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DOI: 10.3791/58270-v
Alexander R. Fuchs1, Melanie Märklin1, Jonas S. Heitmann1, Stefan Futterknecht1, Michael Haap2, Stefan Wirths1, Hans-Georg Kopp1, Clemens Hinterleitner1, Daniela Dörfel1, Martin R. Müller1
1Dept. of Hematology, Oncology and Immunology,University of Tübingen, 2Dept. of Endocrinology, Diabetology, Clinical Pathology and Metabolism,University of Tübingen
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This article presents a protocol for chromatin immunoprecipitation (ChIP) in human chronic lymphocytic leukemia (CLL) cells, focusing on the identification of novel target genes of NFAT2. The method aims to enhance understanding of oncogenic mechanisms and potential therapeutic interventions.
Leucemia linfocítica crônica (CLL) é a leucemia mais comum no mundo ocidental. Fatores de transcrição NFAT são importantes reguladores do desenvolvimento e ativação em numerosos tipos de células. Aqui, apresentamos um protocolo para o uso de imunoprecipitação da cromatina (ChIP) em células humanas de CLL identificar genes alvo romance de NFAT2.
Esse método pode ajudar a fornecer informações-chave no campo da oncologia, como a identificação de genes-alvo putativos e mecanismos patogênicos para desenvolver possíveis intervenções terapêuticas. A principal vantagem dessa técnica é que se pode detectar a interação de NFAT2 e outros fatores de transcrição com genes de destino conhecidos e novos. Geralmente, indivíduos novos neste método lutarão porque as condições ideais de fixação e desarquivamento são difíceis de estabelecer.
Para começar a encher um tubo de 1,5 mililitro com um mililitro de 37% de formaldeído. Em seguida, encha outro tubo de 1,5 mililitro com um mililitro de 1,25 molar glycine em um tubo de cinco mililitros com quatro mililitros de PBS. Em seguida, após a estimulação das células giram as células de acordo com o protocolo de texto, e re-suspendem as células em 500 microliters de PBS e colocam o tubo em uma caixa cheia de gelo.
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