Name: Experimentos de imunocoloração e penetração de corantes para definir proteínas de junção septata plissada no núcleo em epitélios embrionários de Drosophila (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-27T14:25:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: Aprenda a avaliar a organização e função de barreira das junções septata plissadas em embriões de Drosophila usando imunocoloração e ensaios de permeabilidade a corantes.

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<ol><li>Farquhar, M. G., Palade, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Junctional+complexes+in+various+epithelia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Junctional complexes in various epithelia.</a> J. Cell Biol. 17, 375-412 (1963).</li>
<li>Lord, B. A., DiBona, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+septate+junction+in+the+regulation+of+paracellular+transepithelial+flow%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Role of the septate junction in the regulation of paracellular transepithelial flow.</a> J. Cell Biol. 71 (3), 967-972 (1976).</li>
<li>Noirot-Timothée, C., Smith, D. S., Cayer, M. L., Noirot, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Septate+junctions+in+insects%3A+comparison+between+intercellular+and+intramembranous+structures%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Cell%22%5BJournal%5D)">Septate junctions in insects: comparison between intercellular and intramembranous structures.</a> Tissue Cell. 10 (1), 125-136 (1978).</li>
<li>Rouka, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+septate+junction+beyond+barrier+function%3A+review+of+the+literature%2C+prediction+of+human+orthologs+of+SJ-related+proteins+and+identification+of+protein+domain+families%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol%22%5BJournal%5D)">The Drosophila septate junction beyond barrier function: review of the literature, prediction of human orthologs of SJ-related proteins and identification of protein domain families.</a> Acta Physiol. 231 (1), e13527(2021).</li>
<li>Poodry, C., Schneiderman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ultrastructure+of+the+developing+leg+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Roux+Arch.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The ultrastructure of the developing leg of Drosophila melanogaster.</a> Roux Arch. Dev. Biol. 166, 1-44 (1970).</li>
<li>Tepass, U., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+cellular+junctions+in+the+Drosophila+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The development of cellular junctions in the Drosophila embryo.</a> Dev. Biol. 161 (2), 563-596 (1994).</li>
<li>Rice, C., De, O., Alhadyian, H., Hall, S., Ward, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanding+the+junction%3A+new+insights+into+non-occluding+roles+for+septate+junction+proteins+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Expanding the junction: new insights into non-occluding roles for septate junction proteins during development.</a> J. Dev. Biol. 9 (1), 11(2021).</li>
<li>Baumgartner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+neurexin+is+required+for+septate+junction+and+blood-nerve+barrier+formation+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A Drosophila neurexin is required for septate junction and blood-nerve barrier formation and function.</a> Cell. 87 (6), 1059-1068 (1996).</li>
<li>Fehon, R. G., Dawson, I. A., Artavanis-Tsakonas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+homologue+of+membrane-skeleton+protein+4.1+is+associated+with+septate+junctions+and+is+encoded+by+the+coracle+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A Drosophila homologue of membrane-skeleton protein 4.1 is associated with septate junctions and is encoded by the coracle gene.</a> Development. 120 (3), 545-557 (1994).</li>
<li>Hall, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macroglobulin+complement-related+%28Mcr%29+encodes+a+protein+required+for+septate+junction+organization+and+paracellular+barrier+function+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Macroglobulin complement-related (Mcr) encodes a protein required for septate junction organization and paracellular barrier function in Drosophila.</a> Development. 141, 889-898 (2014).</li>
<li>Nelson, K. S., Furuse, M., Beitel, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+claudin+Kune-kune+is+required+for+septate+junction+organization+and+tracheal+tube+size+control%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">The Drosophila claudin Kune-kune is required for septate junction organization and tracheal tube size control.</a> Genetics. 185 (3), 831-839 (2010).</li>
<li>Paul, S. M., Ternet, M., Salvaterra, P. M., Beitel, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Na%E2%81%BA%2FK%E2%81%BA-ATPase+is+required+for+septate+junction+function+and+epithelial+tube-size+control+in+the+Drosophila+tracheal+system%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The Na⁺/K⁺-ATPase is required for septate junction function and epithelial tube-size control in the Drosophila tracheal system.</a> Development. 130 (20), 4963-4974 (2003).</li>
<li>Nilton, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((coiled+and+crimpled+are+three+Ly6-like+proteins+required+for+proper+localization+of+septate+junction+components%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">coiled and crimpled are three Ly6-like proteins required for proper localization of septate junction components.</a> Development. 137 (14), 2427-2437 (2010).</li>
<li>Tiklova, K., Senti, K. A., Wang, S., Gräslund, A., Samakovlis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+septate+junction+assembly+relies+on+melanotransferrin+iron+binding+and+endocytosis+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Epithelial septate junction assembly relies on melanotransferrin iron binding and endocytosis in Drosophila.</a> Nat. Cell Biol. 12 (11), 1071-1077 (2010).</li>
<li>Bilder, D., Schober, M., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+activity+of+PDZ+protein+complexes+regulates+epithelial+polarity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Integrated activity of PDZ protein complexes regulates epithelial polarity.</a> Nat. Cell Biol. 5 (1), 53-58 (2003).</li>
