Name: Protocolo atualizado para montagem e uso do arranjo de minibiorreatores (MBRA) (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-05T14:10:00.000+00:00
Duration: 9 min 38 s
Description: Aprenda a montar e operar o arranjo de minibiorreatores (MBRA) para estudos de alta vazão do microbioma intestinal. Este sistema permite investigar dinâmicas microbianas complexas e resistência à colonização por patógenos em modelos in vitro.

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<ol><li>Gilbert, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+understanding+of+the+human+microbiome%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Current understanding of the human microbiome.</a> Nat Med. 24 (4), 392-400 (2018).</li>
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<li>Feria-Gervasio, D., Denis, S., Alric, M., Brugère, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+maintenance+of+a+human+proximal+colon+microbiota+using+the+continuous+fermentation+system+P-ECSIM%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Microbiol+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">In vitro maintenance of a human proximal colon microbiota using the continuous fermentation system P-ECSIM.</a> Appl Microbiol Biotechnol. 91 (5), 1425-1433 (2011).</li>
<li>Auchtung, J. M., Robinson, C. D., Farrell, K., Britton, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MiniBioReactor+arrays+%28MBRAs%29+as+a+tool+for+studying+C.+difficile+physiology+in+the+presence+of+a+complex+community%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">MiniBioReactor arrays (MBRAs) as a tool for studying C. difficile physiology in the presence of a complex community.</a> Methods Mol Biol. 1476, 235-258 (2016).</li>
<li>Robinson, C. D., Auchtung, J. M., Collins, J., Britton, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemic+Clostridium+difficile+strains+demonstrate+increased+competitive+fitness+compared+to+nonepidemic+isolates%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Epidemic Clostridium difficile strains demonstrate increased competitive fitness compared to nonepidemic isolates.</a> Infect Immun. 82 (7), 2815-2825 (2014).</li>
<li>Auchtung, J. M., Robinson, C. D., Britton, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cultivation+of+stable%2C+reproducible+microbial+communities+from+different+fecal+donors+using+minibioreactor+arrays+%28MBRAs%29%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiome%22%5BJournal%5D)">Cultivation of stable, reproducible microbial communities from different fecal donors using minibioreactor arrays (MBRAs).</a> Microbiome. 3 (1), 42(2015).</li>
<li>Auchtung, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+simplified+microbial+communities+that+inhibit+Clostridioides+difficile+infection+through+dilution%2Fextinction%5BTitle%5D)+AND+%22mSphere%22%5BJournal%5D)">Identification of simplified microbial communities that inhibit Clostridioides difficile infection through dilution/extinction.</a> mSphere. 5 (4), e00387-e00320 (2020).</li>
<li>Hobson, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MiniBioReactor+array+%28MBRA%29+in+vitro+gut+model%3A+A+reliable+system+to+study+microbiota-dependent+response+to+antibiotic+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22JAC+Antimicrob+Resist%22%5BJournal%5D)">MiniBioReactor array (MBRA) in vitro gut model: A reliable system to study microbiota-dependent response to antibiotic treatment.</a> JAC Antimicrob Resist. 4 (4), dlac077(2022).</li>
<li>Auchtung, T. A., Lerma, A. I., Schuchart, K., Auchtung, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+effects+of+antibiotics+across+preclinical+models+of+the+human+gastrointestinal+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiologyopen%22%5BJournal%5D)">Evaluating effects of antibiotics across preclinical models of the human gastrointestinal microbiota.</a> Microbiologyopen. 14 (4), e70030(2025).</li>
