Name: Protocolo para Caracterizar as Alterações Morfológicas Clostridium difficile Em resposta ao tratamento antibiótico (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-05-25T12:30:00.000+00:00
Duration: 12 min 58 s
Description: Aprenda a caracterizar alterações morfológicas em Clostridium difficile após tratamento antibiótico usando microscopia eletrônica de varredura. Este método combina imagens de alta resolução com cultura in vitro para avaliar efeitos farmacológicos.

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Esses experimentos foram apoiados por bolsas de pesquisa da Merck and Co. e da Summit, PLC.

1. Isolamento de C. difficile a partir de diferentes fontes ambientais ou clínicas <ol><li> Isolados ambientais: Utilizando um indicador de algodão pré-esterilizado (ligeiramente molhado com NaCl a 0,85%), limpe a superfície de qualquer área de interesse (chão, porta, pega, prateleira, etc. ). 8 Certifique-se de usar luvas estéreis e coloque o cotonete em um tubo esterilizado após concluído. </li><li> Isolados clínicos (fezes): Placa de 10 a 100 mg de amostras clínicas de fezes em cefoxitina-cicloserina-frutose ágar (CCFA), utilizando um ciclo de inoculação e incubar sob condições anaeróbicas rigorosas durante 48-72 h. Armazenar colônias isoladas de C. difficile estoque em cryovials a -80 ° C para análises adicionais. 7 , 9 , 10 </li><li> Enriqueça as amostras de esfregaços ambientais em infusão de coração cerebral (BHI) com 0,05% de taurocolato de sódio e coloque em câmara anaeróbica a 37 ° CDurante 5 dias. Centrifugar 1 mL da cultura a 10.000 xg e ressuspender o sedimento em 100 mL de etanol. </li><li> Plantar as células ressuspensas (50 μL) em placas de cicloserinecefoxitina frutose agar (CCFA) e incubar numa câmara anaeróbica a 37 ° C durante 40-48 h. Armazenar colônias isoladas de C. difficile estoque em cryovials a -80 ° C para análises adicionais. </li><li> Teste as colônias suspeitas de C. difficile usando o reagente de aglutinação de látex ou PCR. </li></ol> 2. Culturing C. difficile e Killing Kinetic Procedures <ol><li> Cultivar estirpes ambientais ou clínicas de C. difficile em placas de agar de sangue numa câmara anaeróbica a 37 ° C durante 48 h. </li><li> Tomar uma colónia isolada com um ciclo de inoculação, transferi-la para 5 mL de meio BHI num tubo de 15 mL e crescer durante 24 h numa câmara anaeróbica a 37 ° C. </li><li> Diluir as pré-culturas 1: 100 a aproximadamente 10 6 unidades formadoras de colónias(CFU) / mL em BHIS pré-reduzido fresco (BHI mais 5 g / L de extracto de levedura e 1% de L-cisteína) suplementado com taurocolato de sódio a 0,1% e a concentração apropriada de antibiótico (T0). </li><li> Recolher uma amostra de 1 mL com uma pipeta em cada ponto de tempo (T0, T6, T24, T48) e espalhar uma pequena alíquota (100 μL em diluições em série) numa placa de agar de sangue. Deixar as células crescerem sobre a placa de agar de sangue durante 48 h numa câmara anaeróbica a 37 ° C e contar o número resultante de colónias para determinar CFU. </li></ol> 3. Preparação de amostras para Microscopia Eletrônica de Varredura <ol><li> Recolher 1 mL de células de cada ponto de tempo em tubos de microcentrífuga e centrifugar a 10.000 xg durante 10 min. Descartar o sobrenadante e lavar as células em PBS. </li><li> Centrifugar as amostras a 10 000 xg durante 10 min novamente e descartar o sobrenadante. Re-diluir as células em 1 mL de paraformaldeído a 4% e incubar durante 1 h à temperatura ambiente. </li><li> Centrifugar novamente as amostras durante 10 min a 10,000 xg e descartar sobrenadante. Lavar as células duas vezes com água destilada e redilutar em 100 μL de água destilada. Ajuste o volume dependendo da turbidez da solução. NOTA: Fazer várias diluições em série é uma boa idéia. </li><li> Rotule os lamínulas e adicione 40 μL da amostra nele. Incubar durante 15 min em uma capa de fluxo para evaporar o líquido e