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DOI: 10.3791/66580-v
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Este protocolo fornece um método de isolamento primário de células T murinas e microscopia de lapso de tempo da migração de células T sob condições ambientais específicas com análise quantitativa.
O objetivo de nossa pesquisa é entender os padrões de migração de células T em condições ambientais altamente definidas para permitir a experimentação in vitro informada e decifrar as interações moleculares que afetam a migração. Imagens ao vivo, como microscopia multifotônica intravital, são usadas para compreensão in vivo da cinética das células imunes. Mas os dispositivos microfluídicos são uma ferramenta comum in vitro que oferece controle preciso sobre o microambiente que não pode ser oferecido em um espécime vivo.
Nosso protocolo nos permite analisar vias de sinalização intrincadas e fornece uma melhor compreensão para experimentos in vitro direcionados para abordar ainda mais os papéis biológicos de sinais individuais de uma maneira específica do tipo de célula. Nosso método é simples, reprodutível e de fácil acesso em laboratórios de pesquisa que possuem um microscópio de campo claro com uma câmera digital acoplada. Portanto, nossa abordagem garante um conjunto confiável de métodos para estudar eventos dinâmicos de migração celular.
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