Microdissecção Multinível e Perfil Funcional-Estrutural de Ramos Arteriais Renais Humanos

Nossa pesquisa visa estabelecer métodos padronizados para isolar e avaliar funcionalmente os ramos arteriais renais humanos, descobrindo mecanismos de disfunção vascular e orientando terapias direcionadas. Pesquisas anteriores basearam-se em modelos animais ou imagens indiretas, onde nossa miografia de fio reflete diretamente a função da artéria renal humana in vitro. Nosso método permite uma análise vascular precisa e específica para humanos, superando as limitações das espécies e melhorando o desenvolvimento de medicamentos translacionais.

Para começar, certifique-se de que o tecido renal permaneça totalmente submerso em líquido durante o transporte para manter a viabilidade do tecido e a integridade estrutural. Identifique visualmente o plano coronal localizando o hilo renal e alinhando o corte para passar pela pelve renal e pela borda convexa lateral. Usando um bisturi estéril, divida o rim ao longo desse plano coronal para criar duas metades simétricas e expor estruturas internas, como as pirâmides e colunas renais.

Sob um microscópio estereoscópico, use tesouras de microdissecção e fórceps para separar meticulosamente as artérias interlobar, arqueada e interlobular em uma placa de cultura de fundo preto de 10 centímetros. Em seguida, remova suavemente qualquer tecido e gordura circundantes das artérias dissecadas na mesma placa de cultura de fundo preto de 10 centímetros para limpá-las completamente. Usando uma tesoura de microdissecação, corte as artérias limpas em anéis de aproximadamente dois milímetros de comprimento para estudos de função vascular.

Insira cuidadosamente o primeiro fio-guia em um anel arterial no prato. Dobre um lado do fio-guia em um ângulo de 90 graus e transfira o anel arterial com o fio para dentro da câmara. Antes de fixar o anel arterial no porta-amostras, registre o comprimento do vaso.

Coloque o anel entre os dois suportes e leia a escala micrométrica, onde uma divisão de escala é igual a 10 micrômetros. Subtraia o valor inicial da escala medido quando os suportes apenas se tocam para calcular o comprimento e a largura do anel arterial. Em seguida, fixe o anel arterial no porta-amostras do tipo molusco usando os parafusos fornecidos pelo instrumento, apertando-os no sentido horário.

Em seguida, passe um segundo fio-guia pelo anel arterial. Enrole o fio no sentido horário ao redor dos parafusos de fixação em ambas as extremidades, prendendo-o firmemente à superfície do porta-amostras. Selecione Configurações de normalização no menu DMT e defina a calibração da ocular como um milímetro por divisão, a pressão alvo como 13.3 quilopascal, IC1/IC100 como 0.9, o tempo médio online como três segundos e o tempo de atraso como 60 segundos.

Selecione o canal correspondente à artéria alvo e abra a tela Normalização no menu DMT. Nos campos apropriados, insira os pontos finais do tecido como a1 igual a zero e a2 igual ao comprimento do vaso medido em milímetros. Insira o diâmetro do fio como 40 micrômetros e insira a leitura do micrômetro na escala.

Clique em Adicionar ponto para salvar os dados. Agora aplique o alongamento passivo e aguarde três minutos. Insira a nova leitura do micrômetro como o próximo ponto e clique em Adicionar ponto.

Adicione cinco mililitros de solução de íons potássio 60 à câmara para induzir uma contração mediada por potássio do vaso. Para lavar a solução de íons de potássio 60, adicione cinco mililitros de solução de Krebs três vezes. Para avaliar a contração dependente da concentração induzida por fenilefrina, aplique fenilefrina cumulativa em incrementos de meio log de 10 elevado a menos nove a 10 elevado a menos quatro molares.

Para testes adicionais de drogas, lave a câmara com cinco mililitros mornos de solução de Krebs pelo menos cinco vezes até que a tensão retorne à linha de base e permaneça estável por pelo menos 10 minutos. A artéria interlobar foi dissecada com sucesso da medula renal, mostrando uma parede vascular espessa e tecido adiposo circundante que exigiu remoção cuidadosa para preservar a integridade estrutural. A artéria arqueada foi isolada na junção corticomedular, exibindo uma parede vascular mais fina e um trajeto arqueado.

A artéria interlobular foi identificada correndo linearmente através do córtex renal com uma parede muito fina e fortemente integrada ao tecido cortical. A análise histológica revelou que a artéria interlobar apresentava a parede vascular mais espessa com adventícia distinta, enquanto as artérias arqueadas e interlobulares exibiam paredes progressivamente mais finas e menos camadas de músculo liso. A normalização arterial envolveu alongamento mecânico repetido e estimulação induzida por potássio, estabelecendo condições estáveis de tensão basal entre as amostras.

A adição cumulativa de fenilefrina de 10 elevado a menos nove a 10 elevado à potência de concentrações de quatro molares negativos induziu contrações progressivamente mais fortes nos anéis arteriais de maneira dose-dependente. Nas artérias pré-contraídas da fenilefrina, o aumento das concentrações de acetilcolina de 10 elevado a oito a três vezes 10 elevado a cinco molares negativos produziu vasodilatação dependente da concentração.