Name: Um Método Simples Modificado para Indução de Infarto do Miocárdio em Camundongos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-12-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 29 s
Description: Aprenda um método simplificado para induzir infarto do miocárdio em camundongos usando materiais cirúrgicos comuns. Esta técnica permite estudar remodelação cardíaca pós-infarto e testar novas terapias.

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Este trabalho foi apoiado por subsídios da Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (81930007, 81625002, 81800307, 81470389, 81500221, 81770238), do Programa de Líderes Acadêmicos Excepcionais de Xangai (18XD1402400), da Comissão de Ciência e Tecnologia do Município de Xangai (201409005200), do Programa de Talentos de Xangai Pujiang (2020PJD030) e da Fundação de Ciência Pós-Doutoral da China (2020M671161, BX20190216).

Os experimentos envolvendo trabalho com animais são realizados com todas as aprovações necessárias do Comitê de Ética de Bem-Estar Animal de Laboratório do Hospital Renji, Shanghai Jiao Tong University, School of Medicine (R52021-0506). Camundongos C57BL/6J fêmeas e machos com idade entre 8-10 semanas foram usados no estudo.
1. Preparo do aparelho de anestesia simplificado (OPCIONAL)
NOTA: Esta é uma configuração pré-operatória opcional e pode ser substituída por anestesia titulável, conforme mencionado na seção 2. O comité institucional de ética em matéria de animais e o(s) veterinário(s) devem ser consultados antes de adaptarem esta disposição estabelecida nos procedimentos relativos aos animais.
<ol><li>Pegue um tubo centrífugo de 15 mL e faça um corte perpendicular ao eixo longo do tubo a cerca de 3 cm da abertura. NOTA: Certifique-se de que o corte é maior que a metade da circunferência circular do lúmen do tubo para que a válvula possa ser inserida com sucesso.</li>
	<li>Faça furos (diâmetro, 2 mm) na parede do tubo da centrífuga entre o corte e a abertura do tubo.</li>
	<li>Corte um pedaço da válvula de tamanho adequado de uma folha de plástico e insira a válvula no corte na parede do tubo. NOTA: A válvula pode ser usada para controlar a taxa de liberação de isoflurano alterando a profundidade da inserção.</li>
	<li>Dentro de um exaustor, abra o fundo do tubo e conecte-o à fonte de oxigênio. Coloque uma bola de algodão perto da extremidade inferior do tubo, adicione a carga de 0,5 mL de isoflurano (conforme obtido, consulte Tabela de Materiais) na esfera de algodão e feche a válvula.</li>
	<li>Teste a eficácia da anestesia mascarando os camundongos com tubos preparados conforme descrito acima. Monitore a frequência respiratória e a profundidade da anestesia pela resposta da pinça dos dedos. NOTA: Uma frequência respiratória inferior a 10 vezes/10 s sugere anestesia excessiva, e a profundidade de inserção da válvula deve ser ajustada. Para todos os procedimentos que envolvem anestesia, deve-se utilizar filtro de gás preenchido com folhas de carvão ativado (Figura 1A-i) e a cirurgia dentro de uma coifa.</li>
</ol>2. Preparo operatório e anestesia
<ol><li>Preparar e esterilizar todos os instrumentos necessários no dia da cirurgia, incluindo um par de pinças, um hemostático de micromosquito, uma tesoura cirúrgica, dois pares de porta-agulhas, sutura cirúrgica de seda 4-0, sutura cirúrgica de seda 6-0, filtro de gás e fonte de luz (ver Tabela de Materiais) (Figura 1A).</li>
	<li>Coloque uma máscara cirúrgica e luvas estéreis.</li>
