Um Método Simples Modificado para Indução de Infarto do Miocárdio em Camundongos
3 de dezembro de 2021
Sob anestesia adequada, o coração de camundongo foi exteriorizado através do espaço intercostal, e o infarto do miocárdio foi induzido com sucesso pela ligadura da artéria descendente anterior (DA) usando materiais prontamente disponíveis na maioria dos laboratórios.
Este relato apresenta uma abordagem única para a indução de infarto do miocárdio em camundongos. O método atual é fácil, economiza tempo e utiliza tubos cirúrgicos e equipamentos encontrados prontamente na maioria dos laboratórios. O estabelecimento de modelos de infarto do miocárdio fornece uma premissa para investigar os mecanismos passados de remodelação pós-IAM e variação de novas terapêuticas.
Aplique o creme depilatório no peito do rato e aguarde um minuto. Em seguida, limpe suavemente o creme depilatório e os cabelos com gaze molhada. Fixe o mouse em uma plataforma cirúrgica na posição supina.
Desinfetar a área cirúrgica conforme descrito no texto. Em seguida, coloque um pano estéril ao redor da área desinfetada. Faça um corte de 0,5 centímetro na pele ao longo da linha que liga o xifoide e a axila, e separe sem rodeios os músculos peitoral maior e peitoral menor usando pinças.
Abra o quarto espaço intercostal usando um hemostático Micro-Mosquito. Exteriorizar o coração empurrando-o em direção ao quarto espaço intercostal com o dedo indicador da mão esquerda. Fixar o coração com a mão esquerda e ligar o ramo descendente anterior esquerdo com sutura 6/0 a três milímetros de sua origem.
Coloque o coração de volta na cavidade torácica rapidamente. Evacue o ar para fora da cavidade torácica pressionando suavemente a cavidade torácica. Para o controle da dor pós-operatória, injetar buprenorfina por via subcutânea a cada quatro a seis horas por até setenta e duas horas pós-operatórias.
Coloque o mouse em uma almofada de aquecimento para se recuperar da anestesia. Fixar o camundongo eutanasiado na plataforma cirúrgica na posição supina. Faça uma incisão ventral de aproximadamente três a quatro centímetros no abdome superior.
Corte as costelas de ambos os lados da cavidade torácica e, em seguida, remova o diafragma. Perfundir o coração com 10 mililitros de frio quatro graus celsius 1X PBS através de injeção intraventricular. Em seguida, colete o coração cortando a raiz da aorta e armazenando-o imediatamente a 80 graus Celsius negativos.
Corte o coração congelado em seções de um milímetro de espessura no gelo usando lâminas de barbear. Incubar as fatias de coração preparadas em solução de TTC a 1% dissolvida em um PBS 1X a 37 graus Celsius por 10 a 15 minutos. Em seguida, fotografe as fatias usando uma câmera digital.
Após a ligadura da artéria coronária, a análise da coloração TTC indicou indução bem-sucedida de infarto do miocárdio e mudanças temporais do tamanho da cicatriz pós-IM. Os resultados da análise de sobrevivência mostraram mortalidade evidente dentro de sete dias após o IM em camundongos C57BL/6J machos e fêmeas. A ruptura ventricular foi uma causa comum de morte pós-IAM.
A avaliação ecocardiográfica pós-IM demonstrou indução bem-sucedida de disfunção contrátil e remodelamento ventricular. Ao tentar exteriorizar o coração, não pressione a cavidade torácica em primeiro lugar e, seguindo nossa resistência, indica a necessidade de ajustar a direção contra o elogio ponderado. Após esse procedimento, a injeção intramiocárdica de vetores ou células virais pode ser realizada para testar a eficácia de terapias gênicas ou terapias celulares em questões de doenças cardíacas.
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Visão Geral
Este artigo apresenta um método para induzir infarto do miocárdio em camundongos, utilizando materiais cirúrgicos de fácil acesso. A técnica permite o estudo do remodelamento pós-IM e a avaliação de novos tratamentos terapêuticos.
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Pesquisa cardiovascular
- Modelos de infarto do miocárdio
- Técnicas cirúrgicas em estudos com animais
Contexto
- O infarto do miocárdio é uma área crítica de estudo na pesquisa cardiovascular.
- Compreender a remodelação pós-IM é essencial para o desenvolvimento de novos tratamentos.
- Os métodos existentes podem ser complexos ou exigir equipamentos especializados.
- Este estudo tem como objetivo simplificar o processo utilizando materiais de laboratório comuns.
Objetivo do Estudo
- Estabelecer um modelo confiável de infarto do miocárdio em camundongos.
