rat phrenic diaphragm contractile performance.</a> J Appl Physiol. 97 (3), 895-901 (2004).</li>
<li>Lee, Y., Mikesh, M., Smith, I., Rimer, M., Thompson, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscles+in+a+mouse+model+of+spinal+muscular+atrophy+show+profound+defects+in+neuromuscular+development+even+in+the+absence+of+failure+in+neuromuscular+transmission+or+loss+of+motor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Muscles in a mouse model of spinal muscular atrophy show profound defects in neuromuscular development even in the absence of failure in neuromuscular transmission or loss of motor neurons.</a> Dev Biol. 356 (2), 432-444 (2011).</li>
<li>Personius, K. E., Sawyer, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variability+and+failure+of+neurotransmission+in+the+diaphragm+of+mdx+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromuscular+Disord%22%5BJournal%5D)">Variability and failure of neurotransmission in the diaphragm of mdx mice.</a> Neuromuscular Disord. 16 (3), 168-177 (2006).</li>
<li>Röder, I. V., Petersen, Y., Choi, K. R., Witzemann, V., Hammer, J. A., Rudolf, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+myosin+Va+in+the+plasticity+of+the+vertebrate+neuromuscular+junction+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Role of myosin Va in the plasticity of the vertebrate neuromuscular junction in vivo.</a> PLoS ONE. 3 (12), e3871(2008).</li>
<li>Chevessier, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+for+congenital+myasthenic+syndrome+due+to+MuSK+mutations+reveals+defects+in+structure+and+function+of+neuromuscular+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">A mouse model for congenital myasthenic syndrome due to MuSK mutations reveals defects in structure and function of neuromuscular junctions.</a> Hum Mol Genet. 17 (22), 3577-3595 (2008).</li>
<li>Farchi, N., Soreq, H., Hochner, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+acetylcholinesterase+overexpression+induces+multilevelled+aberrations+in+mouse+neuromuscular+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Chronic acetylcholinesterase overexpression induces multilevelled aberrations in mouse neuromuscular physiology.</a> J Physiol. 546 (1), 165-173 (2002).</li>
<li>Kuei, J. H., Shadmehr, R., Sieck, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relative+contribution+of+neurotransmission+failure+to+diaphragm+fatigue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol+%28Bethesda%2C+Md%3A+1985%29%22%5BJournal%5D)">Relative contribution of neurotransmission failure to diaphragm fatigue.</a> J Appl Physiol (Bethesda, Md: 1985). 68 (1), 174-180 (1990).</li>
<li>Del Prete, Z., Musarò, A., Rizzuto, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+mechanical+properties%2C+including+isotonic+fatigue%2C+of+fast+and+slow+MLC%2FmIgf-1+transgenic+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Measuring mechanical properties, including isotonic fatigue, of fast and slow MLC/mIgf-1 transgenic skeletal muscle.</a> Ann Biomed Eng. 36 (7), 1281-1290 (2008).</li>
<li>Lynch, G. S., Hinkle, R. T., Chamberlain, J. S., Brooks, S. V., Faulkner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Force+and+power+output+of+fast+and+slow+skeletal+muscles+from+mdx+mice+6-28+months+old%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Force and power output of fast and slow skeletal muscles from mdx mice 6-28 months old.</a> J Physiol. 535 (2), 591-600 (2001).</li>
<li>Brooks, S. V., Faulkner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contractile+properties+of+skeletal+muscles+from+young%2C+adult+and+aged+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Contractile properties of skeletal muscles from young, adult and aged mice.</a> J Physiol. 404, 71-82 (1988).</li>
<li>Lynch, G. S., Hinkle, R. T., Faulkner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Force+and+power+output+of+diaphragm+muscle+strips+from+mdx+and+control+mice+after+clenbuterol+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromuscul+Disord%22%5BJournal%5D)">Force and power output of diaphragm muscle strips from mdx and control mice after clenbuterol treatment.</a> Neuromuscul Disord. 11 (2), 192-196 (2001).</li>
<li>Rizzuto, E., Pisu, S., Musar, A., Del Prete, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+Neuromuscular+Junction+Functionality+in+the+SOD1+G93A+Animal+Model+of+Amyotrophic+Lateral+Sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Biomed+Eng+%22%5BJournal%5D)">Measuring Neuromuscular Junction Functionality in the SOD1 G93A Animal Model of Amyotrophic Lateral Sclerosis.</a> Ann Biomed Eng . 43, (2015).</li>
<li>Soliani, L. <a target="_blank" href="http://www.dsa.unipr.it/soliani/soliani.html">Manuale di statistica per la ricerca e la professione statistica univariata e bivariata parametrica e non-parametrica per le discipline ambientali e biologiche</a>. , (2004).</li>
<li>Gurney, M. E., Pu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+neuron+degeneration+in+mice+that+express+a+human+Cu%2CZn+superoxide+dismutase+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Science+%28New+York%2C+N.Y%29%22%5BJournal%5D)">Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu,Zn superoxide dismutase mutation.</a> Science (New York, N.Y). 264 (5166), 1772-1775 (1994).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