	<li>Aplique o creme depilatório no peito do rato e aguarde 1 min. Limpe suavemente o creme depilatório e os cabelos com gaze molhada.</li>
	<li>Segure o mouse com a mão dominante após a depilação. Induzir anestesia por inalação de isoflurano vaporizado (4%) com aporte de oxigênio (1L/min) e manter isoflurano a 2-3%.</li>
	<li>Confirme a anestesia adequada pela falta de resposta de pinça dos dedos.</li>
	<li>Aplique creme estéril para os olhos em ambos os olhos para evitar o ressecamento da córnea.</li>
	<li>Fixe os ratos em uma plataforma de cirurgia na posição supina. Aplique cotonetes de iodopovidona (ver Tabela de Materiais) no peito três vezes e cubra o tórax desinfetado com um campo estéril.</li>
</ol>3. Indução de infarto do miocárdio
<ol><li>Troque as luvas contaminadas para garantir a esterilidade.</li>
	<li>Fazer um corte cutâneo de 0,5 cm ao longo da linha que liga o xifoide e a axila após o bloqueio local com lidocaína.</li>
	<li>Separe os músculos peitoral maior e peitoral menor usando pinça e um micro-mosquito hemostático para expor o quarto espaço intercostal.</li>
	<li>Abra o quarto espaço intercostal usando um hemostático de micromosquito.</li>
	<li>Exteriorizar o coração empurrando o coração em direção ao quarto espaço intercostal com o dedo indicador da mão esquerda.</li>
	<li>Fixar o coração com a mão esquerda e ligar o ramo descendente anterior esquerdo com sutura 6-0 a 3 mm de sua origem.</li>
	<li>Coloque o coração de volta na cavidade torácica rapidamente. NOTA: É seguro exteriorizar o coração por menos de 30 s.</li>
	<li>Evacue o ar para fora da cavidade torácica pressionando suavemente a cavidade torácica manualmente.</li>
	<li>Feche a camada muscular sobre as costelas com uma sutura de seda 6-0.</li>
	<li>Feche a pele com uma sutura de seda 4-0.</li>
	<li>Coloque os ratinhos numa almofada (37 °C) imediatamente após a operação.</li>
	<li>Injetar buprenorfina (0,05-0,1mg/kg) por via subcutânea a cada 4-6 horas para reduzir a dor pós-operatória por até 72 horas.</li>
	<li>Retorne os camundongos operados para gaiolas quando totalmente recuperados. NOTA: Os ratos serão totalmente recuperados dentro de 3-5 minutos após a cirurgia.</li>
	<li>Monitore cuidadosamente os ratos e forneça comida úmida por até 7 dias.</li>
</ol>4. Colheita dos tecidos
<ol><li>Sacrificar os camundongos em diferentes momentos após o estabelecimento do IM por deslocamento cervical.</li>
	<li>Fixar os camundongos sacrificados na plataforma cirúrgica na posição supina.</li>
	<li>Faça uma incisão ventral (~3-4 cm) no abdome superior. Corte as costelas de ambos os lados da cavidade torácica e remova o diafragma.</li>
	<li>Perfundir o coração com 10 mL de solução salina tamponada com fosfato (1x PBS, 4 °C) por injeção intraventricular.</li>
	<li>Recolher o coração cortando a raiz da aorta e armazenar imediatamente o coração a -80 °C. OBS: De acordo com a nossa experiência, é factível realizar a coloração TTC em até duas semanas após o armazenamento.</li>
	<li>Corar o coração com cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazólio (TTC).<ol><li>Corte o coração congelado em seções de 1 mm de espessura no gelo usando lâminas de barbear.</li>
		<li>Incubar as fatias de coração preparadas em solução TTC a 1% (dissolvida em 1x PBS) a 37 °C durante 10-15 minutos. NOTA: Após 15 min de incubação, descarte a solução de TTC e mergulhe as fatias de coração coradas em 1x PBS.</li>
	</ol></li>
	<li>Fotografe as fatias usando uma câmera digital.</li>
</ol>

