Name: Um Método de Imagem Óptica Compatível com Microscopia Eletrônica de Varredura para Mapeamento Cerebral Mesoscópico de Todas as Células (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-20T13:10:00.000+00:00
Duration: 9 min 40 s
Description: Aprenda a técnica OMLIT para imagem cerebral mesoscópica sem viés, integrada à microscopia eletrônica de varredura. Este método permite mapear todas as células e projeções neurais em amostras de cérebro inteiro.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Economo, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+platform+for+brain-wide+imaging+and+reconstruction+of+individual+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">A platform for brain-wide imaging and reconstruction of individual neurons.</a> eLife. 5, e10566(2016).</li>
<li>Gong, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuously+tracing+brain-wide+long-distance+axonal+projections+in+mice+at+a+one-micron+voxel+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroimage%22%5BJournal%5D)">Continuously tracing brain-wide long-distance axonal projections in mice at a one-micron voxel resolution.</a> Neuroimage. 74, 87-98 (2013).</li>
<li>Zheng, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+brain+circuits+using+two-photon+fluorescence+micro-optical+sectioning+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Opt+Express%22%5BJournal%5D)">Visualization of brain circuits using two-photon fluorescence micro-optical sectioning tomography.</a> Opt Express. 21 (8), 9839(2013).</li>
<li>Lin, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-type-specific+and+projection-specific+brain-wide+reconstruction+of+single+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Cell-type-specific and projection-specific brain-wide reconstruction of single neurons.</a> Nat Methods. 15 (12), 1033-1036 (2018).</li>
<li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scalable+volumetric+imaging+for+ultrahigh-speed+brain+mapping+at+synaptic+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Natl+Sci+Rev%22%5BJournal%5D)">Scalable volumetric imaging for ultrahigh-speed brain mapping at synaptic resolution.</a> Natl Sci Rev. 6 (5), 982-992 (2019).</li>
<li>Yao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-speed+label-free+functional+photoacoustic+microscopy+of+mouse+brain+in+action%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">High-speed label-free functional photoacoustic microscopy of mouse brain in action.</a> Nat Methods. 12 (5), 407-410 (2015).</li>
<li>Li, X., Kang, L., Zhang, Y., Wong, T. T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-speed+label-free+ultraviolet+photoacoustic+microscopy+for+histology-like+imaging+of+unprocessed+biological+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Opt+Lett%22%5BJournal%5D)">High-speed label-free ultraviolet photoacoustic microscopy for histology-like imaging of unprocessed biological tissues.</a> Opt Lett. 45 (19), 5401(2020).</li>
<li>Kut, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+human+brain+cancer+infiltration+ex+vivo+and+in+vivo+using+quantitative+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Detection of human brain cancer infiltration ex vivo and in vivo using quantitative optical coherence tomography.</a> Sci Transl Med. 7 (292), (2015).</li>
<li>Hu, C., Popescu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+phase+imaging+%28QPI%29+in+neuroscience%5BTitle%5D)+AND+%22IEEE+J+Sel+Top+Quantum+Electron%22%5BJournal%5D)">Quantitative phase imaging (QPI) in neuroscience.</a> IEEE J Sel Top Quantum Electron. 25 (1), 1-9 (2019).</li>
<li>Denk, W., Horstmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serial+block-face+scanning+electron+microscopy+to+reconstruct+three-dimensional+tissue+nanostructure%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Serial block-face scanning electron microscopy to reconstruct three-dimensional tissue nanostructure.</a> PLoS Biol. 2 (11), e329(2004).</li>
<li>Titze, B., Genoud, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Volume+scanning+electron+microscopy+for+imaging+biological+ultrastructure%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Volume scanning electron microscopy for imaging biological ultrastructure.</a> Biol Cell. 108 (11), 307-323 (2016).</li>
<li>Heymann, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scent+marking+strategies+of+new+world+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Primatol%22%5BJournal%5D)">Scent marking strategies of new world primates.</a> Am J Primatol. 68 (6), 650-661 (2006).</li>
