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DOI: 10.3791/65220-v
Nicolas Huyghe1, Elena Benidovskaya1, Simon Beyaert1, Aurélie Daumerie4, Finoula Maestre Osorio1, Frank Aboubakar Nana2,3, Caroline Bouzin4, Marc Van den Eynde1,5
1Institut de Recherche Expérimentale et Clinique (IREC), Pôle MIRO,Université Catholique de Louvain (UCLouvain), 2Institut de Recherche Expérimentale et Clinique (IREC), Pôle de Pneumologie, ORL et Dermatologie (PNEU),Université Catholique de Louvain (UCLouvain), 3Division of Pneumology, Cliniques Universitaires St-Luc,Université Catholique de Louvain (UCLouvain), 4IREC Imaging Platform,Université Catholique de Louvain (UCLouvain), 5Institut Roi Albert II, Department of Medical Oncology and Gastroenterology,Cliniques Universitaires St-Luc
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Neste artigo, um protocolo para amplificação manual do sinal de tiramida (TSA) por imunofluorescência multiplex (mIF) combinado com análise de imagem e análise espacial é descrito. Este protocolo pode ser usado com cortes fixados em formalina e embebidos em parafina (FFPE) para a coloração de dois a seis antígenos por lâmina, dependendo do scanner de lâminas disponível no laboratório.
Em nosso laboratório, estamos estudando o câncer colorretal humano. Sua progressão para doença metastática e sua resposta ao tratamento, incluindo imunoterapia. Estamos tentando encontrar novos biomarcadores preditivos e prognósticos através da investigação do microambiente imune tumoral e do microbioma intratumoral na doença primária e metastática.
Em nosso projeto estamos atualmente implementando várias tecnologias como sequenciamento de RNA, sequenciamento completo do exoma, sequenciamento TCR, análise de DNA livre de células circulantes, imunofluorescência e hibridização do instituto de fluorescência. Neste momento, nosso maior desafio é combinar a coloração de hibridização do instituto de fluorescência com a imunofluorescência multiplex de amplificação de sinal de tiramida para estudar a interação entre o microbioma e as células imunes. Nosso método é robusto, reprodutível, fácil de usar e econômico.
Ele pode ser configurado em qualquer laboratório que possua um scanner de luz fluorescente e o método pode ser usado com qualquer anticorpo IHC disponível comercialmente em oposição aos kits comercialmente disponíveis que geralmente são otimizados para painel restrito de antígenos.
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