<ol><li>Fu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+efficient+method+for+in+vivo+cardiac-specific+gene+manipulation+by+intramyocardial+injection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A simple and efficient method for in vivo cardiac-specific gene manipulation by intramyocardial injection in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (134), e57074(2018).</li>
<li>Pell, S., Fayerweather, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trends+in+the+incidence+of+myocardial+infarction+and+in+associated+mortality+and+morbidity+in+a+large+employed+population%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Trends in the incidence of myocardial infarction and in associated mortality and morbidity in a large employed population.</a> The New England Journal of Medicine. 312 (16), 1005-1011 (1985).</li>
<li>Ramunddal, T., Gizurarson, S., Lorentzon, M., Omerovic, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiarrhythmic+effects+of+growth+hormone--in+vivo+evidence+from+small-animal+models+of+acute+myocardial+infarction+and+invasive+electrophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Electrocardiology%22%5BJournal%5D)">Antiarrhythmic effects of growth hormone--in vivo evidence from small-animal models of acute myocardial infarction and invasive electrophysiology.</a> Journal of Electrocardiology. 41 (2), 144-151 (2008).</li>
<li>Tabrizchi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B2-blocker+therapy+after+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Cardiovascular+Therapy%22%5BJournal%5D)">β-blocker therapy after acute myocardial infarction.</a> Expert Review of Cardiovascular Therapy. 11 (3), 293-296 (2013).</li>
<li>Virani, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics-2020+update%3A+A+report+from+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics-2020 update: A report from the American Heart Association.</a> Circulation. 141 (9), 139(2020).</li>
<li>Cahill, T. J., Choudhury, R. P., Riley, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+regeneration+and+repair+after+myocardial+infarction%3A+Translational+opportunities+for+novel+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">Heart regeneration and repair after myocardial infarction: Translational opportunities for novel therapeutics.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 16 (10), 699-717 (2017).</li>
<li>Froese, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-androgenic+therapy+with+finasteride+improves+cardiac+function%2C+attenuates+remodeling+and+reverts+pathologic+gene-expression+after+myocardial+infarction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Anti-androgenic therapy with finasteride improves cardiac function, attenuates remodeling and reverts pathologic gene-expression after myocardial infarction in mice.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 122, 114-124 (2018).</li>
<li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defective+branched+chain+amino+acid+catabolism+contributes+to+cardiac+dysfunction+and+remodeling+following+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Defective branched chain amino acid catabolism contributes to cardiac dysfunction and remodeling following myocardial infarction.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 311 (5), 1160-1169 (2016).</li>
<li>Acikel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+dantrolene+against+myocardial+injury+induced+by+isoproterenol+in+rats%3A+Biochemical+and+histological+findings%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Protective effects of dantrolene against myocardial injury induced by isoproterenol in rats: Biochemical and histological findings.</a> International Journal of Cardiology. 98 (3), 389-394 (2005).</li>
<li>vanden Bos, E. J., Mees, B. M. E., de Waard, M. C., de Crom, R., Duncker, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+model+of+cryoinjury-induced+myocardial+infarction+in+the+mouse%3A+A+comparison+with+coronary+artery+ligation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">A novel model of cryoinjury-induced myocardial infarction in the mouse: A comparison with coronary artery ligation.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 289 (3), 1291-1300 (2005).</li>
<li>Guo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demonstration+of+an+early+and+a+late+phase+of+ischemic+preconditioning+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Demonstration of an early and a late phase of ischemic preconditioning in mice.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 275 (4), 1375-1387 (1998).</li>
<li>Kumar, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+myocardial+infarction%3A+Mainstay+in+clinical+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Regulatory+Toxicology+and+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Animal models of myocardial infarction: Mainstay in clinical translation.</a> Regulatory Toxicology and Pharmacology. 76, 221-230 (2016).</li>
<li>Das, S., MacDonald, K., Chang, H. Y., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+of+mouse+lung+intubation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A simple method of mouse lung intubation.</a> Journal of Visualized Experiments. (73), e50318(2013).</li>
<li>Johns, T. N., Olson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+myocardial+infarction.+I.+A+method+of+coronary+occlusion+in+small+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Experimental myocardial infarction. I. A method of coronary occlusion in small animals.</a> Annals of Surgery. 140 (5), 675-682 (1954).</li>
<li>Ahn, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+myocardial+infarcts+of+a+predictable+size+and+location+by+branch+pattern+probability-assisted+coronary+ligation+in+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Induction of myocardial infarcts of a predictable size and location by branch pattern probability-assisted coronary ligation in C57BL/6 mice.</a> American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiology. 286 (3), 1201-1207 (2004).</li>
<li>Gao, E., Koch, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+and+efficient+model+of+coronary+artery+ligation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">A novel and efficient model of coronary artery ligation in the mouse.</a> Methods in Molecular Biology. 1037, 299-311 (2013).</li>
<li>Most, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+S100A1+protein+levels+determine+contractile+performance+and+propensity+toward+heart+failure+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Cardiac S100A1 protein levels determine contractile performance and propensity toward heart failure after myocardial infarction.</a> Circulation. 114 (12), 1258-1268 (2006).</li>
<li>Christia, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+characterization+of+myocardial+inflammation%2C+repair%2C+and+remodeling+in+a+mouse+model+of+reperfused+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Histochemistry+%26+Cytochemistry%22%5BJournal%5D)">Systematic characterization of myocardial inflammation, repair, and remodeling in a mouse model of reperfused myocardial infarction.</a> Journal of Histochemistry & Cytochemistry. 61 (8), 555-570 (2013).</li>
<li>Frantz, S., Bauersachs, J., Ertl, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-infarct+remodelling%3A+Contribution+of+wound+healing+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Post-infarct remodelling: Contribution of wound healing and inflammation.</a> Cardiovascular Research. 81 (3), 474-481 (2008).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