<li>Naimi, S., Viennois, E., Gewirtz, A. T., Chassaing, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+impact+of+commonly+used+dietary+emulsifiers+on+human+gut+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiome%22%5BJournal%5D)">Direct impact of commonly used dietary emulsifiers on human gut microbiota.</a> Microbiome. 9 (1), 66(2021).</li>
<li>Bolyen, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((interactive%2C+scalable+and+extensible+microbiome+data+science+using+QIIME+2%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">interactive, scalable and extensible microbiome data science using QIIME 2.</a> Nat Biotechnol. 37 (8), 852-857 (2019).</li>
<li>Hobson, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microbiota-dependent+response+to+anticancer+treatment+in+an+in+vitro+human+microbiota+model%3A+a+pilot+study+with+hydroxycarbamide+and+daunorubicin%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Infect+Microbiol%22%5BJournal%5D)">A microbiota-dependent response to anticancer treatment in an in vitro human microbiota model: a pilot study with hydroxycarbamide and daunorubicin.</a> Front Cell Infect Microbiol. 12, 886447(2022).</li>
<li>Jensen, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+fiber+monosaccharide+content+alters+gut+microbiome+composition+and+fermentation%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Dietary fiber monosaccharide content alters gut microbiome composition and fermentation.</a> Appl Environ Microbiol. 90 (8), e00964-e01024 (2024).</li>
<li>Ghimire, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+synergistic+effects+of+quercetin+and+rice+bran+on+human+gut+microbiota+reduces+Enterobacteriaceae+family+abundance+and+elevates+propionate+in+a+bioreactor+model%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Positive synergistic effects of quercetin and rice bran on human gut microbiota reduces Enterobacteriaceae family abundance and elevates propionate in a bioreactor model.</a> Front Microbiol. 12, 751225(2021).</li>
<li>Hu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minibioreactor+arrays+to+model+microbiome+response+to+alcohol+and+tryptophan+in+the+context+of+alcohol-associated+liver+disease%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Biofilms+Microbiomes%22%5BJournal%5D)">Minibioreactor arrays to model microbiome response to alcohol and tryptophan in the context of alcohol-associated liver disease.</a> NPJ Biofilms Microbiomes. 10 (1), 132(2024).</li>
<li>Jens, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MBRA-2%3A+A+modified+chemostat+system+to+culture+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Spectr%22%5BJournal%5D)">MBRA-2: A modified chemostat system to culture biofilms.</a> Microbiol Spectr. 11 (1), e02928-e03022 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>&nbsp; Guia V-Tap, tamanhos padrão 0-80 a 5/8"</td><td>Ferramentas Big Gator</td><td>STD500NP&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>0,22 &mu; Filtro de seringa M</td><td>Pescador</td><td>SLGVR33RS</td><td></td></tr><tr><td>2mag MIXdrive 60 Acionamento de agitação (somente acionamento)</td><td>2MAG</td><td>MF 41060</td><td></td></tr><tr><td>Agulhas hipodérmicas Air-tite, 22G x3"</td><td>VWR</td><td>89219-274</td><td></td></tr><tr><td>BD 1mL Seringas Estéreis de Ponta Deslizante Estéreis</td><td>Pescador</td><td>14-823-434</td><td></td></tr><tr><td>Biorreator</td><td>Proto-Laboratórios</td><td>NA</td><td>Impresso em 3D a partir do DMS Somos Watershed Plastic. Veja o arquivo suplementar 1 para o modelo</td></tr><tr><td>Suportes de biorreatores</td><td>Proto-Laboratórios</td><td>NA</td><td>Impresso em 3D em PA 12 Black. Consulte o arquivo suplementar 2 para o modelo.