O protocolo experimental descrito acima fornece uma maneira ideal de medir e discriminar qualquer alterações funcionais ocorridas diretamente no músculo ou indirectamente a nível da junção neuromuscular. Uma vez que esta técnica baseia-se em uma medida indireta da funcionalidade de JNM, não pode ser usado para determinar se qualquer defeito está relacionado às alterações morfológicas ou a alterações bioquímicas. Por outro lado, ele fornece uma maneira eficaz de determinar se as alterações morfológicas ou bioquímicas redu...

Junção neuromuscular (JNM) é uma sinapse química formada pela conexão entre a placa terminal motor da fibra muscular e o axônio do neurônio motor terminal. O MNJ foi mostrado para jogar um papel crucial, quando a comunicação entre o músculo e do nervo é prejudicada, como ocorre no envelhecimento ou esclerose lateral amiotrófica (ela). Como o músculo e nervo comunicar-se em uma maneira de bidirecional1,2, sendo capaz de medir defeitos MNJ separadamente do músculo defeitos pode fornecer novos insights sobre sua interação fisiopatológica. Com efeito, esta avaliação funcional pode ajudar a avaliar se alterações morfológicas ou bioquímicas reduzem neurotransmissão funcionalidade de sinalização.
A comparação da resposta contrátil muscular, provocada pela estimulação do nervo e a resposta do mesmo músculo evocado por estimulação direta de sua membrana tem sido proposta como uma medida indireta da funcionalidade do MNJ. Com efeito, desde a membrana neurotransmissão de by-pass de estimulação sinalização, quaisquer diferenças nas duas respostas contráteis podem são imputáveis mudanças no MNJ. Esta abordagem foi extensivamente proposta para ratos3,4,5,6,7e também usada para reunir informações sobre modelos de rato8,9,10,11,12.
Aqui, descrevemos em detalhe um procedimento para excisar e testar duas preparações nervo-músculo, i. e. as preparações sóleo-isquiático e frênico-diafragma. Usando um Custom-Made software, nós projetamos um protocolo de teste contínuo que combina a medição de vários parâmetros que caracterizam a funcionalidade tanto Mioneural e músculo, desse modo, produzindo uma avaliação abrangente dos prejuízos MNJ separadamente do músculo. Em particular, o protocolo mede a força de contração muscular, a cinética de músculo, a curva força-frequência para direta e estímulos nervosos, a neurotransmissão falha13 para um despedimento e as frequências tetânica e a fadiga intratetanic7.