<li>Echlin, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+developments+in+femtosecond+laser-enabled+TriBeam+systems%5BTitle%5D)+AND+%22JOM%22%5BJournal%5D)">Recent developments in femtosecond laser-enabled TriBeam systems.</a> JOM. 73 (12), 4258-4269 (2021).</li>
<li>Randolph, S., Geurts, R., Wang, J., Winiarski, B., Rue, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Femtosecond+laser-enabled+TriBeam+as+a+platform+for+analysis+of+thermally-+and+charge-sensitive+materials%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Microanal%22%5BJournal%5D)">Femtosecond laser-enabled TriBeam as a platform for analysis of thermally- and charge-sensitive materials.</a> Microsc Microanal. 25 (S2), 352-353 (2019).</li>
<li>Horstmann, H., Körber, C., Sätzler, K., Aydin, D., Kuner, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serial+section+scanning+electron+microscopy+%28S3EM%29+on+silicon+wafers+for+ultra-structural+volume+imaging+of+cells+and+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Serial section scanning electron microscopy (S3EM) on silicon wafers for ultra-structural volume imaging of cells and tissues.</a> PLoS One. 7 (4), e35172(2012).</li>
<li>Hayworth, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+ATUM+ultrathin+section+libraries+with+WaferMapper%3A+A+multi-scale+approach+to+EM+reconstruction+of+neural+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neural+Circuits%22%5BJournal%5D)">Imaging ATUM ultrathin section libraries with WaferMapper: A multi-scale approach to EM reconstruction of neural circuits.</a> Front Neural Circuits. 8, 68(2014).</li>
<li>Schalek, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+high-throughput%2C+high-resolution+3D+reconstruction+of+large-volume+biological+tissue+using+automated+tape+collection+ultramicrotomy+and+scanning+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Microanal%22%5BJournal%5D)">Development of high-throughput, high-resolution 3D reconstruction of large-volume biological tissue using automated tape collection ultramicrotomy and scanning electron microscopy.</a> Microsc Microanal. 17 (S2), 966-967 (2011).</li>
<li>Kasthuri, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Saturated+reconstruction+of+a+volume+of+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Saturated reconstruction of a volume of neocortex.</a> Cell. 162 (3), 648-661 (2015).</li>
<li>Fu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mEosEM+withstands+osmium+staining+and+Epon+embedding+for+super-resolution+CLEM%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">mEosEM withstands osmium staining and Epon embedding for super-resolution CLEM.</a> Nat Methods. 17 (1), 55-58 (2020).</li>
<li>Fan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+multilayer+interference+tomography+compatible+with+tape-based+serial+SEM+for+mesoscale+neuroanatomy%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Photonics%22%5BJournal%5D)">Optical multilayer interference tomography compatible with tape-based serial SEM for mesoscale neuroanatomy.</a> ACS Photonics. 9 (1), 25-33 (2022).</li>
<li>Hua, Y., Laserstein, P., Helmstaedter, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-volume+en-bloc+staining+for+electron+microscopy-based+connectomics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Large-volume en-bloc staining for electron microscopy-based connectomics.</a> Nat Commun. 6 (1), 7923(2015).</li>
<li>Berger, D. R., Seung, H. S., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VAST+%28volume+annotation+and+segmentation+tool%29%3A+Efficient+manual+and+semi-automatic+labeling+of+large+3D+image+stacks%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neural+Circuits%22%5BJournal%5D)">VAST (volume annotation and segmentation tool): Efficient manual and semi-automatic labeling of large 3D image stacks.</a> Front Neural Circuits. 12, 88(2018).</li>
<li>Shannon, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mathematical+theory+of+communication%5BTitle%5D)+AND+%22Bell+Syst+Tech+J%22%5BJournal%5D)">A mathematical theory of communication.</a> Bell Syst Tech J. 27 (3), 379-423 (1948).</li>
<li>Tsai, D. -Y., Lee, Y., Matsuyama, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Information+entropy+measure+for+evaluation+of+image+quality%5BTitle%5D)+AND+%22J+Digit+Imaging%22%5BJournal%5D)">Information entropy measure for evaluation of image quality.</a> J Digit Imaging. 21 (3), 338-347 (2008).</li>