permitir que as células aderem à lamela. Se ainda houver líquido, use um ventilador para remover o líquido. </li><li> Coloque lamínulas rotuladas com células em uma máquina de pulverização de mesa e fita para baixo. Secure ouro puro na máquina de pulverização. Ligue a máquina e comece a pulverização a baixa pressão (50 mTorr). Revestir as células durante 30 s a 80 mA, o que se traduz em 20 nm de revestimento de ouro. </li><li> Transferência de células revestidas para o microscópio eletrônico de varredura. </li></ol> 4. Imagens de células C. difficile em um microscópio eletrônico de varredura <ol><li> Ventilar o microscópio eletrônico de varredura (SEM) corretamente por prEssing o botão de ventilação no software do computador. </li><li> Usando fita de carbono, fixe os lamínulas revestidas para o estágio de metal. Uma vez que o SEM é ventilado, a porta deve abrir facilmente. Bloqueie o estágio de metal na câmara de SEM, aparafusando-o. </li><li> Clique no botão PUMP no software do computador. O SEM será utilizável quando o sistema lê &quot;Vac OK&quot;. </li><li> Clique no detector SE na guia de detectores. Ligue o feixe clicando no botão que exibe a tensão. Iniciar imagens com uma tensão mais baixa (5 kV) antes de aumentar a tensão (até 15 kV). Uma imagem será exibida após o feixe estar ligado. </li><li> Usando a função de rastreamento, encontre uma área nos lamínulas revestidos para a imagem. Zoom para a região e encontrar em forma de haste estruturas; Estes são clostridium difficile . </li><li> Amplie e focalize a imagem para calibrar o sistema. Isto deve ser feito em várias distâncias de trabalho: 15, 9 e 5 mm. Imagem a uma distância de trabalho de 5 mm. </li><li> Ligue o uLtra modo de imagem de alta resolução e começar a focar e otimizar o astigmatismo. </li><li> Comece a focar em alta ampliação. Utilize os botões de foco fino e grosseiro para isso. Ajustar o astigmatismo também para obter uma imagem mais clara. <ol><li> Ajuste o astigmatismo com alta ampliação. Para fazer isso, ajuste as alternâncias de astigmatismo (elas se parecem com as alternâncias de foco fino / grosseiro) e verifique a imagem para obter clareza digitando zoom no software do computador. </li></ol></li><li> A função de leitura lenta para coletar uma imagem de alta qualidade. Salve a imagem coletada como um arquivo .TIFF, que será usado para análise. Certifique-se de que a barra de dados esteja selecionada se as medições forem feitas durante a análise. </li><li> Colecione imagens em diferentes ângulos (até 52 °, girando manualmente o ângulo diretamente no SEM.) As imagens angulares tendem a revelar mais informações de profundidade. </li><li> Altere a tensão do feixe dependendo das células que estão sendo visualizadas. Manter este principalmente entre 5 - 15 kV para todas as experiências. </li&gt; <li> Após completar a imagem, desligue o feixe e aumente a distância de trabalho para 20 mm. A câmara pode então ser ventilada e a fase pode ser removida. Copie todas as imagens em uma unidade para uma análise mais aprofundada. </li></ol> 5. Processamento e Análise de Imagens <ol><li> Faça o download e instale o software disponível gratuitamente, FIJI (http://fiji.sc), no computador. </li><li> Abra o arquivo de imagem em FIJI. </li><li> Usando a função de linha, traçar com precisão a barra de escala. </li><li> Clique na guia Analisar no programa FIJI e finalmente selecione a função Selecionar Escala. Aparecerá uma janela que exigirá a definição da distância conhecida com base na barra de escala. Altere também a unidade de comprimento e clique em OK. </li><li> Agora que o programa é calibrado para a distância, use a função de linha para medir o comprimento da célula. Para obter o comprimento, use a função de linha para rastrear a célula na sua totalidade. Selecione a guia Analisar novamente e clique em Medir. O comprimento deve serNas unidades indicadas anteriormente. </li></ol>