<table><tbody><tr><td>Sistema de Alavanca de Modo Duplo&nbsp;</td><td>Aurora Científica Inc.</td><td>Atuador/transdutor</td> <td>300B</td></tr><tr><td>Estimulador Bifásico de Alta Potência&nbsp;</td><td>Aurora Científica Inc.</td>Estimulador de pulso <td>701B</td><td>(nervo)</td></tr><tr><td>Estimulador bifásico de alta potência&nbsp;</td><td>Aurora Científica Inc.</td><td>Estimulador de pulso</td> <td>701C</td> (músculo)</tr> <tr><td>Aparelho muscular in vitro</td><td>Aurora Científica Inc.</td>Banho de tecido preparatório <td>800A</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Radnoti</td><td>158400</td><td></td></tr><tr><td>Eletrodo de Sucção Monopolar</td><td>A-M Systems</td><td>573000</td><td>com referência caseira&nbsp;</td></tr><tr><td>Osciloscópio&nbsp;</td><td>Estereomicroscópio Tektronix</td><td>TDS2014</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Nikon</td><td>SMZ 800</td><td></td></tr><tr><td>Iluminador de luz fria&nbsp;</td><td>Óptica Fotônica</td><td>PL 3000</td><td></td></tr><tr><td>Placa de aquisição</td><td>National Instruments</td><td>NI PCIe-6353</td><td></td></tr><tr><td>Bloco de conectores</td><td>National Instruments</td><td>NI 2110</td><td></td></tr><tr><td>Computador pessoal</td><td>AMD Phenom II x4 970</td><td></td><td>Processador 3,50 Ghz com software Windows 7</td></tr><tr><td>LabView 2012</td><td>National Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Krebs-Ringer Bicarbonato Buffer&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>K4002&nbsp;</td><td>tampão fisiológico</td></tr><tr><td>Bicarbonato de sódio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5761&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de cálcio CaCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C4901</td><td>anidro, pó, &ge; 97%</td></tr><tr><td>Buffer HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375</td><td>&ge; 99,5% (titulação)</td></tr><tr><td>Pratos 60mm x 15mm</td><td>Falcon</td><td>353004</td><td>Poliestireno</td></tr><tr><td>Silicone</td><td>Sylgard&nbsp;</td><td>184 Silicone&nbsp;</td><td>Kit de Elastômero&nbsp; 0.5Kg.</td></tr><tr><td>Termostato</td><td>Dennerle</td><td>DigitalDuomat 1200</td><td></td></tr><tr><td>Bomba</td><td>Newa Mini</td><td>MN 606</td><td>para aquário</td></tr><tr><td>Resistência ao calor Termocabo Lucky</td><td>Reptile</td><td>61403-1</td><td>50/60Hz 50W</td></tr><tr><td>Balde</td><td>de 10 litros</td><td></td><td>Polipropileno</td></tr><tr><td>O2 + 5%CO2</td><td>siad</td><td></td><td>Mistura de gás</td></tr><tr><td>#5 Fórceps&nbsp;</td><td>Ferramentas Fine Science</td><td>11252-20</td><td>2 itens</td></tr><tr><td>Tesoura de Mola - Lâminas de 8 mm</td><td>Ferramentas Fine Science</td><td>15024-10</td><td>excisão de nervo</td></tr><tr><td>Tesoura Afiada&nbsp;</td><td>Ferramentas de Belas Ciências&nbsp;</td><td>14059-11</td><td>remoção muscular</td></tr><tr><td>Tesoura Delicada</td><td>Wagner</td><td>02.06.32</td><td>externo do animal Cabo de</td></tr><tr><td>Bisturi de Estudante #3</td><td>Ferramentas de Belas Ciências&nbsp;</td><td>91003-12</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas de bisturi #10</td><td>Ferramentas de ciência fina&nbsp;</td><td>10010-00</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas de Bisturi #11</td><td>Ferramentas de Ciência Fina&nbsp;</td><td>10011-00</td><td></td></tr><tr><td>fio de nylon e Oslash; 0,16 mm</td><td>qualquer</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