- Facilitar a pesquisa sobre o remodelamento cardíaco pós-IM.
- Permitir a avaliação de terapias gênicas e celulares em doenças cardíacas.
Métodos Utilizados
- Aplicação de creme depilatório para preparo cirúrgico.
- Exteriorização do coração através do espaço intercostal.
- Ligadura da artéria descendente anterior esquerda.
- Cuidados pós-operatórios e avaliação do infarto do miocárdio.
Resultados Principais
- A indução bem-sucedida de infarto do miocárdio foi confirmada por meio da coloração com TTC.
- As taxas de mortalidade foram observadas dentro de sete dias após o infarto do miocárdio.
- A disfunção contrátil e o remodelamento ventricular foram documentados.
- O método permite intervenções terapêuticas subsequentes.
Conclusões
- O método descrito é eficiente e reprodutível para induzir IM em camundongos.
- Ele fornece uma plataforma para pesquisas futuras sobre terapias cardíacas.
- Estudos futuros podem se basear neste modelo para explorar diversas intervenções.
Perguntas Frequentes
Relevância Executiva para a Indústria
Modelos robustos de infarto do miocárdio (IM) in vivo são essenciais para a avaliação pré-clínica de terapêuticas cardíacas e estudos mecanicistas da remodelação pós-IM. Este protocolo simplificado de ligadura da artéria coronária permite a indução reprodutível de IM em camundongos, apoiando pesquisas translacionais e testes iniciais de hipóteses terapêuticas. A acessibilidade e eficiência do método facilitam sua adoção mais ampla em portfólios de descoberta e P&D pré-clínica.
Aplicações Estratégicas em P&D de Biotecnologia e Farmacêuticos
Descoberta Inicial e Validação de Alvo
- Permite a investigação de vias de lesão cardíaca e mecanismos de remodelação pós-IM.
- Apoia a validação funcional de alvos terapêuticos em um contexto in vivo relevante para a doença.
- Facilita a desmistificação mecanicista de intervenções candidatas direcionadas à reparação cardíaca.
Triagem e Desenvolvimento de Ensaios
- Oferece uma plataforma padronizada para avaliar a eficácia de terapias genéticas ou celulares após IAM.
- Produz tamanho reprodutível do infarto e disfunção contrátil para avaliação quantitativa.
- Permite integração com exames de imagem e ensaios histológicos para leituras robustas.
Pesquisa Translacional e Pré-Clinica
- Alinha-se a desfechos relevantes para a doença, como remodelação ventricular e análise de sobrevida.
- Permite a continuidade do descobrimento mecanicista até a validação terapêutica pré-clínica.
- Permite a avaliação do momento da intervenção e seu impacto nos desfechos pós-IM.
Integração de Pipeline e Fluxo de Trabalho
Este protocolo de indução de IM situa-se na interface entre a descoberta inicial e a validação pré-clínica, permitindo estudos orientados por hipóteses e triagem de candidatos em um modelo fisiologicamente relevante.
- Biologia da Descoberta: Facilita a verificação de hipóteses sobre mecanismos de lesão e reparo cardíacos.
- Triagem: Permite a indução reprodutível de infarto para estudos comparativos de eficácia.
- Análises: Permite a mensuração quantitativa do tamanho do infarto, da função contrátil e da sobrevida.
- Pesquisa Translacional: Conecta conhecimentos mecanicistas à avaliação terapêutica pré-clínica in vivo.
- Reutilização Empresarial: Oferece um modelo escalável e acessível para diversos programas de pesquisa cardíaca.
Impacto Operacional e Empresarial
- Valor Científico: Aumenta a confiança preditiva na validação de alvos e nos estudos mecanicistas.
- Valor Operacional: Padroniza a indução de IM, reduzindo a variabilidade técnica e a carga de treinamento.
- Valor Estratégico: Acelera as decisões de prosseguir ou interromper o desenvolvimento de candidatos a terapias cardíacas.
- Impacto no Portfólio: Permite a priorização ajustada ao risco de intervenções direcionadas à remodelação pós-IM.
Considerações de Implementação
- Exige proficiência cirúrgica e familiaridade com a anatomia cardíaca de camundongos.
- Requer acesso a instrumentos cirúrgicos básicos e infraestrutura de cuidados pós-operatórios.
- Exige padronização entre equipes para reprodutibilidade em estudos multicêntricos.
- Adaptável à administração de terapia gênica ou celular após a ligadura, para estudos de intervenção.
- A mortalidade e a variabilidade técnica devem ser monitoradas e relatadas para garantir a integridade dos dados.