O presente relato demonstrou um protocolo fácil para indução de IM em camundongos com materiais prontamente disponíveis, que foi modificado a partir de um método relatado por Gao16. Modelos murinos de IM são indispensáveis para exploração mecanística e triagem de fármacos para disfunção e remodelamento pós-IAM12. Dentre as técnicas existentes para indução de IM, a ligadura da artéria coronária representa a mais praticada. A ligadura da artéria coronária recapitula fielmente...

O infarto do miocárdio (IAM) representa uma das principais causas de morte e incapacidade no mundo1,2,3,4,5. Apesar da reperfusão oportuna, atualmente há uma falta de terapias eficazes para tratar o remodelamento cardíaco pós-IM. Correspondentemente, esforços consideráveis têm sido feitos para a exploração mecanicista e terapêutica para a IM 6,7,8. Vale ressaltar que o estabelecimento de modelos de MI é um pré-requisito para atender a esses fins.
Vários métodos (por exemplo, tratamento com isoproterenol, criolesão, ligadura da artéria coronária, etc.) têm sido propostos para induzir modelos de IM em pequenos animais. O tratamento com isoproterenol é um método simples para indução de IM, mas não pode induzir infarto da área-alvo9. A criolesão leva à necrose miocárdica através da geração de cristais de gelo e ruptura da membrana celular, em vez de isquemia direta10. Por outro lado, a ligadura da artéria coronária permite o controle preciso do local de oclusão e da extensão da área de infarto e recapitula fielmente a resposta de remodelamento após o infarto11,12. A ligadura da artéria coronária é tipicamente realizada após intubação, ventilação mecânica e toracotomia, o que é tecnicamente desafiador13,14. Vários protocolos modificados para ligadura arterial coronariana (por exemplo, ventilação livre) foram relatados e potencializaram a indução de IM, mas faltam demonstrações visuais detalhadas15,16,17. Essas questões representam uma barreira financeira e técnica significativa para grupos que desejam se envolver em pesquisas usando modelos de MI. Este relato apresenta uma abordagem para indução de IM em camundongos. O método atual é fácil, rápido e utiliza ferramentas e equipamentos cirúrgicos encontrados prontamente na maioria dos laboratórios.

