Ensaio Colorimétrico à Base de Sulfonato de Batofenantrolina: Um Método Simples e Rápido para Quantificação de Ferro Não-Heme em Tecido Hepático de Camundongo

Nos tecidos, o ferro, mineral essencial crucial para vários processos metabólicos, normalmente existe sequestrado para hemoproteínas e proteínas de ferro não heme. As hemoproteínas incluem ferro ferroso ou heme ligado a anéis de porfirina, enquanto as proteínas de ferro não heme não possuem a estrutura do anel de porfirina e compreendem principalmente ferro férrico ou não heme.

Para estimar o teor de ferro não-heme no tecido hepático de camundongo, trate um fragmento de tecido hepático de camundongo seco e colhido com baixas concentrações de ácido clorídrico e ácido tricloroacético. Incube em altas temperaturas para digerir o tecido e facilitar a precipitação de proteínas induzida por ácido.

Devido às baixas concentrações de ácido, o ferro não-heme é liberado das proteínas associadas. O ferro heme, estando ligado ao anel de porfirina, permanece inalterado.

Após o resfriamento, transfira o volume desejado de sobrenadante contendo ferro não heme para uma placa de vários poços. Adicionar o quelante de ferro cromogénico, sulfonato de batofenantrolina, BPS, suplementado com ácido tioglicólico, um agente redutor, em tampão adequado e incubar.

O ácido tioglicólico reduz todo o ferro férri