<ol><li>Lessa, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burden+of+Clostridium+difficile+infection+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Burden of Clostridium difficile infection in the United States.</a> N Engl J Med. 372 (9), 825-834 (2015).</li>
<li>Vickers, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ridinilazole%3A+a+novel+therapy+for+Clostridium+difficile+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Antimicrob+Agents%22%5BJournal%5D)">Ridinilazole: a novel therapy for Clostridium difficile infection.</a> Int J Antimicrob Agents. 48 (2), 137-143 (2016).</li>
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<li>Endres, B. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+for+imaging+the+pharmacological+effects+of+antibiotic+treatment+on+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22Anaerobe%22%5BJournal%5D)">A novel method for imaging the pharmacological effects of antibiotic treatment on Clostridium difficile.</a> Anaerobe. 40, 10-14 (2016).</li>
<li>Endres, B. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+the+Effects+of+Surotomycin+Treatment+on+Clostridium+difficile+Toxin+A+and+B+Production%2C+Immune+Response%2C+and+Morphological+Changes%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Evaluating the Effects of Surotomycin Treatment on Clostridium difficile Toxin A and B Production, Immune Response, and Morphological Changes.</a> Antimicrob Agents Chemother. 60 (6), 3519-3523 (2016).</li>
<li>Alam, M. J., Anu, A., Walk, S. T., Garey, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+potentially+pathogenic+Clostridium+difficile+contamination+in+household+environs%5BTitle%5D)+AND+%22Anaerobe%22%5BJournal%5D)">Investigation of potentially pathogenic Clostridium difficile contamination in household environs.</a> Anaerobe. 27, 31-33 (2014).</li>
<li>Aitken, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+the+Endemic+Setting%2C+Clostridium+difficile+Ribotype+027+Is+Virulent+But+Not+Hypervirulent%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Control+Hosp+Epidemiol%22%5BJournal%5D)">In the Endemic Setting, Clostridium difficile Ribotype 027 Is Virulent But Not Hypervirulent.</a> Infect Control Hosp Epidemiol. , 1-6 (2015).</li>
<li>Basseres, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+on+toxin+production+and+cell+morphology+in+Clostridium+difficile+by+ridinilazole+%28SMT19969%29%2C+a+novel+treatment+for+C.+difficile+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Antimicrob+Chemother%22%5BJournal%5D)">Impact on toxin production and cell morphology in Clostridium difficile by ridinilazole (SMT19969), a novel treatment for C. difficile infection.</a> J Antimicrob Chemother. 71 (5), 1245-1251 (2016).</li>
<li>Walters, B. A., Roberts, R., Stafford, R., Seneviratne, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relapse+of+antibiotic+associated+colitis%3A+endogenous+persistence+of+Clostridium+difficile+during+vancomycin+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Relapse of antibiotic associated colitis: endogenous persistence of Clostridium difficile during vancomycin therapy.</a> Gut. 24 (3), 206-212 (1983).</li>
<li>Chilton, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+effect+of+oritavancin+on+Clostridium+difficile+spore+germination%2C+outgrowth+and+recovery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Antimicrob+Chemother%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the effect of oritavancin on Clostridium difficile spore germination, outgrowth and recovery.</a> J Antimicrob Chemother. 68 (9), 2078-2082 (2013).</li>
<li>Ofosu, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clostridium+difficile+infection%3A+a+review+of+current+and+emerging+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Clostridium difficile infection: a review of current and emerging therapies.</a> Ann Gastroenterol. 29 (2), 147-154 (2016).</li>
<li>McDonald, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+epidemic%2C+toxin+gene-variant+strain+of+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22New+Eng+J+Med%22%5BJournal%5D)">An epidemic, toxin gene-variant strain of Clostridium difficile.</a> New Eng J Med. 353 (23), 2433-2441 (2005).</li>
</ol>

A KWG recebeu apoio de pesquisa anterior e atual da Merck & Co. e da Summit, PLC.

O objetivo do presente estudo foi criar um método de alto rendimento para isolar C. difficile e testar a susceptibilidade aos antibióticos usando microscopia eletrônica de varredura (MEV) como meio para uma caracterização mais completa da ação farmacológica do antibiótico. Usando os protocolos aqui delineados, demonstrámos que imaginar a resposta fenotípica da célula ao tratamento com antibióticos pode revelar uma visão da acção farmacológica do fármaco. No total, a porção de imagem deste protocolo leva aproxim...