<table><tbody><tr><td>2,3,5-Trifeniltetrazólio cloreto</td><td>SIGMA</td><td>T8877-25G</td><td>TTC coloração</td></tr><tr><td>4-0 sutura de seda</td><td>YUANKANG</td><td>4-0</td><td>Autoclave de instrumento cirúrgico</td></tr><tr><td></td><td>HIRAYAMA</td><td>HVE-50</td><td>Esterilização para a</td></tr><tr><td>buprenorfina</td> sólida <td>Qinghai Pharmaceutical FACTORY Co., Ltd.</td><td>H10940181</td><td>reduzir a dor pós-operatória</td></tr><tr><td>Tubo de centrifugação</td><td>Biological Hope</td><td>1850-K</td><td>15ML</td></tr><tr><td>Creme depilatório</td><td>ZIKER BIOTECHNOLOGY</td><td>ZK-L2701</td><td>Agente de depilação para animais de laboratório</td></tr><tr><td>Fórceps</td><td>RWD</td><td>F12028</td><td>Instrumento cirúrgico</td></tr><tr><td>Filtro de gás</td><td>ZHAOXIN</td><td>SA-493</td><td>Proteção do operador</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>RWD</td><td>20071302</td><td>Usado para anestesia</td></tr><tr><td>Fonte de luz</td><td>Beijing PDV</td><td>LG-150B</td><td>Lâmpada de operação</td></tr><tr><td>Hemostato de micro-mosquito</td><td>FST</td><td>13011-12</td><td>Instrumento cirúrgico</td></tr><tr><td>Agulha</td><td>BINXIONG</td><td>42180104</td><td>Instrumento cirúrgico</td></tr><tr><td>Agulha e sutura de seda 6-0</td><td>JIAHE</td><td>SC086</td><td>Instrumento cirúrgico</td></tr><tr><td>Suporte de agulha</td><td>ShangHaiJZ</td><td>J32030</td><td>Instrumento cirúrgico</td></tr><tr><td>Porta-agulhas</td><td>ShangHaiJZ</td><td>J32010</td><td>Instrumento cirúrgico</td></tr><tr><td>Cotonetes de iodopovidona</td><td>SingleLady</td><td>GB26368-2010</td><td>Tesoura de desinfecção</td></tr><tr><td>da</td> pele <td>CNSTRONG</td><td>JYJ1030</td><td>Instrumento cirúrgico</td></tr><tr><td>Creme para os olhos estéril</td><td>Shenyang Xingqi Pharmaceutical Co., Ltd.</td><td>H10940177</td><td>prevenir a secura da córnea</td></tr><tr><td>Sistema de imagem de ultrassom de ultra-alta resolução para pequenos animais</td><td>VisualSonics</td><td>Vevo 2100</td><td>Análise ecocardiográfica</td></tr></tbody></table>

um método simples modificado para indução de infarto do miocárdio em camundongos

A Modified Simple Method for Induction of Myocardial Infarction in Mice

O infarto do miocárdio (IAM) representa uma das principais causas de morte. Os modelos de IM são amplamente utilizados para investigar os patomecanismos do remodelamento pós-IM e avaliação de novas terapêuticas. Diferentes métodos (por exemplo, tratamento com isoproterenol, criolesão, ligadura da artéria coronária, etc.) têm sido usados para induzir o infarto agudo do miocárdio. No entanto, os métodos tradicionais de ligadura coronária em camundongos são tecnicamente desafiadores. O presente estudo descreve um processo simples e eficiente para indução de IM em camundongos com materiais prontamente disponíveis. A pele do tórax de camundongos foi aberta sob anestesia estável. O coração foi imediatamente exteriorizado através do espaço intercostal após separação romba do peitoral maior e peitoral menor. O ramo descendente anterior (DA) esquerdo foi ligado com sutura 6-0 a 3 mm de sua origem. Após a ligadura da DAD, a coloração com cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazólio (TTC) indicou indução bem-sucedida de IM e mudanças temporais do tamanho da cicatriz pós-IM. Enquanto isso, os resultados da análise de sobrevida mostraram mortalidade evidente dentro de 7 dias após o IAM, principalmente devido à ruptura cardíaca. Além disso, a avaliação ecocardiográfica pós-IM demonstrou indução bem-sucedida de disfunção contrátil e remodelamento ventricular. Uma vez dominado, um modelo MI pode ser estabelecido em camundongos dentro de 2-3 min com materiais prontamente disponíveis.

O protocolo experimental e algumas das etapas críticas são mostrados na Figura 1. O aparelho de anestesia simplificado induziu a anestesia. Como mostrado na Figura 2A, a anestesia induzida foi estável, refletida pelas frequências respiratórias regulares (variando de 90-107 ciclos/min nos camundongos testados). Após a ligadura da artéria coronária, a análise da coloração TTC indicou indução bem-sucedida de infarto do miocárdio e mudanças temporais do tamanho da c...

