Name: Um procedimento abrangente para avaliar o desempenho In Vitro da neovascularização de Hemangioblastoma putativo usando o Spheroid brotando do ensaio (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-12T14:15:00.000+00:00
Duration: 8 min 26 s
Description: Aprenda a avaliar a neovascularização de hemangioblastomas usando o ensaio de brotamento de esferoides in vitro. Este método revela que a angiogênese clássica é um mecanismo complementar no desenvolvimento tumoral.

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Este trabalho foi financiado por doações da Xangai, Comitê de ciência e tecnologia (15411951800, 15410723200). Os autores desejam agradecer a Prof YuMei Wen e Prof Chao Zhao da Universidade para sua assistência técnica departamento de microorganismo patogênicos de Fudan.

Esse método foi realizado em conformidade com as directrizes aprovadas e regulamentos da investigação ética Comissão de Huashan Hospital, Universidade de Fudan. Medidas de segurança padrão correspondente foram seguidas em cada etapa. Para uma apresentação esquemática, por favor consulte a Figura 1.
1. celular cultura e construção do plasmídeo
<ol><li>Rotineiramente, manter a veia umbilical humana endothelial da pilha (HUVEC) no Dulbecco modificada do suplementado Eagle (DMEM) com 10% de soro fetal bovino (FBS), 100 unidades/mL de penicilina e 100 µ g/mL de estreptomicina em um 5% umidificado incubadora de CO2 a 37 ° C.</li>
	<li>PLKO.1 Digest plasmídeo com ApaI e EcoRI para a síntese do fragmento de shRNA. Certifique-se de que a sequência do oligonucleotide do vetor de shRNA BVS é CCGGGATCTGGAAGACCACCCAAATCTCGAGA TTTGGGTGGTCTTCCAGATCTTTTTG14.</li>
	<li>Em seguida, misture 20 sistema µΜ com frente 5 µ l de oligo, 5 µ l de oligo reverso, 5 µ l de 10x buffer de NEB e 35 µ l de DDQ2O junto (o volume total é de 50 µ l). Aqueça a mistura a 98 ° C durante 4 min e lentamente a frio até à temperatura em poucas horas.</li>
	<li>Ligam os oligos recozidos e plasmídeo PLKO.1 juntamente com T4 ligase a 4 ° C para a noite. 16 h depois, adicione 5 µ l do mix de ligadura em 25 µ l competente DH5α as células. Em seguida, tela os plasmideos com êxito ligados e verifique se o fragmento inserido por sequenciamento.</li>
</ol>2. infecção e pacote de lentivirus
<ol><li>No total, misture 10 µ g do vetor PLKO.1-shVHL ou PLKO.1-shScramble, 7,5 µ g do plasmídeo psPAX2 de embalagem e 2,5 µ g do envelope do plasmídeo pMD2.G em 500 µ l da mídia DMEM sem soro fetal bovino (FBS) por 25 min.</li>
	<li>Adicione 7 mLDMEM sem FBS a solução preparada acima.</li>
	<li>Células de cultura 293FT no DMEM sem FBS em um pratos de cultura de tecido de 10 cm de diâmetro. Certifique-se de que o número de células de 293FT é 1 x 107 usando um contador de célula.</li>
	<li>Adicione 1 mL da solução preparada acima para o meio das células de 293FT para transfeccao. Nota: A linha de celular 293FT é derivado da linhagem de células 293F e estàvel expressar o antígeno de T grande SV40. Portanto, é um hospedeiro adequado para a produção de Lentivirus.</li>
	<li>Substituir o meio de cultura com o DMEM contendo 10% FBS após 6 h.</li>
	<li>Recolha a mídia usando uma pipeta em 48 h depois do transfection. Nota: O vírus existe no DMEM contendo 10% FBS. O flutuador de células mortas no meio. Use estéril membrana de 0,45 µm para filtrar as células mortas e impurezas. Geralmente, não há nenhuma necessidade de verificar a multiplicidade de infecção (MOI). Isto é para estabelecer uma linha de células estáveis. Na última etapa, todas as células vivas sem infecção bem sucedida morrerá por puromicina. O grupo shScramble e células HUVEC são um grupo de controle. Certifique-se de que todas as células HUVEC morrercom com a concentração de puromicina usado por 72 h. Cada poço tem o mesmo número de células.</li>