</td></tr><tr><td>Tampa de Garrafa de Solvente Diba Omnifit Q-Series, GL38/38-430 (vidro), 2 Portas UNF(F) sem Válvulas, Azul</td><td>Cole Parmer</td><td>EW-21942-86</td><td></td></tr><tr><td>Tubo Diba Omnifit, PTFE, 1/8" (3,2 mm) OD x 1,5 mm ID</td><td>Cole Parmer</td><td>EW-21942-76</td><td></td></tr><tr><td>Adaptador Dibafit, fundo plano de 1/4"-28 UNF(M) para 3,2 mm de diâmetro, PEEK</td><td>Cole Parmer</td><td>EW-21941-49</td><td></td></tr><tr><td>Chave de torneira IRWIN 12001ZR #0-1/4" T-Handle</td><td>Amazona</td><td>B00004YOB0</td><td></td></tr><tr><td>Torneira de Fração SAE de Aço de Alto Carbono Irwin Hanson 1/4 pol. 1 peça</td><td>Zoro</td><td>G7695682</td><td></td></tr><tr><td>Loctite Heavy Duty Epoxy Quick Set 8-Fluid Ounce Bottle</td><td>Amazona</td><td>B0044F59N0</td><td></td></tr><tr><td>Conector Luer Lock macho para macho</td><td>Darwin Microfluídica</td><td>DM-MM-LUER-PP&nbsp;</td><td>Alternativa: Conector Luer Macho para Macho da Strategic Applications Inc - 10/pk - Fisher - NC9876577</td></tr><tr><td>Adaptadores Masterflex, Luer para Luer, Nylon, Avantor</td><td>VWR</td><td>MFLX45502-56</td><td></td></tr><tr><td>Conexão Masterflex, Nylon, Reta, Fêmea Luer para Adaptador de Mangueira Barb, 1/16" ID</td><td>VWR</td><td>MFLX45502-00</td><td></td></tr><tr><td>Adaptador de Encaixe Masterflex, Nylon, Reto, Fêmea Luer para Mangueira Barb, 3/32" ID</td><td>VWR</td><td>MFLX45502-02</td><td></td></tr><tr><td>Conexão Masterflex, Nylon, Reta, Fêmea Luer para Adaptadores de Barb de Mangueira, 1/8"</td><td>VWR</td><td>MFLX45502-04</td><td></td></tr><tr><td>Adaptador de Trava Luer para Mangueira Masterflex, Nylon, Reto, 1/8</td><td>VWR</td><td>MFLX45505-04</td><td></td></tr><tr><td>Conexão Masterflex, Nylon, Reta, Luer Macho x 1/4-28 UNF</td><td>VWR</td><td>MFLX45505-82</td><td></td></tr><tr><td>Conexão Masterflex, Polipropileno, Cotovelo, Adaptador Luer Fêmea para Luer Fêmea</td><td>VWR</td><td>MFLX45508-26</td><td></td></tr><tr><td>Tubulação de bomba Masterflex Ismatec, 2 paradas, Tygon S3 E-Lab, 0,89 mm de diâmetro interno</td><td>VWR</td><td>MFLX96460-26</td><td></td></tr><tr><td>Tubulação de bomba Masterflex Ismatec, 2 paradas, Tygon S3 E-Lab, 1,14 mm de diâmetro interno</td><td>VWR</td><td>MFLX96460-30</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex&reg; Tubo de Transferência, C-Flex, Branco Opaco, 1/8" ID x 1/4" OD; 25 pés</td><td>VWR</td><td>MFLX06424-67</td><td></td></tr><tr><td>Mohr' s Pinchcock para Tubulação&nbsp;</td><td>VWR</td><td>470201-374</td><td></td></tr><tr><td>Arruelas de Borracha de Neoprene &frac12; &rdquo; OD x &frac14; &rdquo; ID x 1/16" Espessura&nbsp;</td><td>Amazona</td><td>B01A29F1R0</td><td></td></tr><tr><td>Septos de borracha de vedação de precisão</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Z553905</td><td></td></tr><tr><td>Barras de agitação micro Spinbar</td><td>VWR</td><td>58948-375</td><td></td></tr><tr><td>Tetra-Etch</td><td>R.S. Hughest Company</td><td>TE-500</td><td></td></tr><tr><td>Suporte de tubulação</td><td>Proto-Laboratórios</td><td>NA</td><td>Impresso em 3D em PA 12 Black. Consulte o arquivo suplementar 3 para o modelo.</td></tr><tr><td>Bomba de cartucho multicanal Watson-Marlow 205S</td><td>Watson-Marlow</td><td>020.3724.00A</td><td>Com desconto, alternativa: Bombas peristálticas digitais Ismatec IPC MFLX7800142 - FISHER - 113-200-014 ou bomba peristáltica Masterflex Ismatec IPC, 0,1 a 11,25 rpm, 24 canais, 115/230 VCA, Avantor, VWR, MFLX78006-48-CH</td></tr></tbody></table>