Sob anestesia adequada, o coração de camundongo foi exteriorizado através do espaço intercostal, e o infarto do miocárdio foi induzido com sucesso pela ligadura da artéria descendente anterior (DA) usando materiais prontamente disponíveis na maioria dos laboratórios.

Um Método Simples Modificado para Indução de Infarto do Miocárdio em Camundongos

Myocardial infarction (MI) represents one of the leading causes of death. MI models are widely used for investigating the pathomechanisms of post-MI ...

Este relato apresenta uma abordagem única para a indução de infarto do miocárdio em camundongos. O método atual é fácil, economiza tempo e utiliza tubos cirúrgicos e equipamentos encontrados prontamente na maioria dos laboratórios. O estabelecimento de modelos de infarto do miocárdio fornece uma premissa para investigar os mecanismos passados de remodelação pós-IAM e variação de novas terapêuticas.Aplique o creme depilatório no peito do rato e aguarde um minuto. Em seguida, limpe suavemente o creme depilatório e os cabelos com gaze molhada. Fixe o mouse em uma plataforma cirúrgica na posição supina.Desinfetar a área cirúrgica conforme descrito no texto. Em seguida, coloque um pano estéril ao redor da área desinfetada. Faça um corte de 0,5 centímetro na pele ao longo da linha que liga o xifoide e a axila, e separe sem rodeios os músculos peitoral maior e peitoral menor usando pinças.Abra o quarto espaço intercostal usando um hemostático Micro-Mosquito. Exteriorizar o coração empurrando-o em direção ao quarto espaço intercostal com o dedo indicador da mão esquerda. Fixar o coração com a mão esquerda e ligar o ramo descendente anterior esquerdo com sutura 6/0 a três milímetros de sua origem.Coloque o coração de volta na cavidade torácica rapidamente. Evacue o ar para fora da cavidade torácica pressionando suavemente a cavidade torácica. Para o controle da dor pós-operatória, injetar buprenorfina por via subcutânea a cada quatro a seis horas por até setenta e duas horas pós-operatórias.Coloque o mouse em uma almofada de aquecimento para se recuperar da anestesia. Fixar o camundongo eutanasiado na plataforma cirúrgica na posição supina. Faça uma incisão ventral de aproximadamente três a quatro centímetros no abdome superior.Corte as costelas de ambos os lados da cavidade torácica e, em seguida, remova o diafragma. Perfundir o coração com 10 mililitros de frio quatro graus celsius 1X PBS através de injeção intraventricular. Em seguida, colete o coração cortando a raiz da aorta e armazenando-o imediatamente a 80 graus Celsius negativos.Corte o coração congelado em seções de um milímetro de espessura no gelo usando lâminas de barbear. Incubar as fatias de coração preparadas em solução de TTC a 1% dissolvida em um PBS 1X a 37 graus Celsius por 10 a 15 minutos. Em seguida, fotografe as fatias usando uma câmera digital.Após a ligadura da artéria coronária, a análise da coloração TTC indicou indução bem-sucedida de infarto do miocárdio e mudanças temporais do tamanho da cicatriz pós-IM. Os resultados da análise de sobrevivência mostraram mortalidade evidente dentro de sete dias após o IM em camundongos C57BL/6J machos e fêmeas. A ruptura ventricular foi uma causa comum de morte pós-IAM.A avaliação ecocardiográfica pós-IM demonstrou indução bem-sucedida de disfunção contrátil e remodelamento ventricular. Ao tentar exteriorizar o coração, não pressione a cavidade torácica em primeiro lugar e, seguindo nossa resistência, indica a necessidade de ajustar a direção contra o elogio ponderado. Após esse procedimento, a injeção intramiocárdica de vetores ou células virais pode ser realizada para testar a eficácia de terapias gênicas ou terapias celulares em questões de doenças cardíacas.

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

O procedimento cirúrgico utilizado para induzir o enfarte do miocárdio experimental em ratos começa com toracotomia esquerda entre a terceira e quarta das nervuras, a fim de visualizar a superfície anterior do coração e do pulmão esquerdo. A artéria coronária esquerda é ligada, a caixa é fechada e o rato é deixado a recuperar-se espontaneamente.