	<li>Cultura de células HUVEC na mídia lentivirus para 72 h. Em seguida, adicione a puromicina aos meios de comunicação das células HUVEC na concentração de 2 µ g/mL para células de uso HUVEC 24 h. sem qualquer tratamento, como o grupo de controle. Certifique-se de que todos controlam células morrem por esta altura. Nota: As células vivas representam uma linha de celular estável da BVS "knockdown" células e células shSramble. A densidade do chapeamento é 5.000/bem em placas de 96 poços.</li>
</ol>3. geração de células endoteliais esferoides
<ol><li>Trypsinize as células de HX e Resuspenda em meio DMEM com 10% FBS. Com um número moderado de células numa placa de cultura de 10 cm, adicione 1 mL de EDTA-typsin.</li>
	<li>As células em uma placa de 96 poços de fundo redondo 3D, em uma densidade de células de 1 × 103 células/poço da semente. Use um bem que pode acomodar um esferoide de 0,50 µ l para suspender o spheroid. Contar as células usando um sistema de contador de células seguindo as instruções do fabricante.</li>
	<li>Incube as células a 37 ° C e 5% CO2 continuamente por 72 h. Nestas condições, certifique-se de que a suspensão de células formam os esferoides de célula automaticamente. Substitua metade do meio de cultura após 36 h.</li>
</ol>4. ensaio de angiogênese in vitro
<ol><li>Descongelar a solução de gel a 4 ° C e dilui-lo com o meio de soro reduzido a uma proporção de diluição de 1:5.</li>
	<li>Chupe os esferoides DMEM meio de cultura com uma micropipeta. Depois de lavar os esferoides com 5 mL de meio de soro reduzida, suspenda os esferoides suavemente e cautelosamente no gel diluído. Certifique-se de que não há nenhuma bolha de ar.</li>
	<li>Incorpore a 300 µ l de líquido misturado em uma placa de 15. Após incubação a 37 ° C e 5% de CO2 para 1 h, adicione 400 µ l de meio de soro reduzida a cada poço. Encha de água estéril em torno dos poços para gerar um ambiente umidificado para impedir a evaporação.</li>
	<li>Depois disso, cultura a placa a 37 ° C em 5% CO2 em 100% de umidade por 1h.</li>
	<li>Cuidadosamente, Aspire o meio velho e substituí-lo por 600 µ l de meio de soro reduzida com suplementos de crescimento de células endoteliais de 1% em cada poço.</li>
	<li>Depois de 12h ou 24h, tirar fotos sob um microscópio invertido (40 *).</li>
</ol>5. análise de dados
<ol><li>Carregar as imagens para uma plataforma de análise de imagem on-line para obter dados de comprimento de broto (Tabela de materiais).</li>
	<li>Na página da Web, crie uma conta por e-mail.</li>
	<li>Em seguida, carregar as imagens, clicando no botão upload.</li>
	<li>Baixe o resultado clicando no botão de download. Nota: O software irá gerar a imagem processada e os dados. Os dados contêm cinco partes: broto cumulativa comprimento, comprimento do broto média, o desvio-padrão de comprimento do broto, broto área e área de esferoide. Na imagem processada, cada parâmetro é descrito em uma cor diferente para facilitar a identificação da imagem processada: vermelha representa sprouts esqueleto, amarelo com o número de brotos, azul a estrutura broto, broto branco final e esferoide laranja.</li>
</ol>

