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Extração de cafeína, atividade enzimática e expressão gênica de cafeína sintase de suspensões cel...
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Biochemistry
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JoVE Journal Biochemistry
Caffeine Extraction, Enzymatic Activity and Gene Expression of Caffeine Synthase from Plant Cell Suspensions

Extração de cafeína, atividade enzimática e expressão gênica de cafeína sintase de suspensões celulares de planta

Full Text
13,495 Views
09:11 min
October 2, 2018

DOI: 10.3791/58166-v

Roberto Pech-Kú1, J. Armando Muñoz-Sánchez1, Miriam Monforte-González1, Felipe Vázquez-Flota1, Beatriz A. Rodas-Junco2, S.M. Teresa Hernández-Sotomayor1

1Unidad de Bioquímica y Biología Molecular de Plantas,Centro de Investigación Científica de Yucatán, 2CONACYT, Facultad de Ingeniería Química, Campus de Ciencias Exactas e Ingeniería,Universidad Autónoma de Yucatán

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Este protocolo descreve uma metodologia eficiente para a extração e quantificação de cafeína em suspensões celulares de c. arabica L. e um processo experimental para avaliar a atividade enzimática da cafeína sintase com o nível de expressão de o gene que codifica esta enzima.

Este método pode ajudar a responder questões-chave nos campos de química analítica, bioquímica e biotecnologia. Tais como, quais são as mudanças que ocorrem na biossíntese da cafeína. A principal vantagem dessa técnica, é que ela pode ser aplicada a modelos de plantas invitro que produzem cafeína.

Para começar, adicione 10 mililitros de acetona às células liofilizadas e sele o frasco antes de misturar com o misturador de vórtice por 30 segundos. Em seguida, misture a amostra a 100 rpm com um rotador por cinco horas em temperatura ambiente. Depois disso, suspenda a amostra com 25 microliters de acetona.

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