Técnica modificada para ligação da artéria coronária em ratos

Nós introduzimos um método cirúrgico para induzir experimental de isquemia / reperfusão (I / R) prejuízo para simular o infarto do miocárdio (MI) em modelos de mouse que permite uma maior clareza no posicionamento da ligadura na artéria descendente anterior esquerda (LAD) para aumentar a reprodutibilidade de experimentos MI em camundongos.

Um modelo murino de isquemia-reperfusão, através da ligadura da artéria Descendente Anterior Esquerda

Um modelo altamente reprodutível para infarto do miocárdio em camundongos com manipulações minimamente invasivas é descrito. O modelo pode ser facilmente executado, resultando em alta reprodutibilidade e taxa de sobrevida. Assim, o modelo descrito reduzirá o número de animais necessários conforme solicitado pelo princípio 3R (Substituição, Refinamento e Redução).

Minimal procedimento cirúrgico invasivo de induzir Infarto do Miocárdio em Ratos

Durante a cirurgia de isquemia/reperfusão miocárdica murina, a colocação correta da ligadura ocluída é normalmente confirmada pela observação visível da palidez miocárdica. Aqui, um método de confirmação eletrocardiográfica de isquemia e reperfusão, para complementar a palidez miocárdica observada, é demonstrado em camundongos C57Bl/6 machos.

A confirmação da Isquemia Miocárdica e reperfusão em ratos usando Pad Superfície Eletrocardiografia

Fornecemos um método confiável para ligadura da artéria descendente anterior (DA) em um modelo de camundongo. Este método é comparativamente menos invasivo do que outros métodos, envolvendo intubação endotraqueal, abordagem de toracotomia do lado esquerdo e toracocentese. Este método pode ser usado como modelo para infarto agudo do miocárdio (IM) agudo e crônico.

Murino Descendente Anterior Esquerda (LAD) ligação da artéria coronária: um modelo melhorado e simplificado para Infarto do Miocárdio

Nisto nós descrevemos um procedimento cirúrgico que mostra como conseguir a ligadura permanente da artéria coronária descendente esquerdo-anterior nos ratos. Este modelo é de grande relevância para investigar a fisiopatologia do infarto do miocárdio e os processos biológicos concomitantes.

Modelo de infarto do miocárdio murino usando ligadura permanente da artéria coronária descendente anterior esquerda

Este artigo apresenta um método eficiente para realizar isquemia miocárdica e subsequente reperfusão crônica em ratos usando uma abordagem minimamente invasiva. Além disso, a função hemodinâmica ventricular esquerda dos ratos é avaliada por ecocardiografia e métodos cardíacos de trabalho isolados.

Método invasivo semi-mínimo para induzir infarto do miocárdio em ratos e a avaliação da função cardíaca por um sistema cardíaco de trabalho isolado

Este protocolo descreve as etapas para induzir o infarto do miocárdio em camundongos, preservando o pericárdio e seu conteúdo.

Um modelo de roedor isquêmico de pericárdio intacto

Descrevemos um método simples e reprodutível que pode induzir infarto do miocárdio ou lesão de isquemia-reperfusão miocárdica em camundongos por ligadura precisa da artéria coronária descendente anterior esquerda através de micromanipulação.

Indução de Infarto do Miocárdio e Lesão de Isquemia-Reperfusão Miocárdica em Camundongos

Apresenta-se aqui um procedimento cirúrgico para ligadura permanente da artéria coronária esquerda em camundongos. Este modelo pode ser utilizado para investigar a fisiopatologia e a resposta inflamatória associada após o infarto do miocárdio.

Laqueadura da Artéria Coronária Esquerda: Um Modelo Murino Cirúrgico de Infarto do Miocárdio

Aprenda um método simplificado para induzir infarto do miocárdio em camundongos usando materiais cirúrgicos comuns. Esta técnica permite estudar remodelação cardíaca pós-infarto e testar novas terapias.

Um Método Simples Modificado para Indução de Infarto do Miocárdio em Camundongos

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