Visualização de raios-X de infusão ablativa intraductal à base de etanol para prevenção do câncer de mama em modelos de coelhos

Este protocolo apresenta um procedimento para infusão guiada por imagem no sistema da árvore ductal da glândula mamária de coelho. Demonstramos a infusão controlada de uma solução ablativa à base de etanol contendo agente de contraste de raios-X em todas as aberturas dos tetos por fluoroscopia em tempo real.

O câncer de mama é a segunda principal causa de morte relacionada ao câncer. Embora existam poucas intervenções proativas para mulheres de risco médio, a mastectomia profilática e a terapia hormonal são opções disponíveis para mulheres de alto risco. No entanto, devido aos graves efeitos colaterais negativos dessas opções preventivas, muitas mulheres de alto risco optam por não tomá-las.

Portanto, é necessária uma nova estratégia de prevenção para indivíduos de alto risco. Desenvolvemos uma técnica de entrega intraductal para ablação das células epiteliais de memória das quais o câncer de mama surge como uma alternativa local e menos invasiva à mastectomia. Nosso estudo anterior mostrou a eficácia da infusão intraductal única de etanol a 70% para prevenir a formação de câncer de mama em um modelo de camundongo agressivo.

Conseguimos ampliar esse procedimento para um modelo de rato e confirmar por microtomografia computadorizada o sucesso da infusão. Embora tenhamos demonstrado o preenchimento e a imagem de raios-X in vivo da árvore ductal em modelos de camundongos e ratos, esses modelos têm apenas uma única árvore ductal por glândula mamária. Portanto, neste procedimento, abordaremos a escalabilidade dessa técnica em um modelo de coelho com um sistema de árvore multiduto.

Os coelhos fornecem um modelo intermediário prático e relevante de grandes animais para a aplicação translacional desse procedimento ablativo de ID em humanos. Resumidamente, começamos preparando o animal para o procedimento, removendo o pelo ao redor dos tetos a serem injetados, em seguida, são realizadas infusões intraductais e, após cada infusão, uma imagem de fluoroscopia de raios-X é feita para garantir que a árvore ductal foi obturada. Por fim, a análise do tecido é feita para determinar a taxa de sucesso da solução ablativa.

Sedar o coelho 20 minutos antes da administração de isoflurano, injetando anestesia por via intramuscular. Usamos cetamina e xilazina. Injete uma analgesia após a exibição de sinais clínicos de sedação.

Usamos cetoprofeno. Coloque o coelho na mesa de imagem forrada com uma manta de água morna recirculante e intube o coelho usando o tubo de intubação de tamanho apropriado que é então conectado a uma máquina de isoflurano. O tamanho do tubo depende do peso do coelho, mas nem sempre é preciso, por isso é uma boa prática ter vários tamanhos à mão.

Uma máscara pode ser usada no lugar do tubo de intubação se não conseguir uma vedação adequada. Insira um cateter venoso de calibre 25 na orelha do coelho para permitir a administração de medicamentos de emergência. Uma vez que o coelho tenha sido totalmente anestesiado, raspe o abdômen caudal ao redor do segundo e terceiro pares de tetinas.

Um aspirador sem fio pode ajudar a manter um local de infusão limpo. Depois de remover a maior parte do pelo, aplique o creme depilatório ao redor da área do teto e remova-o com gaze molhada após 15 segundos de aplicação. Confirme a boa visibilidade e o acesso à área do teto e repita se necessário.

Limpe a área com compressas de gaze de clorexidina para limpar o local da injeção antes da canulação. Os coelhos podem ter um tampão saindo da abertura ductal que pode impedir a canulação bem-sucedida do teto se não for removido. Remova suavemente a camada de pele sobre as aberturas ductais usando uma pinça de ponta fina.

Insira uma agulha de calibre 28, com o lado chanfrado para cima, na lateral da tetina e infunda lentamente 0,2 mililitros de solução salina estéril a 0,9%. Um pouco de solução salina pode ser ejetada pelas aberturas ductais. Isso permitirá uma melhor visualização das aberturas ductais durante a canulação.

