Preparação da Amostra e Quantitação Relativa usando Metilação Redutiva de Aminas para Estudos de Peptidômica

Aqui, descrevemos um método instrutivo baseado em uma rápida inativação de calor de protease para preservar peptídeos intracelulares naturais, evitar a degradação em células e tecidos, seguido de uma quantitação relativa de peptídeos usando rotulagem isotópica. Este método de rotulagem tem muitas vantagens. Os reagentes estão comercialmente disponíveis, baratos, quimicamente estáveis, e permitem a análise de até cinco amostras em um único soro.

Comece cultivando células de neuroblastoma humano em um prato de 15 centímetros em DMEM contendo 15% FBS e estreptomicina de penicilina de 1%. Mantenha as células a 37 graus Celsius sob 5% de dióxido de carbono. Lave as células duas vezes com PBS, depois adicione 10 mililitros de PBS, raspe as células e colete-as em um tubo de 15 mililitros.