Visualização de raios-X de infusão ablativa intraductal à base de etanol para prevenção do câncer de mama em modelos de coelhos

O câncer de mama é a segunda principal causa de morte relacionada ao câncer. Embora existam poucas intervenções proativas para mulheres de risco médio, a mastectomia profilática e a terapia hormonal são opções disponíveis para mulheres de alto risco. No entanto, devido aos graves efeitos colaterais negativos dessas opções preventivas, muitas mulheres de alto risco optam por não tomá-las.

Portanto, é necessária uma nova estratégia de prevenção para indivíduos de alto risco. Desenvolvemos uma técnica de entrega intraductal para ablação das células epiteliais de memória das quais o câncer de mama surge como uma alternativa local e menos invasiva à mastectomia. Nosso estudo anterior mostrou a eficácia da infusão intraductal única de etanol a 70% para prevenir a formação de câncer de mama em um modelo de camundongo agressivo.

Conseguimos ampliar esse procedimento para um modelo de rato e confirmar por microtomografia computadorizada o sucesso da infusão. Embora tenhamos demonstrado o preenchimento e a imagem de raios-X in vivo da árvore ductal em modelos de camundongos e ratos, esses modelos têm apenas uma única árvore ductal por glândula mamária. Portanto, neste procedimento, abordaremos a escalabilidade dessa técnica em um modelo de coelho com um sistema de árvore multiduto.

Os coelhos fornecem um modelo intermediário prático e relevante de grandes animais para a aplicação translacional desse procedimento ablativo de ID em humanos. Resumidamente, começamos preparando o animal para o procedimento, removendo o pelo ao redor dos tetos a serem injetados, em seguida, são realizadas infusões intraductais e, após cada infusão, uma imagem de fluoroscopia de raios-X é feita para garantir que a árvore ductal foi obturada. Por fim, a análise do tecido é feita para determinar a taxa de sucesso da solução ablativa.

Sedar o coelho 20 minutos antes da administração de isoflurano, injetando anestesia por via intramuscular. Usamos cetamina e xilazina. Injete uma analgesia após a exibição de sinais clínicos de sedação.

Usamos cetoprofeno. Coloque o coelho na mesa de imagem forrada com uma manta de água morna recirculante e intube o coelho usando o tubo de intubação de tamanho apropriado que é então conectado a uma máquina de isoflurano. O tamanho do tubo depende do peso do coelho, mas nem sempre é preciso, por isso é uma boa prática ter vários tamanhos à mão.

Uma máscara pode ser usada no lugar do tubo de intubação se não conseguir uma vedação adequada. Insira um cateter venoso de calibre 25 na orelha do coelho para permitir a administração de medicamentos de emergência. Uma vez que o coelho tenha sido totalmente anestesiado, raspe o abdômen caudal ao redor do segundo e terceiro pares de tetinas.

Um aspirador sem fio pode ajudar a manter um local de infusão limpo. Depois de remover a maior parte do pelo, aplique o creme depilatório ao redor da área do teto e remova-o com gaze molhada após 15 segundos de aplicação. Confirme a boa visibilidade e o acesso à área do teto e repita se necessário.

Limpe a área com compressas de gaze de clorexidina para limpar o local da injeção antes da canulação. Os coelhos podem ter um tampão saindo da abertura ductal que pode impedir a canulação bem-sucedida do teto se não for removido. Remova suavemente a camada de pele sobre as aberturas ductais usando uma pinça de ponta fina.

Insira uma agulha de calibre 28, com o lado chanfrado para cima, na lateral da tetina e infunda lentamente 0,2 mililitros de solução salina estéril a 0,9%. Um pouco de solução salina pode ser ejetada pelas aberturas ductais. Isso permitirá uma melhor visualização das aberturas ductais durante a canulação.

Prepare a linha de extensão de 12 polegadas para canulação usando técnica asséptica. Limpe a superfície da bancada com etanol e coloque cuidadosamente luvas estéreis. Remova as tampas protetoras em ambas as extremidades da linha de extensão.

Aspire um mililitro de solução ablativa preparada usando uma seringa Luer-Lok de um mililitro. Prenda cuidadosamente a seringa na extremidade alada feminina e, em seguida, prenda cuidadosamente uma agulha de ponta romba de calibre 27 na extremidade oposta. Empurre lentamente a solução através da linha até que um fluxo constante de solução saia da agulha.

Tenha cuidado para não inclinar a seringa, pois isso causará a formação de bolhas de ar. Segure a tetina suavemente com o polegar e o indicador e levante-a ligeiramente para a perfusão intraductal. Canule cuidadosamente o duto de interesse usando uma agulha de ponta romba de calibre 27.

Uma lupa de 10X pode ajudar na visualização das aberturas ductais. Infunda lentamente a solução para minimizar possíveis danos causados por fluidos que se movem rapidamente dentro do duto. Normalmente, há um pesquisador canulando e segurando a agulha enquanto um segundo pesquisador segura a seringa e empurra o êmbolo na taxa desejada.

Omnipaque é um agente de contraste à base de iodo aprovado pela FDA que nos permite ver a árvore ductal sob imagens de fluoroscopia de raios-x. Isso nos permite ver uma árvore ductal sendo preenchida com solução ablativa em tempo real e interromper a entrega quando a solução atinge as extremidades da árvore ductal. A fluoroscopia também fornece uma confirmação rápida e fácil do preenchimento bem-sucedido de toda a árvore ductal logo após a infusão.

Nesta sessão ao vivo de uma infusão no terceiro ducto, você pode ver que os dutos 1 e 2 já foram infundidos. Esta imagem ao vivo orienta para maximizar o preenchimento da árvore ductal. Assim que o procedimento for concluído, comece a recuperar o coelho administrando um agente de reversão por via intramuscular.

No nosso caso, usamos atipamezol. Os sinais de recuperação incluem mastigação e espasmos nasais. Certifique-se de que o coelho possa se manter em pé antes de deixá-lo se recuperar por conta própria.

Administre cetoprofeno por via subcutânea por pelo menos três dias após o procedimento para ajudar a reduzir a inflamação e minimizar as cicatrizes. A coloração de hematoxilina e eosina, ou mais comumente conhecida como coloração H & E, é a coloração mais usada em histologia. Com isso, podemos ver as quatro aberturas ductais e as vias ductais dentro da glândula mamária.

Em nossos experimentos, testamos uma variedade de soluções com concentração de 10 a 70% de etanol. Com base nessa faixa de concentrações, podemos ver que uma solução ablativa com menos de 10% de etanol ainda pode ablação eficiente da árvore ductal em comparação com uma porcentagem maior de etanol. Esses resultados indicam que essa solução ablativa de etanol a 10% mais baixa deve ser priorizada para estudos posteriores.

Descrevemos um procedimento para infusão guiada por imagem no sistema de árvore ductal da glândula mamária de coelho. Demonstramos a infusão controlada de agente de contraste de raios-x contendo solução ablativa à base de etanol em todas as aberturas do teto por fluoroscopia em tempo real e confirmamos a taxa de ablação de células epiteliais e danos teciduais por análise histológica. Este procedimento fornece um passo em direção à escalabilidade de um método menos invasivo para prevenção primária do câncer de mama como uma alternativa à mastectomia profilática.

Este protocolo utiliza instrumentos, reagentes e materiais para infusão guiada por fluoroscopia de solução ablativa à base de etanol contendo Omnipaque que são compatíveis com a prática clínica atual para visualização de árvores ductais. Assim, o procedimento descrito pôde ser prontamente implementado e avaliado nos primeiros ensaios clínicos em humanos.