Prepare a linha de extensão de 12 polegadas para canulação usando técnica asséptica. Limpe a superfície da bancada com etanol e coloque cuidadosamente luvas estéreis. Remova as tampas protetoras em ambas as extremidades da linha de extensão.

Aspire um mililitro de solução ablativa preparada usando uma seringa Luer-Lok de um mililitro. Prenda cuidadosamente a seringa na extremidade alada feminina e, em seguida, prenda cuidadosamente uma agulha de ponta romba de calibre 27 na extremidade oposta. Empurre lentamente a solução através da linha até que um fluxo constante de solução saia da agulha.

Tenha cuidado para não inclinar a seringa, pois isso causará a formação de bolhas de ar. Segure a tetina suavemente com o polegar e o indicador e levante-a ligeiramente para a perfusão intraductal. Canule cuidadosamente o duto de interesse usando uma agulha de ponta romba de calibre 27.

Uma lupa de 10X pode ajudar na visualização das aberturas ductais. Infunda lentamente a solução para minimizar possíveis danos causados por fluidos que se movem rapidamente dentro do duto. Normalmente, há um pesquisador canulando e segurando a agulha enquanto um segundo pesquisador segura a seringa e empurra o êmbolo na taxa desejada.

Omnipaque é um agente de contraste à base de iodo aprovado pela FDA que nos permite ver a árvore ductal sob imagens de fluoroscopia de raios-x. Isso nos permite ver uma árvore ductal sendo preenchida com solução ablativa em tempo real e interromper a entrega quando a solução atinge as extremidades da árvore ductal. A fluoroscopia também fornece uma confirmação rápida e fácil do preenchimento bem-sucedido de toda a árvore ductal logo após a infusão.

Nesta sessão ao vivo de uma infusão no terceiro ducto, você pode ver que os dutos 1 e 2 já foram infundidos. Esta imagem ao vivo orienta para maximizar o preenchimento da árvore ductal. Assim que o procedimento for concluído, comece a recuperar o coelho administrando um agente de reversão por via intramuscular.

No nosso caso, usamos atipamezol. Os sinais de recuperação incluem mastigação e espasmos nasais. Certifique-se de que o coelho possa se manter em pé antes de deixá-lo se recuperar por conta própria.

Administre cetoprofeno por via subcutânea por pelo menos três dias após o procedimento para ajudar a reduzir a inflamação e minimizar as cicatrizes. A coloração de hematoxilina e eosina, ou mais comumente conhecida como coloração H & E, é a coloração mais usada em histologia. Com isso, podemos ver as quatro aberturas ductais e as vias ductais dentro da glândula mamária.

Em nossos experimentos, testamos uma variedade de soluções com concentração de 10 a 70% de etanol. Com base nessa faixa de concentrações, podemos ver que uma solução ablativa com menos de 10% de etanol ainda pode ablação eficiente da árvore ductal em comparação com uma porcentagem maior de etanol. Esses resultados indicam que essa solução ablativa de etanol a 10% mais baixa deve ser priorizada para estudos posteriores.

Descrevemos um procedimento para infusão guiada por imagem no sistema de árvore ductal da glândula mamária de coelho. Demonstramos a infusão controlada de agente de contraste de raios-x contendo solução ablativa à base de etanol em todas as aberturas do teto por fluoroscopia em tempo real e confirmamos a taxa de ablação de células epiteliais e danos teciduais por análise histológica. Este procedimento fornece um passo em direção à escalabilidade de um método menos invasivo para prevenção primária do câncer de mama como uma alternativa à mastectomia profilática.

Este protocolo utiliza instrumentos, reagentes e materiais para infusão guiada por fluoroscopia de solução ablativa à base de etanol contendo Omnipaque que são compatíveis com a prática clínica atual para visualização de árvores ductais. Assim, o procedimento descrito pôde ser prontamente implementado e avaliado nos primeiros ensaios clínicos em humanos.