Clostridium difficile é uma bactéria gram-positiva, formadora de esporos, causando cerca de 500.000 infecções anualmente nos EUA e é considerada um patógeno urgente de ameaça pelos Centros de Controle e Prevenção de Doenças (CDC), o maior nível de risco. A década passada tem visto um desenvolvimento considerável de fármacos em antimicrobianos com atividade contra C. difficile . 2 , 3 Os estudos in vitro são um componente necessário do processo de desenvolvimento do fármaco. 4 Tradicionalmente, estudos de susceptibilidade in vitro e morte são usados ​​para validar futuros estudos animais e outros in vivo . Embora estes métodos desempenhem um papel importante na avaliação da acção de morte, não capturam a resposta fenotípica das células ao tratamento farmacológico. Ao incorporar microscopia eletrônica de varredura (MEV) comD matando estudos cinéticos, uma caracterização mais completa dos efeitos diretos do antibiótico é possível. 5 , 6 , 7 Aqui, apresentamos um método em que o SEM é utilizado como um meio para perfilar a eficácia do tratamento antibiótico.

<table><tbody><tr><td>gaze de algodão&nbsp;</td><td>Caring</td><td>PRM21408C</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Macron</td><td>7532</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de 50 mL Falcon</td><td></td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>Infusão de Cérebro e Coração (BHI)&nbsp;</td><td>Critério</td><td>C5141</td><td></td></tr><tr><td>L-cisteína</td><td>Alfa Aesar</td><td>A10389</td><td></td></tr><tr><td>extrato de levedura</td><td>Critério</td><td>C741</td><td></td></tr><tr><td>taurocolato de sódio</td><td>Alfa Aesar</td><td>A18346</td><td></td></tr><tr><td>câmara anaeróbica</td><td>Coy</td><td></td><td>vinil câmara anaeróbica</td></tr><tr><td>cicloserinecefoxitina placas de ágar frutose (CCFA)</td><td>Sistemas anaeróbios</td><td>AS-213</td><td></td></tr><tr><td>placas de ágar sangue</td><td>Diagnósticos Hardy</td> Reagente de aglutinação de látex <td>A-10</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Oxoid</td><td>DR1107A</td><td>C. diff kit de teste</td></tr> tubos <tr><td>de microcentrífuga</td><td>Eppendorf</td><td>222363204</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>10010-031</td><td></td></tr><tr><td>4% de paraformaldeído</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-259-98</td><td></td></tr><tr><td>lâminas de microscópio</td><td>J. Melvin liberado marca</td><td>7525M</td><td>75 x 25mm</td></tr><tr><td>capuz de fluxo</td><td>Labconco</td><td>Classe II tipo A2&nbsp;</td><td>armário de biossegurança</td></tr><tr><td>máquina de pulverização catódica</td><td>de mesa Denton Vacuum</td><td>Desk II</td><td></td></tr><tr><td>fita</td><td>Plastic Core</td><td>05072-AB</td><td>SPI Fita de carbono adesiva de dupla face</td></tr><tr><td>ouro</td><td>Denton Vacuum</td><td>TAR001-0158</td><td>2.375 " Diâmetro x 0,002" Microscópio</td></tr><tr><td>eletrônico de varredura</td> de folha de ouro grosso <td>FEI</td><td>XL-30</td><td></td></tr></tbody></table>

protocolo para caracterizar as alterações morfológicas<em&gt; clostridium difficile</em&gt; em resposta ao tratamento antibiótico

A Protocol to Characterize the Morphological Changes of Clostridium difficile in Response to Antibiotic Treatment

