Um método colorimétrico para medir o teor de ferro nas plantas

Apresentamos um protocolo simples e confiável para medir o teor de ferro em tecidos vegetais usando o método colorimétrico do azul da Prússia.

Apenas medicamente, pode ajudar a responder a uma questão-chave no campo da biologia. Por exemplo, como podemos quantificar facilmente o ferro em amostras de núcleo de biologia. O principal empreendimento dessa técnica é que ela é uma técnica colorimétrica fácil de produzir e muito precisa.

Ao preferir esta técnica, você deve evitar a contaminação por ferro. A demonstração visual deste método ajudará você a entender suas diferentes etapas. Para iniciar este procedimento, prepare potes de cinco centímetros por cinco centímetros, enchendo-os com meio de pote padrão.

Plante uma semente de tabaco em cada vaso. Transfira as plantas para uma sala de crescimento que esteja a uma temperatura constante, em condições de dias longos de 23 graus Celsius. Irrigue com água da torneira até que a água escorra do vaso e cultive as plantas por aproximadamente 50 dias.

Após este tempo, iniciar tratamentos de ferro na irrigação em concentrações apropriadas para o experimento. Irrigue as plantas com esta solução a cada dois dias por seis a oito dias. Em seguida, retire as folhas do caule com a mão, certificando-se de não usar nenhum equipamento de metal.

Usando um borrifador cheio de água bidestilada Seque as folhas em uma toalha de papel e transfira-as para um saco de papel. Coloque os sacos cheios de folhas em um forno, ajustado a uma temperatura constante de 80 graus Celsius, por dois a três dias.

Limpe o almofariz e o pilão duas vezes, com uma solução de ácido clorídrico a 4%. E use um papel de filtro para secar. Usando o almofariz e o pilão, esmague as folhas secas até virar pó.

Em seguida, transfira o pó para tubos plásticos estéreis de 15 mililitros. Primeiro, pesar um frasco de cintilação novo e selado de 20 mililitros sem tampa. Anote o peso ou tara a balança.

Em seguida, adicione as folhas esmagadas. Pese a amostra no frasco e anote o peso. Use lã de rocha para fechar o frasco.

Pesar três frascos adicionais sem adicionar amostras, para uso como controle, anotando cada peso. Em seguida, transfira a amostra e os frascos de controle para um forno. Queime as folhas conforme descrito no protocolo de texto.

Depois disso, deixe as amostras esfriarem a aproximadamente 100 graus Celsius. Usando luvas e pinças pesadas, remova as amostras do forno, certificando-se de segurar o frasco externamente. Coloque os frascos para injetáveis em uma superfície plana.

Remova a lã de rocha e feche os frascos com suas tampas originais. Em seguida, pesar os três frascos de controle e calcular seu ganho de peso médio. Se o ganho de peso for igual ou superior a 1% do peso das cinzas, use esse valor como uma estimativa do erro de medição.

Pese um tubo de plástico de 15 mililitros. Registre o peso ou tara a balança. Em seguida, transfira as cinzas para o tubo.

Registre esse valor, que é o peso das cinzas. Em seguida, adicione cinco mililitros da solução de ácido clorídrico molar às cinzas. Filtre as cinzas através de um filtro de 22 micrômetros.

Em seguida, adicione mais cinco mililitros da solução molar de ácido clorídrico através do mesmo filtro, resultando em um volume final de amostra de 10 mililitros. Depois disso, remova quatro mililitros de cada amostra para medição por espectroscopia atômica. E determine a concentração de ferro por grama de cinza, conforme descrito no protocolo de texto.

Para começar, adicione quatro gramas de ferrocianeto de potássio a 100 mililitros de água bidestilada para preparar a solução azul da Prússia. Vórtice para misturar e armazenar a 4 graus Celsius até a hora de usar. Quando estiver pronto para usar, misture 50 mililitros de solução de azul da Prússia com 50 mililitros de ácido clorídrico de um molar para servir como solução em branco.

Em seguida, use uma pipeta para misturar 0,5 mililitros de uma amostra previamente obtida, com 0,5 mililitros de solução de azul da Prússia. Deixe essa mistura descansar por pelo menos um minuto, mas por menos de cinco minutos. Transfira essa mistura para uma cubeta e use um espectrofotômetro para medir a densidade óptica em 715 nanômetros.

Em seguida, determine a densidade óptica por grama de cinza e plote a regressão linear entre as concentrações de ferro, conforme descrito no protocolo de texto. Os resultados representativos de 21 amostras de folhas de tabaco mostram que a concentração de ferro na água de irrigação afetou muito o teor de ferro na folha. Os espectros de todas as 21 amostras representativas são então testados com o método do azul da Prússia.

Como visto aqui, a absorbância a 715 nanômetros é o comprimento de onda ideal ao medir soluções contendo diferentes concentrações de ferro dois e ferro três. Uma curva de regressão linear, obtida pela plotagem dos valores de concentração de ferro obtidos por espectroscopia atômica, versus os valores de absorbância, obtidos pelo método do azul da Prússia, permite que novas amostras do mesmo tipo de planta sejam analisadas. Não se esqueça de que trabalhar com HCL pode ser extremamente perigoso.

E precauções, como proteção para os olhos, devem sempre ser tomadas durante a realização deste procedimento. Na regressão linear, é importante verificar se os resultados estão em um intervalo realista. Após seu desenvolvimento, essa técnica pode ajudar o pesquisador de biologia a explorar plantas adicionais para produção de alimentos ou biorremediação.