<li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+convenient+all-cell+optical+imaging+method+compatible+with+serial+SEM+for+brain+mapping%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Sci%22%5BJournal%5D)">A convenient all-cell optical imaging method compatible with serial SEM for brain mapping.</a> Brain Sci. 13 (5), 711(2023).</li>
<li>Kuwajima, M., Mendenhall, J. M., Harris, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-volume+reconstruction+of+brain+tissue+from+high-resolution+serial+section+images+acquired+by+SEM-based+scanning+transmission+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Large-volume reconstruction of brain tissue from high-resolution serial section images acquired by SEM-based scanning transmission electron microscopy.</a> Methods Mol Biol. 950, 253-273 (2013).</li>
<li>Kislinger, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ATUM-Tomo%3A+A+multi-scale+approach+to+cellular+ultrastructure+by+combined+volume+scanning+electron+microscopy+and+electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">ATUM-Tomo: A multi-scale approach to cellular ultrastructure by combined volume scanning electron microscopy and electron tomography.</a> eLife. 13, e90565(2024).</li>
<li>Böhm, T., Felfer, P., Thiele, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modular+and+automated+serial+section+collection+system+for+ultramicrotomy+and+subsequent+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Microanal%22%5BJournal%5D)">A modular and automated serial section collection system for ultramicrotomy and subsequent imaging.</a> Microsc Microanal. 29 (1), 212-218 (2023).</li>
<li>Wacker, I. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodal+hierarchical+imaging+of+serial+sections+for+finding+specific+cellular+targets+within+large+volumes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Multimodal hierarchical imaging of serial sections for finding specific cellular targets within large volumes.</a> J Vis Exp. (133), e57059(2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Fita adesiva</td><td>3M</td><td>B5005094008</td><td>Adesivo dupla face</td></tr><tr><td>Microscópio de Força Atômica</td><td>Bruker</td><td>Ícone de Dimensão</td><td></td></tr><tr><td>Sistema automático de coleta de seção ultrafina &nbsp;</td><td>Lehua</td><td>AutoCUTS II</td><td></td></tr><tr><td>Fita adesiva condutora</td><td>Ted Pella</td><td>FP16084-8</td><td></td></tr><tr><td>Dektak Stylus Profilers</td><td>Bruker</td><td>DektakXT</td><td></td></tr><tr><td>Faca de diamante para seccionamento</td><td>Diatomácea</td><td>DUJ3530</td><td>Faca Jumbo de Diatomeias</td></tr><tr><td>Faca de diamante para aparar</td><td>Diatomácea</td><td>DTB90</td><td>Faca de vidro</td></tr><tr><td>Microscópio eletrônico</td><td>Zeiss</td><td>MultiSEM505</td><td>Alternativa: GeminiSEM 300, Zeiss</td></tr><tr><td>FIJI (v1.54p, 64-bit)&nbsp;</td><td>Código aberto</td><td>https://fiji.sc</td><td></td></tr><tr><td>Faca de aparar vidro</td><td>Selfmade</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Citrato de Chumbo</td><td>Leica</td><td>T534/2</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio óptico</td><td>Olympus&nbsp;</td><td>VS200</td><td>Alternativa: Axio Imager. A2 Vario, Zeiss</td></tr><tr><td>Microscópio óptico &nbsp;</td><td>Zeiss</td><td>&nbsp; Axio Imager.A2 Vario</td><td></td></tr><tr><td>Purificador de plasma</td><td>Yidon Technologies</td><td>Hydro-S4</td><td>Alternativas: Ted Pella Pelco ou outro limpador de plasma para bancada</td></tr><tr><td>Fita polimérica</td><td>Melton</td><td>Kapton</td><td>O site da empresa não está mais acessível. Recomendamos que os pesquisadores experimentem fitas KAPTON disponíveis localmente.</td></tr><tr><td>Fita polimérica</td><td>Teijin</td><td>PET</td><td>https://www.teijin.com/</td></tr><tr><td>Fita polimérica</td><td>Teijin</td><td>D-50</td><td>https://www.teijin.com/</td></tr><tr><td>Pastilha de silício</td><td>Saichi</td><td>912303</td><td>A pastilha é polida de um lado.</td></tr><tr><td>Revestimento por Spal&nbsp;</td><td>Leica</td><td>ACE600</td><td>Alternativa: Sputter de cabeça dupla, Yujie</td></tr><tr><td>Ultramicrônomo</td><td>Leica</td><td>UC7</td><td>Alternativa: RMC PT-PC</td></tr><tr><td>Uranilacetato</td><td>EMS</td><td>22400</td><td></td></tr><tr><td>VAST (v1.5.0, 64 bits)</td><td>Instituto Médico Howard Hughes</td><td>https://software.dvid.io/vast/</td><td>VAST A1:D32Lite é uma ferramenta gratuita para anotação manual e segmentação de grandes conjuntos de dados de microscopia 3D.</td></tr><tr><td>Software ZEN (v3.2, 64 bits)</td><td>Zeiss</td><td>https://www.zeiss.com/microscopy/zh/products/software/zeiss-zen.html</td><td></td></tr></tbody></table>