A avaliação da ação antibiótica com o desenvolvimento de novos fármacos voltados para as bactérias anaeróbias é difícil e tecnicamente exigente. Para se ter uma ideia do possível MOA, as alterações morfológicas associadas à exposição aos antibióticos podem ser visualizadas utilizando microscopia electrónica de varrimento (SEM). Integrar a imagem de SEM com as curvas tradicionais de morte pode melhorar nossa visão sobre a ação da droga e avançar no processo de desenvolvimento da droga. Para testar esta premissa, as curvas de morte e os estudos de SEM foram conduzidos utilizando fármacos com MOA conhecidos mas diferentes (vancomicina e metronidazol). As células de C. difficile (R20291) foram cultivadas com ou sem a presença de antibiótico até 48 h. Ao longo do intervalo de 48 h, as células foram recolhidas em múltiplos pontos de tempo para determinar a eficácia de antibióticos e para imagens no SEM. De acordo com os relatórios anteriores, a vancomicina eo metronidazol apresentaram uma actividade bactericida significativa após 24 h de tratamento, tal como medido pela unidade de formação de colónias (UFC)Ting Usando a imagem SEM, determinou-se que o metronidazol teve efeitos significativos sobre o comprimento celular (&gt; 50% de redução no comprimento celular para cada antibiótico, P &lt;0,05) em comparação com os controles e vancomicina. Embora a resposta fenotípica ao tratamento com fármaco não tenha sido previamente documentada desta forma, são consistentes com o MOA do fármaco demonstrando a versatilidade e fiabilidade da imagem e medições e a aplicação desta técnica para outros compostos experimentais.

Clostridium difficile é uma bactéria formadora de esporos e, portanto, é essencial para determinar as diferenças morfológicas entre células vegetativas e esporos antes de qualquer análise funcional. A Figura 1 demonstra imagens representativas de células vegetativas que foram capturadas durante a fase exponencial da curva de crescimento e células de esporos. Conforme ilustrado, as células vegetativas são longas, lisas, em forma de haste estruturas enqua...

A eficácia dos antibióticos é mais comumente determinada pela realização de estudos cinéticos de morte e medição de unidades formadoras de colônias (UFCs). Ao integrar a microscopia eletrônica de varredura (MEV) com esses métodos padrão, podemos distinguir os efeitos farmacológicos do tratamento entre diferentes antibióticos.

Protocolo para Caracterizar as Alterações Morfológicas<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; Em resposta ao tratamento antibiótico

Assessment of antibiotic action with new drug development directed towards anaerobic bacteria is difficult and technically demanding. To gain insight into ...

O objetivo geral deste método de imagem microbiológica é fornecer um meio mais descritivo para distinguir os efeitos fenotípicos do tratamento farmacológico. Assim, este método pode realmente ajudar na área de doenças infecciosas. Especificamente, analisando os efeitos morfológicos de certos antibióticos e como eles matam o C.Difficile.A principal vantagem desta técnica é que ela combina imagens de alta resolução com técnicas de cultura celular in vitro para fornecer uma visão detalhada da ação letal de fármacos. A implicação desta técnica pode estender-se ao tratamento da infecção por Clostridium difficile, ou CDI, em sua forma abreviada. O motivo é que esta técnica pode fornecer um meio para identificar como um antibiótico pode ser benéfico no tratamento da CDI.Embora este método possa fornecer informações sobre a ação farmacológica, ele também pode ser aplicado a outros sistemas, como modelos de culturas mistas ou estudos em animais in vivo. Geralmente, as pessoas têm dificuldade com este novo método porque o cultivo de C.difficile e a operação de um microscópio eletrônico de varredura são desafiadores. Tivemos pela primeira vez a ideia para este método quando estávamos tentando

a-protocol-to-characterize-morphological-changes-clostridium

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Fonte: Winston, J. A. et al. Modelo de camundongo tratado com cefoperazona da cepa clinicamente relevante de Clostridium difficile R20291. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra a quantificação de Clostridium difficile em amostras fecais de um modelo de camundongo infectado usando técnicas de cultivo seletivo. Ele descreve os procedimentos para coleta de amostras, processamento anaeróbico, diluição serial e enumeração de colônias para avaliar a colonização bacteriana e as interações...

Quantificação de Clostridium difficile em Amostras Fecais de um Modelo de Camundongo Infectado

Este vídeo demonstra um ensaio para medir o acúmulo de uma sonda antibiótica fluorescente em células bacterianas. A exposição a um inibidor da bomba de efluxo interrompe o gradiente de prótons transmembrana nas células bacterianas, sobre o qual um antibiótico conjugado com fluoróforo é adicionado. A inibição das bombas de efluxo devido ao gradiente de prótons interrompido causa acúmulo do antibiótico dentro da bactéria. As células bacterianas são lisadas e a intensidade da fluorescência é...

