Hibridação in situ da fluorescência quantitativa (peixes) e immunofluorescence (se) de produtos específicos do gene em pilhas KSHV-infectadas

O protocolo é útil para obter uma visão quantitativa sobre a regulação temporal de produtos genéticos virais, no contexto das células hospedeiras, especialmente em relação aos vírus herpes. Esta técnica pode ajudar a abordar questões de pesquisa relacionadas tanto ao hospedeiro quanto às proteínas e proteínas virais. Além disso, essa técnica é compatível com ensaios bioquímicos simultâneos.

Para aderir as células a oito lâminas de câmara, aplique 200 microliters de uma suspensão celular inerente a cada câmara de um estéril, oito lâminas de câmara e permitir o crescimento de sementes por 12-24 horas, a 37 graus Celsius, e 5% de dióxido de carbono. No final da incubação, aspire as células supernaciantes e não-sectadas, e fixar imediatamente as células com formaldeído pré-refrigerado de 4% em PBS no gelo, por 30 minutos. No final da fixação, lave as células com lavagens de três, cinco minutos em 200 microliters de 4 graus Celsius PBS por lavagem.