medir a funcionalidade da junção neuromuscular

Measuring Neuromuscular Junction Functionality

Funcionalidade de junção neuromuscular (JNM) desempenha um papel crucial ao estudar as doenças em que a comunicação entre neurônio motor e músculo é prejudicada, como envelhecimento e esclerose lateral amiotrófica (ela). Aqui descrevemos um protocolo experimental que pode ser usado para medir a funcionalidade MNJ combinando dois tipos de estimulação elétrica: direto de estimulação da membrana muscular e a estimulação através do nervo. A comparação da resposta muscular para esses dois estímulos diferentes pode ajudar a definir, a nível funcional, potenciais alterações no MNJ que levam ao declínio funcional no músculo.
Preparações dex vivo E são adequadas para estudos bem controlados. Aqui descrevemos um protocolo intensivo para medir vários parâmetros do músculo e funcionalidade Nicotínico para a preparação do nervo isquiático-sóleo e para a preparação nervo frênico-diafragma. O protocolo dura aproximadamente 60 minutos e é realizado ininterruptamente por meio de uma custom-made software que mede as propriedades de cinética de contração muscular, a relação força-frequência de estimulação do músculo e do nervo e dois parâmetros específicos para a funcionalidade de JNM, ou seja, falha de neurotransmissão e fadiga intratetanic. Esta metodologia foi utilizada para detectar danos em preparações de nervo-músculo sóleo e diafragma usando SOD1G93A mouse transgénico, um modelo experimental de ALS que ubiquitously overexpresses o mutante antioxidante da enzima superóxido dismutase 1 (SOD1).

O protocolo descrito fornece informações sobre denervação funcional em diversas doenças neuromusculares ou envelhecimento-sarcopenia. Este protocolo pode ser usado para determinar se (e, em caso afirmativo, em que nível) alterações musculares são devido a seletivas mudanças que ocorrem no músculo em si ou na transmissão neuromuscular. Os dados mostrados abaixo são os resultados de um trabalho anterior de nosso grupo18, realizado sobre o modelo de rato transgénico S...

Uma avaliação funcional da junção neuromuscular (JNM) pode fornecer informações essenciais sobre a comunicação entre o músculo e do nervo. Aqui descrevemos um protocolo para avaliar exaustivamente o músculo e o MNJ funcionalidade usando duas preparações diferentes de nervo-músculo, ou seja, sóleo-isquiático e frênico-diafragma.

Medir a funcionalidade da junção Neuromuscular

Neuromuscular junction (NMJ) functionality plays a pivotal role when studying diseases in which the communication between motor neuron and muscle is ...

O objetivo geral deste procedimento é estudar a funcionalidade da junção neuromuscular por meio de uma abordagem experimental ex vivo. Isso é realizado estimulando a preparação do nervo muscular de duas maneiras: diretamente na membrana muscular e através do nervo. Como a estimulação da membrana contorna a sinalização da transmissão neural, quaisquer diferenças entre as duas respostas contráteis podem ser consideradas uma medida indireta da funcionalidade da junção neuromuscular.Aqui apresentamos este procedimento em preparação do nervo ciático do sóleo. O músculo é dissecado juntamente com seu nervo e colocado em um banho de tecido perfundido. É fixado a um controlador de força e comprimento, e um par de eletrodos de platina é posicionado paralelamente ao músculo.Um eletrodo de sucção de vidro é então movido próximo à extremidade cortada do nervo. Um protocolo abrangente de testes é então aplicado para avaliar minuciosamente tanto a junção neuromuscular quanto a funcionalidade muscular. A conexão funcional entre músculo e nervo é conclusiva para ambas as partes e para a fração sobrevivente dois.No primeiro estágio do nível de cada um dos dois tecidos, ocorre comunicação nas junçõe

measuring-neuromuscular-junction-functionality

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

A junção neuromuscular da Drosophila (NMJ) é usada como modelo para estudar a morfologia e a função das sinapses. Este vídeo descreve características importantes que os pesquisadores quantificam para caracterizar o NMJ. O protocolo de exemplo demonstra um software capaz de realizar a quantificação automaticamente.

drosófila Quantificação da Junção Neuromuscular (NMJ): Um Método para Avaliar a Morfologia e Função Sináptica

Este vídeo demonstra uma técnica in vivo para medir o potencial de ação muscular composto (CMAP) em camundongos. Ele descreve as etapas para configurar eletrodos, estimular os neurônios dos membros anteriores que inervam as fibras musculares e registrar as respostas musculares. A técnica avalia a desmielinização neuronal e a perda funcional de neurônios.

Medindo potenciais de ação muscular compostos em músculos de membros anteriores de camundongos in vivo

Este vídeo demonstra um método para avaliar as junções neuromusculares funcionais. Usando um biorreator contendo tecido muscular e neurônios motores, juntamente com microscopia fluorescente, os canais sensíveis à luz nos neurônios são estimulados a gerar sinais elétricos, causando contrações nas fibras musculares.