Um ensaio para medir o acúmulo de uma sonda antibiótica fluorescente em células bacterianas

Clostridium difficile é uma bactéria patogênica que é um anaeróbio estrito e causa diarreia associada a antibióticos (DAA). Aqui, os métodos para o isolamento, a cultura e manter C. As células vegetativas difficile e esporos são descritos. Essas técnicas necessitam de uma câmara de anaerobiose, o que requer uma manutenção regular para garantir condições adequadas para melhor C. cultivo difficile.

Cultivar e Manter<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; Em um ambiente anaeróbico

Este protocolo descreve o modelo do rato cefoperazona de infecção por Clostridium difficile (CDI), utilizando uma estirpe clinicamente relevante e geneticamente-tratável, R20291. Ênfase na monitorização clínica da doença, C. difficile enumeração bacteriana, a citotoxicidade de toxinas, e alterações histopatológicas em todo CDI em um modelo de rato estão detalhadas no protocolo.

tratados com Cefoperazone Rato Modelo de clinicamente relevante<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; R20291 Strain

Este artigo descreve um método de microarray de proteína simples para perfilação humorais respostas imunes a um painel de 7-plex de altamente purificado antígenos de Clostridium difficile em soros humanos. O protocolo pode ser estendido para a determinação de respostas de anticorpos específicos em preparações de imunoglobulina intravenosa policlonal.

Um ensaio de Microarray da proteína para determinação sorológica do antígeno-específicas anticorpo respostas seguintes Clostridium difficile infecção

Antibióticos fluorescentes são ferramentas poderosas que podem ser usadas para estudar múltiplos aspectos da resistência antimicrobiana. Este artigo descreve a preparação de antibióticos fluorescentes e sua aplicação para estudar a resistência a antibióticos em bactérias. As sondas podem ser usadas para estudar mecanismos de resistência bacteriana (por exemplo, efflux) por espectrofotometria, citometria de fluxo e microscopia.

Visualização da resistência bacteriana usando sondas de antibióticos fluorescentes

Aqui, apresentamos um protocolo para estabelecer o modelo de camundongo com colite induzida por sódio com sulfato de dextrano livre de germes induzido por antibióticos para investigar o papel da microbiota intestinal na regulação dos efeitos positivos do Bacillus cereus na colite.

Investigando os efeitos aliviadores da administração de Bacillus cereus na colite por meio da modulação da microbiota intestinal

A persistência de antibióticos descreve a capacidade de pequenas subpopulações dentro de uma população isogênica sensível de tolerar transitoriamente altas doses de antibióticos bactericidas. O presente protocolo combina abordagens para caracterizar o fenótipo de persistência do antibiótico em nível molecular e celular após exposição de Escherichia coli a doses letais de ofloxacina.

Análise Populacional e Unicelular da Persistência de Antibióticos em Escherichia coli

Testes de susceptibilidade antimicrobiana Atualmente, o diagnóstico baseia-se no crescimento planctônico dos isolados em ricas em nutrientes, condições aeróbicas. Aqui, nós utilizamos um meio de escarro alternativa artificial para estudar susceptibilidade antimicrobiana de biofilmes de Pseudomonas aeruginosa em ambas as condições de aerobiose e microaerofilia mais representativas do pulmão da fibrose cística.

Uso de meio de escarro Artificial para testar a eficácia antibiótica contra<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Em condições mais relevantes para o Pulmão Fibrose Cística

Este artigo centra-se na identificação de conjuntos de dados de interação de alta confiança entre hospedeiro e as proteínas do patógeno usando uma combinação de dois métodos ortogonais: levedura de dois híbridos seguido de um ensaio de interação de alto rendimento em células de mamíferos chamada HT-GPCA.

Uma abordagem comparativa para caracterizar a paisagem de Patógeno-Hospedeiro interações proteína-proteína

Aprenda a caracterizar alterações morfológicas em Clostridium difficile após tratamento antibiótico usando microscopia eletrônica de varredura. Este método combina imagens de alta resolução com cultura in vitro para avaliar efeitos farmacológicos.

Protocolo para Caracterizar as Alterações Morfológicas

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