<ol><li>Lonser, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0140673603136434">von Hippel-Lindau disease.</a> Lancet. 361 (9374), 2059-2067 (2003).</li>
<li>Hussein, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+nervous+system+capillary+haemangioblastoma%3A+the+pathologist%27s+viewpoint%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Exp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Central nervous system capillary haemangioblastoma: the pathologist's viewpoint.</a> Int J Exp Pathol. 88 (5), 311-324 (2007).</li>
<li>Ma, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemangioblastomas+might+derive+from+neoplastic+transformation+of+neural+stem+cells%2Fprogenitors+in+the+specific+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">Hemangioblastomas might derive from neoplastic transformation of neural stem cells/progenitors in the specific niche.</a> Carcinogenesis. 32 (1), 102-109 (2011).</li>
<li>Zhuang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+derived+vasculogenesis+in+von+Hippel-Lindau+disease-associated+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Tumor derived vasculogenesis in von Hippel-Lindau disease-associated tumors.</a> Sci Rep. 4, 4102(2014).</li>
<li>Glasker, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VHL-deficient+vasculogenesis+in+hemangioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Pathol%22%5BJournal%5D)">VHL-deficient vasculogenesis in hemangioblastoma.</a> Exp Mol Pathol. 96 (2), 162-167 (2014).</li>
<li>Wizigmann-Voos, S., Breier, G., Risau, W., Plate, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Up-regulation+of+vascular+endothelial+growth+factor+and+its+receptors+in+von+Hippel-Lindau+disease-associated+and+sporadic+hemangioblastomas%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Up-regulation of vascular endothelial growth factor and its receptors in von Hippel-Lindau disease-associated and sporadic hemangioblastomas.</a> Cancer Res. 55 (6), 1358-1364 (1995).</li>
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<li>Ma, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+tumorigenic+cells+and+implication+of+their+aberrant+differentiation+in+human+hemangioblastomas%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Biol+Ther%22%5BJournal%5D)">Identification of tumorigenic cells and implication of their aberrant differentiation in human hemangioblastomas.</a> Cancer Biol Ther. 12 (8), 727-736 (2011).</li>
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<li>Morin, K. T., Tranquillo, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+models+of+angiogenesis+and+vasculogenesis+in+fibrin+gel%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">In vitro models of angiogenesis and vasculogenesis in fibrin gel.</a> Exp Cell Res. 319 (16), 2409-2417 (2013).</li>
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<li>Straume, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+heat+shock+protein+27+induces+long-term+dormancy+in+human+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Suppression of heat shock protein 27 induces long-term dormancy in human breast cancer.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (22), 8699-8704 (2012).</li>
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<li>Naumov, G. N., Folkman, J., Straume, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+dormancy+due+to+failure+of+angiogenesis%3A+role+of+the+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Tumor dormancy due to failure of angiogenesis: role of the microenvironment.</a> Clin Exp Metastasis. 26 (1), 51-60 (2009).</li>
<li>Wang, Y., Yang, J., Du, G., Ma, D., Zhou, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effects+respond+to+cerebral+ischemia+without+susceptibility+to+HB-tumorigenesis+in+VHL+heterozygous+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Carcinog%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effects respond to cerebral ischemia without susceptibility to HB-tumorigenesis in VHL heterozygous knockout mice.</a> Mol Carcinog. 56 (10), 2342-2351 (2017).</li>
<li>Stratmann, R., Krieg, M., Haas, R., Plate, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Putative+control+of+angiogenesis+in+hemangioblastomas+by+the+von+Hippel-Lindau+tumor+suppressor+gene%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuropathol+Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Putative control of angiogenesis in hemangioblastomas by the von Hippel-Lindau tumor suppressor gene.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 56 (11), 1242-1252 (1997).</li>
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</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Recentemente, vários campos de pesquisa da biologia vascular foram estimulados pelo estudo do endotélio angiogênico15. Neste artigo, nós desenvolvemos um esferoide endotelial brotando técnica como modelo experimental para estudar a formação de vasos que se origina a perda do gene da BVS da função nas células endoteliais manipuladas para identificar moléculas candidato romance do angiogênico cascata. O melhor de nosso conhecimento, este é o primeiro relatório para examinar os efeitos de angiogênico...

