Um dispositivo de aquecimento/contenção contemporâneo para injeções eficientes de veia de cauda em um modelo de sepse fúngica murina

O dispositivo de aquecimento e contenção oferece uma técnica simplificada para a realização bem-sucedida de injeções intravenosas na veia da cauda, fornece aquecimento em um ambiente controlado e manuseio eficaz para conduzir a injeção intravenosa da veia da cauda. Antes de tentar a técnica, é importante se familiarizar com o protocolo e praticar com injeções salinas. A demonstração visual oferece a oportunidade de mostrar dicas e advertências para ajudar no procedimento.

Junko Yano, pós-doutorando em meu laboratório, montará o equipamento e eu demonstrarei o procedimento. Para inicializar o dispositivo de aquecimento, policie a unidade de aquecimento em uma bancada plana e limpa, ligando-a, certificando-se de que o indicador de energia do termostato lamp está aceso em verde. Em seguida, coloque o material de cama dentro da câmara de aquecimento para manter a área seca e reter o calor.

Para a configuração do dispositivo de contenção, coloque a unidade de contenção ao lado da unidade de aquecimento e determine os tamanhos de cone apropriados para o animal. Ajuste manualmente as larguras da base do cone de alumínio flexível para fornecer contenção adequada para o animal. Como alternativa, substitua o cone por modelos personalizados para acomodar animais de tamanhos variados.

Ajuste o termostato para a temperatura desejada usando o botão de controle, certificando-se de que o indicador do aquecedor esteja aceso em vermelho e que a lâmpada esteja acesa. Monitore cuidadosamente a exibição da temperatura interna enquanto a lâmpada estiver acesa. Ele será ativado automaticamente assim que a temperatura alvo for atingida.

Posicione a altura do cone da plataforma de retenção no nível ideal para o usuário com o botão de ajuste de altura. Assim que a temperatura alvo for atingida, transfira suavemente os animais da gaiola de alojamento para a câmara de aquecimento. A câmara de aquecimento pode conter com segurança quatro a seis camundongos ou um rato por no máximo 20 a 30 minutos.

O tratamento térmico por 5 a 10 minutos é suficiente para induzir a vasodilatação e aumentar a visibilidade das veias da cauda. Monitore o animal em busca de sinais de estresse térmico agudo, como respiração rápida, letargia ou comportamento de fuga de salto. Remova o animal da câmara levantando-o pela base da cauda e coloque-o na abertura do cone da unidade de retenção.

À medida que o animal agarra a borda mais distante do cone com as patas dianteiras, puxe suavemente a cauda para trás e passe a cauda pela fenda aberta. Prenda qualquer uma das patas traseiras que se projetam para fora do cone de modo que a veia lateral fique visível na posição de 12 horas. Segure a cauda no comprimento médio a 2/3 com a mão não dominante entre o polegar e o indicador, colocando uma leve tensão na veia lateral para manter o posicionamento da cauda e a vasodilatação.

Limpe a pele do local da injeção com uma gaze, esponja ou almofada umedecida com álcool a 70%. Segure a seringa com a mão dominante e posicione a agulha paralelamente à cauda. Insira a agulha na direção do fluxo sanguíneo em um ângulo de 10 a 25 graus e avance ainda mais no lúmen da veia penetrando de dois a quatro milímetros.

Injete lentamente a solução. Em caso de resistência ou bolhas brancas acima do local da injeção, remova a agulha e tente uma segunda injeção em um local acima da colocação original da agulha. Se a injeção de uma veia lateral não for bem-sucedida, reposicione o animal para o lado oposto e faça mais tentativas na veia contralateral.

Remova a agulha e pressione firmemente o local da injeção com o polegar para evitar o refluxo da solução injetada ou do sangue. Continue aplicando uma compressão suave com uma gaze limpa ou lenço de papel até que o sangramento pare. Retorne o animal à gaiola e monitore-o por cinco minutos, garantindo que o animal retome a atividade normal sem sangrar mais.

Uma vez que o aquecedor da câmara de aquecimento foi ativado, a emissão de calor pela lâmpada aumenta rapidamente a temperatura interna durante os primeiros 5 a 15 minutos, dependendo da temperatura alvo. O aquecedor inativa a lâmpada se a temperatura interna detectada exceder a temperatura definida. Posteriormente, o dispositivo repete automaticamente o ciclo de aquecimento para manter a temperatura interna.

Em um modelo de camundongo de candidíase da corrente sanguínea resultando em sepse, um desafio intravenoso com Candida albicans em camundongos Swiss Webster causou um rápido início de sepse e disseminação dos organismos, levando a alta mortalidade em três a quatro dias. Em contraste, os animais podem ser protegidos da sepse por pré-imunização ou vacinação com uma cepa avirulenta Candida dubliniensis, alcançando mais de 95% de sobrevivência após o desafio IV letal com C. albicans virulento. Os animais não vacinados com infecção letal tiveram um aumento significativo na morbidade induzida por sepse, enquanto o grupo vacinado exibiu sintomas mínimos após o desafio letal.

Os resultados em mortalidade progressiva versus proteção mediada por vacina foram obtidos de forma reprodutível em quatro experimentos independentes. Tenha cuidado ao posicionar o animal no cone para inclinar corretamente a agulha para acessar a veia, ajustar a agulha na veia e injetar a veia. Essa técnica simplificada oferece um meio eficiente e eficaz de realizar injeções nas veias da cauda que melhorarão os resultados científicos dos pesquisadores.