um método de imagem Óptica compatível com microscopia eletrônica de varredura para mapeamento cerebral mesoscópico de todas as células

A Scanning Electron Microscopy-Compatible Optical Imaging Method for Mesoscopic All-Cell Brain Mapping

Um Método de Imagem Óptica Compatível com Microscopia Eletrônica de Varredura para Mapeamento Cerebral Mesoscópico de Todas as Células

Understanding the structural and functional relationships within complex neural networks in the brain requires the construction of brain atlases that ...

a-scanning-electron-microscopy-compatible-optical-imaging-method-for

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Este protocolo descreve como resina de tecido cerebral incorporado pode ser preparada e fotografada nas três dimensões do feixe de íons focalizado, microscópio eletrônico de varredura.

Ion Beam centrada Fresagem e Microscopia Eletrônica de Varredura do Tecido Cerebral

Aqui nós descrevemos um método rápido e simples de células de imagem fluorescente etiquetado em fatias grossas semi-cérebro. Através da fixação, corte, limpeza e opticamente tecido cerebral descrevemos como imagens de epifluorescência ou confocal padrão pode ser usado para visualizar as células individuais e redes neuronal no tecido nervoso intacto.

Uma abordagem rápida para alta resolução de imagem de fluorescência em fatias grossas Semi-Cérebro

Fonte: Mukherjee, K., et. al. análise de mitocôndrias cerebrais usando microscopia eletrônica de varredura serial de face de bloco. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra a preparação, imagem e análise de tecido cerebral de camundongo usando um microscópio eletrônico de varredura serial (SBFSEM) para visualizar a ultraestrutura mitocondrial, permitindo o mapeamento preciso de sua morfologia e distribuição espacial nos compartimentos neuronais axonais e dendríticos.

 Imagem de mitocôndrias neuronais usando um microscópio eletrônico de varredura serial de face de bloco

Neste artigo vamos descrever o procedimento experimental completo para reconstruir, com alta resolução, a anatomia do cérebro multa de cérebros fluorescente etiquetado do mouse. O protocolo descrito inclui preparação de amostras e limpeza, espécime de montagem para a imagem latente, os dados de pós-processamento e visualização multi-escala.

Micron escala Resolução óptica Tomografia de todo cérebro do rato com confocal Luz Folha de Microscopia

A visualização e análise mitocondrial do tecido cerebral de mamíferos é uma tarefa desafiadora. Aqui, descrevemos como a análise de reconstrução tridimensional (3D) da microscopia eletrônica de varredura serial (SBFSEM) pode ser usada para obter insights sobre a análise morfológica e volumétrica dessa organela geradora de energia crítica.

Análise do Cérebro mitocôndrias Usando Serial Block-cara Scanning Electron Microscopy

Este artigo descreve um método simples para preparar pequenos cérebros de animais para a imagem latente de micro-CT, nas quais as lesões podem ser quantificadas e eletrodos localizados com elevada precisão no contexto do cérebro inteiro.

Um método de Micro-CT-baseado para caracterizar as lesões e localização de eletrodos nos cérebros de animais pequenos

Este artigo introduz um protocolo experimental utilizando tecnologia de digitalização 3D que constrói duas escalas espaciais: a escala espacial macroscópica da anatomia do cérebro inteiro imaged por RM a &gt; 100 μm e a escala espacial microscópica de distribuições neuronais utilizando Coloração imuno-histoquímica e um sistema de arranjo multieletrodo e outros métodos (~ 10 μm).

Tecnologia de digitalização 3D Bridging microcircuitos e imagens cerebrais Macroscale em 3D Novel incorporação de protocolo de sobreposição

Relatamos um método para reconstrução mesoscópica de todo o coração do rato, combinando novos avanços na transformação e coloração de tecidos com o desenvolvimento de um microscópio de folha de luz digitalizado axialmente.

Imagem óptica mesoscópica do coração de todo o rato

O protocolo fornece um método detalhado de imagem neuronal na fatia cerebral usando um método de limpeza tecidual, ScaleSF. O protocolo inclui preparação de tecidos cerebrais, esclarecimento de tecidos, manuseio de fatias limpas e microscopia de varredura a laser confocal de estruturas neuronais de níveis mesoscópicos a microscópicos.

Um método de limpeza de tecidos para imagens neuronais de escalas mesoscópicas a microscópicas

O presente protocolo fornece um procedimento passo-a-passo para limpeza óptica rápida e simultânea, marcação multi-redonda e reconstrução volumétrica 3D de dezenas de cortes cerebrais humanos post-mortem, combinando a técnica de transformação de tecido curto (SWITCH - H2O2 - Antigen Retrieval - 2,2'-thiodiethanol [TDE]) com imagens de microscopia de fluorescência de folha de luz em um protocolo de alto rendimento de rotina.

Limpeza óptica e marcação para microscopia de fluorescência de folha de luz em imagens cerebrais humanas em larga escala

Aprenda a técnica OMLIT para imagem cerebral mesoscópica sem viés, integrada à microscopia eletrônica de varredura. Este método permite mapear todas as células e projeções neurais em amostras de cérebro inteiro.

Um Método de Imagem Óptica Compatível com Microscopia Eletrônica de Varredura para Mapeamento Cerebral Mesoscópico de Todas as Células (Vídeo) | JoVE Journal

Um Método de Imagem Óptica Compatível com Microscopia Eletrônica de Varredura para Mapeamento Cerebral Mesoscópico de Todas as Células

Explorar mais vídeos