Hemangioblastomas (HBs) são tumores vasculares benignos encontrados exclusivamente dentro do sistema nervoso central humano (CNS). Eles desenvolvem em pacientes com doença de von Hippel-Lindau (BVS) ou lesões esporádicas. BVS-HBs são difíceis de curar através de tratamento cirúrgico devido a frequente recorrência e desordem de múltiplas lesões que resultam genética1. Embora a inactivação do gene supressor de tumor da BVS tem sido considerada a causa de tumorigênese da BVS-HBs, a origem citológica (incluindo a neovascularização) e processo evolutivo de HBs permanecem em grande medida controversa2. Portanto, uma melhor compreensão dos mecanismos biológicos HB-neovascular pode fornecer insights úteis sobre antivasculares mais promissoras para BVS-HBs.
Recente pesquisa sugeriu que HB-neovascularização é semelhante ao embriológicas vasculogenesis3,4,5. Clássico vascular fator de crescimento endotelial (VEGF)-mediada angiogênese que originou o endotélio vascular e que é impulsionado pela perda da BVS da função resultou na proliferação e formação neovascular, que tem sido desafiado a6. Em 1965, Cancilla e Zimmerman encontrado, usando microscopia eletrônica, que HBs originaram-se o endotélio7. Mais tarde verificou-se que as células do estroma são derivadas de vasoformative elemento8. Em 1982, Jurco et al . encontraram que as células do estroma são de origem endotelial9. Portanto, formulamos a hipótese que vascular em células endoteliais humanas é as células originais do HB-neovascularização10. Embora seja melhor usar as culturas primárias de HB células derivadas de cirurgias pacientes BVS, nossa pesquisa anterior indicou que culturas primárias de HB não são estáveis, e linhas de célula não podem ser estabelecida3. Além disso, as culturas primárias no ambiente 3D não conseguiu identificar a origem citológica do HB-neovascularização porque eles incluem os progenitores de HB-vascular ingredientes10,11. Portanto, como um modelo primitivo e clássico das células endoteliais, células endoteliais vasculares humanas (HUVEC) poderiam servir como um modelo alternativo de celular para HBs.
O ensaio de germinação esferoide é um novo modelo em tecido engenharia12,13. Neste trabalho, um 3D baseados em colágeno coculture sistema em vitro usando o spheroid brotando do ensaio foi desenvolvido, com um objectivo global para avaliar se a vasculogênese clássico existe em HBs, bem como seu papel na HBs.

<table><tbody>dulbecco <tr>humano do centro <td>FDCC-HXN180</td><td></td>da pilha de <td>Fudan IBS</td> da <td>pilha da veia umbilical</td></tr><tr><td> s águia modificada' s médio&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>11995040</td><td></td></tr><tr><td>soro fetal bovino</td><td>Gibco</td><td>&nbsp; </td><td></td>26400044</tr><tr><td>PLKO.1-puro vector</td><td>Addgene</td><td>#8453</td><td></td></tr><tr><td>plasmídeo de empacotamento psPAX2&nbsp;</td><td>Addgene</td><td>#12260</td><td></td></tr><tr><td>envelope plasmídeo pMD2.G</td><td>Addgene</td><td>#12259</td><td></td></tr><tr><td>3D placas de fundo redondo de 96 poços</td><td>S-Bio</td><td>MS-9096M</td><td></td></tr><tr><td>matrigel</td><td>BD Biosciences</td><td>354234</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM meio</td><td>Gibco</td><td>31985-070</td><td>meio de soro reduzido&nbsp;</td></tr><tr><td>Placa de 15 poços</td><td>Ibidi</td><td>81501</td><td>Bolhas de ar no gel podem ser reduzidas equilibrando o &mu; &ndash; Deslize a angiogênese antes do uso dentro da incubadora durante a noite</td></tr><tr><td>suplementos de crescimento de células endoteliais</td><td>Sciencell</td><td>#1052</td><td></td></tr><tr><td>Prato de cultura de 10 cm</td><td>Corning</td><td>Scipu000813</td><td></td></tr><tr><td>Puromicina</td><td>Gibco</td><td>A1113802</td><td></td></tr><tr><td>typsin-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td></td></tr><tr><td>Sistema Automatizado de Contador de Células &nbsp;</td>Software de análise de imagem <td>BioTech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Winmasis</td><td></td><td>http://mywim.wimasis.com&nbsp;</td></tr></tbody></table>

um procedimento abrangente para avaliar o desempenho in vitro da neovascularização de hemangioblastoma putativo usando o spheroid brotando do ensaio

A Comprehensive Procedure to Evaluate the In Vitro Performance of the Putative Hemangioblastoma Neovascularization Using the Spheroid Sprouting Assay