Avaliação de uma junção neuromuscular funcional por meio de estimulação óptica simultânea e gravação de vídeo

A junção neuromuscular (JNM) é alterada em uma variedade de condições que às vezes podem culminar em insuficiência sináptica. Este relatório descreve métodos baseados em microscópio de fluorescência para quantificar essas mudanças estruturais.

A Junção Neuromuscular: Synapse Medir o tamanho, Mudanças de fragmentação e em Synaptic Density proteína utilizando microscopia de fluorescência confocal

O protocolo descrito neste artigo usa o músculo levator auris longus (LAL) de rato para gravar espontânea e nervo-evocou potenciais pós-sinápticos (corrente-braçadeira) e correntes (tensão-braçadeira) na junção neuromuscular. Uso desta técnica pode fornecer insights-chave nos mecanismos de transmissão sináptica sob condições normais e doença.

Músculo levantador Auris Longus Preparação para exame da transmissão Neuromuscular mamíferos sob condições de grampo de tensão

A capacidade de detectar com precisão componentes de junção neuromuscular é crucial na avaliação de modificações em sua arquitetura devido a processos patológicos ou de desenvolvimento. Aqui apresentamos uma descrição completa de um método simples para obter imagens de alta qualidade de junções neuromusculares de montagem inteira que podem ser usadas para realizar medições quantitativas.

Dissecção de fibras musculares esqueléticas únicas para análises imunofluorescentes e morfométricas de junções neuromusculares de monte inteiro

Descrevemos um método para gerar unidades motoras humanas em dispositivos microfluidos comercialmente disponíveis, co-culminando neurônios motores pluripotentes induzidos por células-tronco com miótubos primários derivados do mesoangioblast, resultando na formação de junções neuromusculares funcionalmente ativas.

Geração de Unidades Motoras Humanas com Junções Neuromusculares Funcionais em Dispositivos Microfluidos

Este protocolo descreve um método para análise morfométrica de junções neuromusculares por microscopia confocal combinada e STED que é usado para quantificar alterações patológicas em modelos de camundongos de SMA e CMS relacionada ao ColQ.

Caracterização de Junções Neuromusculares em Camundongos por Microscopia Confocal Combinada e Super-Resolução

Descrevemos um sistema de imagem reprodutível, automatizado e imparcial para caracterizar a função de junção neuromuscular usando tecido muscular esquelético projetado por humanos e motoneurons optogenéticos. Este sistema permite a quantificação funcional da conectividade neuromuscular ao longo do tempo e detecta a função neuromuscular diminuída causada por neurotoxinas e soro do paciente myasthenia gravis.

Engenharia e Caracterização de um Modelo Optogenético da Junção Neuromuscular Humana

O protocolo mostra um método para examinar a correlação espacial entre os terminais pré-sinápticos, receptores pós-sinápticos e células schwann peri-sinápticas no músculo gastrocnemius medial de ratos usando imunohistoquímica fluorescente com diferentes biomarcadores, ou seja, neurofilamento 200, transporte de acetilcholina vesicular, alfa-bungarotoxina e S100.

Visualizando as Características Morfológicas da Junção Neuromuscular no Músculo Gastrocnemius De Rato Medial

Neste estudo, demonstramos um protocolo refinado de eletromiografia de fibra única (SFEMG) para permitir a medição in vivo da transmissão da junção neuromuscular (NMJ) em modelos de roedores. Uma abordagem passo a passo da técnica SFEMG é descrita para permitir a quantificação da variabilidade e falha da transmissão da JNM no músculo gastrocnêmio de ratos.

Eletromiografia de fibra única estimulada (SFEMG) para avaliação da transmissão da junção neuromuscular em modelos de roedores

Aprenda a avaliar a funcionalidade da junção neuromuscular em preparações ex vivo de músculo e nervo. Este método utiliza estímulo direto e indireto para medir respostas contráteis em modelos de camundongo.

Medir a funcionalidade da junção Neuromuscular

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