protocolo atualizado para montagem e uso do arranjo de minibiorreatores (mbra)

Updated Protocol for the Assembly and Use of the Minibioreactor Array (MBRA)

Para facilitar o crescimento de bactérias anaeróbicas, como as encontradas no trato gastrointestinal, o MBRA pode ser configurado e operado dentro de câmaras anaeróbicas. Para demonstrar a capacidade de cultivar comunidades bacterianas complexas diretamente de locais relevantes no corpo humano, uma amostra fecal humana foi preparada e cultivada neste sistema. Todo o trabalho foi realizado em câmara anaeróbia regulada para 37°C, e as culturas foram cultivadas em nosso meio biorreator, BRM37.
A pasta fecal foi preparada descongelando as fezes humanas anaerobicamente e, em seguida, misturando-se com solução salina tamponada com fosfato (PBS) até uma concentração final de 25% p / v. Após a confirmação da esterilidade, nove câmaras de biorreatores foram inoculadas, cada uma com 3 mL da mesma pasta fecal. As comunidades microbianas foram cultivadas durante a noite sem entrada de meios ou remoção de resíduos, resultando em culturas de lotes separadas durante um período de 16 horas. Em seguida, as bombas de alimentação foram ligadas e ajustadas para uma vazão de 1,92 mL por h. Após quatro dias de fluxo contínuo, as amostras foram coletadas dos biorreatores e analisadas quanto à composição da comunidade microbiana usando sequenciamento do gene 16S rRNA seguido de denoising com Deblur e classificação taxonômica com o banco de dados SILVA 138 SSU no QIIME 213. Um total de 65 gêneros foram detectados em todas as nove réplicas, mas os biorreatores foram dominados por apenas 18 gêneros, cada um compreendendo pelo menos 2% de abundância em qualquer uma das nove réplicas (Figura 5). Os biorreatores apresentaram alta reprodutibilidade, de modo que 22 dos 65 gêneros foram detectados em todas as nove repetições, e 17 gêneros adicionais foram detectados em pelo menos metade das repetições. A maioria dos gêneros ausentes de pelo menos um reator (37 de 43 gêneros) eram espécies raras, cada uma com abundância relativa abaixo de 2% em biorreatores. Em resumo, as culturas de MBRA de fluxo contínuo suportaram comunidades microbianas complexas e reprodutíveis derivadas da mesma amostra de fezes, mesmo após culturas de lote separadas por 16 h dentro de cada câmara do biorreator.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68788/68788fig1.jpg"> 
Figura 1: O Minibioreactor Array (MBRA). MBRA totalmente montado, incluindo etiquetas para a árvore de tubulação da linha de alimentação e resíduos, as câmaras do biorreator e a faixa do biorreator. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68788/68788fig1large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68788/68788fig2.jpg"> 
Figura 2: Guia de gravação de PTFE e layout da porta MBRA. (A) Fluxograma a seguir para a gravação dos canudos de PTFE de mídia e resíduos. (B) Cada câmara do biorreator contém uma porta para um canudo de meio + luer macho rosqueado, um canudo residual + luer macho rosqueado e um septo + luer macho rosqueado. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68788/68788fig2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68788/68788fig3.jpg"> 
Figura 3: Árvores de alimentação e linha de resíduos do MBRA. Imagens representativas a seguir na montagem de (A) árvore da linha de alimentação e (B) árvore da linha de resíduos. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68788/68788fig3large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68788/68788fig4.jpg"> 
Figura 4: Tampa de garrafa de mídia e sistema de camada de resíduos. (A) Um exemplo de uma tampa de garrafa da série Q montada usada para puxar a mídia para os MBRAs. (B) Uma imagem do sistema de coleta de lixo em camadas. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68788/68788fig4large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68788/68788fig5.jpg"> 
Figura 5: Abundância relativa de gêneros bacterianos. (A) O gráfico de barras empilhadas mostra a abundância relativa de todos os gêneros que compreendem pelo menos 2% de abundância em qualquer uma das amostras exibidas. (B) Métricas de diversidade alfa de OTUs observadas e diversidade de Shannon entre todas as nove câmaras de biorreatores. Todas as nove câmaras do biorreator foram inoculadas com a mesma pasta fecal preparada a partir de fezes humanas. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68788/68788fig5large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
Tabela 1: Componentes do MBRA. Imagens e descrições de todas as peças individuais necessárias para montar totalmente o MBRA, juntamente com a quantidade necessária para cada componente. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68788/Table1.xlsx" target="_blank">Clique aqui para baixar esta tabela.</a>
Tabela 2: Guia de solução de problemas. Problemas comuns encontrados na execução do MBRA, juntamente com suas possíveis causas e soluções recomendadas. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68788/Table2.xlsx" target="_blank">Clique aqui para baixar esta tabela.</a>
Arquivo suplementar 1: Stl para impressão 3D das tiras do Minibioreactor Array. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68788/Supplementary%20File%201.stl" target="_blank">Clique aqui para baixar este arquivo.</a>
Arquivo Suplementar 2: Stl para impressão 3D dos suportes de biorreatores usados para ancorar os biorreatores nas placas de agitação. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68788/Supplementary%20File%202.stl" target="_blank">Clique aqui para baixar este arquivo.</a>
Arquivo Suplementar 3.: Stl para impressão 3D dos suportes de tubos usados para organizar os resíduos C-flex e tubos de alimentação que se estendem dos MBRAs. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68788/Supplementary%20File%203.stl" target="_blank">Clique aqui para baixar este arquivo.</a>

Protocolo atualizado para montagem e uso do arranjo de minibiorreatores (MBRA)

The human microbiome comprises diverse and dynamic microbial communities that play essential roles in host health. Understanding these communities and ...

updated-protocol-for-assembly-use-minibioreactor-array

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Fonte: Hemmerich, J., et al. Protocolo para Otimização da Produção de Proteínas Heterólogas Utilizando Tecnologia Automatizada de Microbioreator. J. Vis. Exp. (2017).Este vídeo demonstra o uso de um microbiorator automatizado para monitorar o crescimento bacteriano e a secreção de proteínas fluorescentes em resposta a diferentes formulações de meio. Uma bactéria geneticamente modificada que expressa uma proteína fluorescente secretora é cultivada sob seleção antibiótica e inoculada em poços...