A inactivação do gene supressor de tumor da von Hippel-Lindau (BVS) desempenha um papel crucial no desenvolvimento da hemangioblastomas (HBs) dentro do sistema nervoso central humano (CNS). No entanto, tanto a origem citológica e o processo evolutivo da HBs (incluindo a neovascularização) permanecem controversas, e antiangiogênese para BVS-HBs, baseados no clássico HB angiogênese, têm produzido resultados decepcionantes em ensaios clínicos. Um grande obstáculo para o sucesso clínico tradução de tratamento anti-vascular é a falta de uma compreensão completa de neovascularização neste tumor vascular. Neste artigo, apresentamos um procedimento abrangente para avaliar em vitro se vasculogênese clássico existe em HBs, bem como seu papel na HBs. Com este procedimento, pesquisadores com precisão podem compreender a complexidade do HB neovascularização e identificar a função desta forma comum de angiogênese em HBs. Estes protocolos podem ser usados para avaliar a terapia anti-vascular mais promissor para os tumores, que tem alto potencial de translação para tratamento de tumores ou para ajudar na otimização do tratamento antiangiogênico para HBs, no futuro, traduções. Os resultados destacam a complexidade da HB neovascularização e sugerem que esta angiogênese formulário comum é apenas um mecanismo complementar em HB neovascularização.

Imagens originais são tomadas pelo microscópio invertido. As imagens típicas do grupo controle e o grupo BVS são mostradas na Figura 2-A1 e Figura 2-A2. O comprimento de germinação do grupo controle é mais curto que a do grupo BVS.
Depois de carregar as imagens, a plataforma on-line fornece resultados de análise diretamente. A saída con...

Este trabalho apresenta um procedimento abrangente para avaliar em vitro se vasculogênese clássico existe em hemangioblastomas (HBs) e seu papel na HBs. Os resultados destacam a complexidade do HB-neovascularização e sugerem que esta forma comum de angiogênese é apenas um mecanismo complementar no HB-neovascularização.

Um procedimento abrangente para avaliar o desempenho In Vitro da neovascularização de Hemangioblastoma putativo usando o Spheroid brotando do ensaio

The inactivation of the von Hippel-Lindau (VHL) tumor suppressor gene plays a crucial role in the development of hemangioblastomas (HBs) within the human ...

O objetivo geral deste experimento é avaliar o desempenho da possível neovascularização do hemangioblastoma usando o ensaio de brotamento esferóide in vitro. O método pode ajudar a responder às principais questões no campo angiogênico, como a angiogênese tumoral. A principal vantagem desta técnica é que o produto de um procedimento abrangente para avaliar in vitro onde a angiogênese tumoral clássica existe no hemangioblastoma e cresce no hemangioblastoma.A implicação dessa técnica se estende à terapia do hemangioblasto e da vasculatura, pois o resultado destaca a complexidade do hemangioblasto ou da neovascularização, o que sugere que essa forma comum de angiogênese é apenas um mecanismo complementar. Portanto, este método pode fornecer informações sobre o estudo do hemangioblasto ou neovascularização. Também pode ser aplicado a tumores, angiogênese e aplicação relacionada à vasculogênese em alguns tumores sólidos, como mimetismo vasculogênico tumoral em tumor de vidro.A demonstração real deste método é crítica, pois a geração dessas etapas esferóides de células endoteliais manipuladas é difícil de aprender. Porque a condição adequada é importante. Primeiro, cultive as células endo

a-comprehensive-procedure-to-evaluate-vitro-performance-putative

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

A invasão dos tecidos normais circundantes é uma característica definidora dos tumores malignos. Fornecemos aqui um ensaio simples e semi-automatizado de microplacas de invasão em uma biomatriz 3D natural que foi exemplificada com vários modelos de cânceres humanos avançados.

Tridimensional (3D) Tumor Esferóide Invasion Assay

O protocolo descreve como engenheiro uma rede vascular perfusable em um esferoide. Microambiente ao redor do spheroid é concebido para induzir a angiogênese e conectar o spheroid para os microcanais em um dispositivo microfluidic. O método permite a perfusão do spheroid, que é uma técnica muito aguardada em culturas tridimensionais.

Perfusable rede Vascular com um modelo de tecido em um dispositivo Microfluidic

Este apresenta protocolo um grânulo de romance em vitro ensaio que mais apropriadamente modela o processo na vivo brotando angiogênese incorporando pericitos. Esta modificação permite que o ensaio de grânulo mais fielmente recapitular as interações heterotypic celulares entre células endoteliais e células murais que são críticas para a angiogênese.