Monitorando o Crescimento Bacteriano em Diferentes Formulações de Meios com um Microbiorator Automatizado

Neste protocolo, é introduzida a fabricação, configuração e operação básica de um biorreator picoliter microfluídico (PLBR) para análise de célula única de microrganismos procarióticos. Microrganismos industrialmente relevantes foram analisados como prova de princípio, permitindo insights sobre taxa de crescimento, morfologia e heterogeneidade fenotípica ao longo de certos períodos de tempo, dificilmente possíveis com métodos convencionais.

Biorreator Picoliter Microfluídico para Análise Microbiana de Célula Única: Fabricação, Configuração do Sistema e Operação

Usando um biorreator pneumático, demonstramos a montagem, operação e desempenho deste sistema de biorreator de uso único para o crescimento de células de mamíferos.

O cultivo de células de mamíferos utilizando um uso único sistema pneumático Bioreactor

Um novo projeto de reator, denominado biorreator de alta densidade (HDBR), é apresentado para o cultivo e estudo de comunidades microbianas de alta densidade. Aqui, o HDBR é aplicado com sucesso em uma configuração de fotobiorreator (PBR) para o estudo do metabolismo do nitrogênio por uma comunidade mista de algas de alta densidade.

Um biorreator Novel de Cultivo de Alta Densidade de diversas comunidades microbianas

O desenvolvimento de comunidades microbianas depende de uma combinação de fatores, incluindo arquitetura ambiental, abundância de membros, traços e interações. Este protocolo descreve um ambiente sintético e microfabricado para o rastreamento simultâneo de milhares de comunidades contidas em poços de femtoliter, onde fatores-chave como tamanho de nicho e confinamento podem ser aproximados.

Montagem e Acompanhamento do Desenvolvimento da Comunidade Microbiana dentro de uma Plataforma Array Microwell

Este manuscrito descreve uma abordagem genérica de design à medida dos meios de cultivo microbiano. Isso é ativado por um fluxo de trabalho iterativo combinando Kriging experimental design e microbioreactor tecnologia para throughput de cultivo suficientes, que é apoiado pela robótica de laboratório para aumentar a confiabilidade e a velocidade em mídia de manuseio de líquidos preparação.

Protocolo genérico para otimização da produção de proteína heteróloga usando tecnologia automatizada de Microbioreactor

É apresentado um protocolo detalhado para a operação simultânea de 48 culturas de pilha paralela em variadas condições em um sistema de microbioreactor. Processo de cultura de células, colheita e análise de título de anticorpos subsequentes são descritos.

Uso do elevado-Throughput Microbioreactor sistema automatizado para produção de IgG1 modelo em células CHO

Aqui, apresentamos um procedimento detalhado para executar um Projeto de Experimento em um micro-bioreator automatizado seguido de colheita celular e quantificação de proteínas usando uma coluna de Proteína A.

Otimização de processos usando micro-bioreatores automatizados de alto throughput no cultivo de células de ovário de hamster chinês

Aqui, apresentamos um protocolo para alcançar a fabricação em larga escala de células aderentes através de um sistema totalmente fechado baseado em microcarreadores dissolvidos grau GMP. O cultivo de células-tronco mesenquimais humanas, células HEK293T e células Vero foi validado e atendeu tanto às exigências de quantidade quanto aos critérios de qualidade para a indústria de terapia celular e gênica.

Produção de células em larga escala com base em microtransportadores porosos solúveis de grau GMP

Este protocolo detalha a montagem de matrizes de mini-biorreatores a serem utilizados para cultura de fluxo contínuo de comunidades fecais complexas sob condições anaeróbicas. Também discutimos os métodos de montagem, inoculação e amostragem dos reatores para análise posterior.

Montagem de biorreatores para cultura contínua de comunidades fecais complexas

Um protocolo é descrito para a produção de células dependentes de ancoragem por microtransportadores-microbioretores como potenciais terapias baseadas em células. Focando em um caso de uso da síndrome de desconforto respiratório agudo, o rendimento celular comparável e a expressão gênica favorável em relação às condições de processo baseadas em frascos são ilustrados. Esse protocolo é extensível para outras células dependentes da ancoragem e indicações de alvo.

Produção baseada em microbioreadores de células estromais mesenquimatosais dependentes de ancoragem, preparadas para a síndrome aguda de desconforto respiratório

Aprenda a montar e operar o arranjo de minibiorreatores (MBRA) para estudos de alta vazão do microbioma intestinal. Este sistema permite investigar dinâmicas microbianas complexas e resistência à colonização por patógenos em modelos in vitro.

Protocolo atualizado para montagem e uso do arranjo de minibiorreatores (MBRA)

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