Incorporando um grânulo de célula endotelial brotando ensaio pericitos

Este método descreve a cultura das células endotélias derivadas do iPSC como 40 microvasos 3D perfundidos em uma plataforma microfluídica padronizada. Esta plataforma permite o estudo do sprouting angiogenic gradiente-conduzido em 3D, incluindo a anastomose e a estabilização dos sprouts angiogenic em uma maneira escalável e high-throughput.

Ensaio padronizado e escalável para estudar perfundido 3D Angiogênico Sprouting de células endotelias derivadas do iPSC in vitro

O sistema esferóide tridimensional do ensaio da angiogênese da cocultura é projetado imitar a angiogênese fisiológica. Os esferoides da co-cultura são dados forma por dois precursores vasculares humanos da pilha, por ecfcs e por MSCS, e incorporados no gel do colagénio. O novo sistema é eficaz para avaliar moduladores angiogênicos e fornece informações mais relevantes para o estudo in vivo.

Sistema tridimensional do ensaio da angiogênese usando spheroids da co-cultura dados forma pela colônia endothelial que dá forma a pilhas e às pilhas de haste mesenchymal

Este protocolo apresenta ensaio de brotos de choroide, um modelo ex vivo de proliferação microvascular. Este ensaio pode ser usado para avaliar caminhos envolvidos na proliferação de micro vasos choroidais e avaliar tratamentos medicamentosos usando tipo selvagem e tecido de camundongos geneticamente modificados.

Um Ensaio Ex Vivo Choroid de Angiogênese Microvascular Ocular

Este ensaio utiliza células-tronco embrionárias de camundongos diferenciadas em corpos embrionários cultivadas em gel de colágeno 3D para analisar os processos biológicos que controlam a angiogênese brotada in vitro. A técnica pode ser aplicada para testar drogas, modelar doenças e estudar genes específicos no contexto de deleções embrionariamente letais.

In vitro Ensaio Tridimensional de Angiogênese Utilizando Células-Tronco Embrionárias de Camundongos para Modelagem de Doenças Vasculares e Testes de Fármacos

O crosstalk entre células epiteliais mamárias e células endoteliais contribui importantemente para a progressão do câncer de mama, crescimento do tumor e metástase. Neste estudo, os esferoides foram feitos a partir de células cancerígenas de mama juntamente com células endoteliais vasculares e/ou linfáticas e demonstram sua aplicabilidade como um sistema in vitro para pesquisa de câncer de mama.

Eferóides de células epiteliais e endoteliais como um modelo in vitro potencial funcional para pesquisa de câncer de mama

Aqui, apresentamos um protocolo que permite a fabricação rápida, robusta e barata de esferoides tumorais seguida de encapsulamento em hidrogel. É amplamente aplicável, pois não requer equipamentos especializados. Seria particularmente útil para explorar interações matriz-esferóide e construir modelos in vitro de fisiologia ou patologia tecidual.

Fabricação e encapsulamento de esferoides tumorais em hidrogéis de polietilenoglicol para estudo de interações esferóide-matriz

Este estudo apresenta o ensaio de migração bidimensional (2D) e o ensaio tridimensional (3D) de brotamento esferóide, juntamente com seus respectivos métodos de análise a jusante, incluindo extração de RNA e imunocitoquímica, como ensaios adequados para estudar a angiogênese in vitro.

Investigando a angiogênese em nível funcional e molecular, aproveitando o ensaio de migração de feridas por arranhões e o ensaio de brotamento de esferóides

Aprenda a avaliar a neovascularização de hemangioblastomas usando o ensaio de brotamento de esferoides in vitro. Este método revela que a angiogênese clássica é um mecanismo complementar no desenvolvimento tumoral.

Um procedimento abrangente para avaliar o desempenho In Vitro da neovascularização de Hemangioblastoma putativo usando o Spheroid brotando do ensaio (Vídeo) | JoVE Journal

Um procedimento abrangente para avaliar o desempenho In Vitro da neovascularização de Hemangioblastoma putativo usando o Spheroid brotando do ensaio

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