<li>Woods, D. F., Bryant, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+discs-large+tumor+suppressor+gene+of+Drosophila+encodes+a+guanylate+kinase+homolog+localized+at+septate+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The discs-large tumor suppressor gene of Drosophila encodes a guanylate kinase homolog localized at septate junctions.</a> Cell. 66 (3), 451-464 (1991).</li>
<li>Hall, S., Ward, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Septate+junction+proteins+play+essential+roles+in+morphogenesis+throughout+embryonic+development+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22G3+%28Bethesda%29%22%5BJournal%5D)">Septate junction proteins play essential roles in morphogenesis throughout embryonic development in Drosophila.</a> G3 (Bethesda). 6 (8), 2375-2384 (2016).</li>
<li>Genova, J. L., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroglian%2C+Gliotactin%2C+and+the+Na%E2%81%BA%2FK%E2%81%BA-ATPase+are+essential+for+septate+junction+function+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Neuroglian, Gliotactin, and the Na⁺/K⁺-ATPase are essential for septate junction function in Drosophila.</a> J. Cell Biol. 161 (5), 979-989 (2003).</li>
<li>Ward, R. E., Lamb, R. S., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+conserved+functional+domain+of+Drosophila+coracle+is+required+for+localization+at+the+septate+junction+and+has+membrane-organizing+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A conserved functional domain of Drosophila coracle is required for localization at the septate junction and has membrane-organizing activity.</a> J. Cell Biol. 140 (6), 1463-1473 (1998).</li>
<li>De, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Septate+junction+proteins+are+required+for+cell+shape+changes%2C+actomyosin+reorganization+and+cell+adhesion+during+dorsal+closure+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Cell+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Septate junction proteins are required for cell shape changes, actomyosin reorganization and cell adhesion during dorsal closure in Drosophila.</a> Front. Cell Dev. Biol. 10, 947444(2022).</li>
<li>Laprise, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+FERM+protein+Yurt+is+a+negative+regulatory+component+of+the+Crumbs+complex+that+controls+epithelial+polarity+and+apical+membrane+size%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">The FERM protein Yurt is a negative regulatory component of the Crumbs complex that controls epithelial polarity and apical membrane size.</a> Dev. Cell. 11 (3), 363-374 (2006).</li>
<li>Laprise, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurexin+IV+and+the+Na%E2%81%BA%2FK%E2%81%BA-ATPase+form+a+novel+group+of+epithelial+polarity+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Neurexin IV and the Na⁺/K⁺-ATPase form a novel group of epithelial polarity proteins.</a> Nature. 459 (7250), 1141-1145 (2009).</li>
<li>Oshima, K., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+protein+dynamics+within+the+septate+junction+reveals+a+highly+stable+core+protein+complex+that+does+not+include+the+basolateral+polarity+protein+Discs+large%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Analysis of protein dynamics within the septate junction reveals a highly stable core protein complex that does not include the basolateral polarity protein Discs large.</a> J. Cell Sci. 124 (Pt 16), 2861-2871 (2011).</li>
<li>Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHartenstein%2C+V+%22Atlas+of+Drosophila+Development%22">Atlas of Drosophila Development</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (1993).</li>
<li>Lamb, R. S., Ward, R. E., Schweizer, L., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+coracle%2C+a+member+of+the+protein+4.1+superfamily%2C+has+essential+structural+functions+in+septate+junctions+and+developmental+roles+in+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Drosophila coracle, a member of the protein 4.1 superfamily, has essential structural functions in septate junctions and developmental roles in epithelial cells.</a> Mol. Biol. Cell. 9 (12), 3505-3519 (1998).</li>
<li>Davis, M. J., Talbot, D., Jemc, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assay+for+blood-brain+barrier+integrity+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Assay for blood-brain barrier integrity in Drosophila melanogaster.</a> J. Vis. Exp. (151), e60233(2019).</li>
<li>Laprise, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+polarity+proteins+regulate+Drosophila+tracheal+tube+size+in+parallel+to+the+luminal+matrix+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Epithelial polarity proteins regulate Drosophila tracheal tube size in parallel to the luminal matrix pathway.</a> Curr. Biol. 20 (1), 55-61 (2010).</li>
<li>Batz, T., Förster, D., Luschnig, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transmembrane+protein+macroglobulin+complement-related+is+essential+for+septate+junction+formation+and+epithelial+barrier+function+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The transmembrane protein macroglobulin complement-related is essential for septate junction formation and epithelial barrier function in Drosophila.</a> Development. 141 (4), 899-908 (2014).</li>
<li>Behr, M., Riedel, D., Schuh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+claudin-like+Megatrachea+is+essential+in+septate+junctions+for+epithelial+barrier+function+in%C3%82%C2%A0Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">The claudin-like Megatrachea is essential in septate junctions for epithelial barrier function inÂ Drosophila.</a> Dev. Cell. 5 (4), 611-620 (2003).</li>
<li>Wu, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sinuous+is+a+Drosophila+claudin+required+for+septate+junction+organization+and+epithelial+tube+size+control%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Sinuous is a Drosophila claudin required for septate junction organization and epithelial tube size control.</a> J. Cell Biol. 164 (2), 313-323 (2004).</li>
<li>Wu, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+Varicose%2C+a+member+of+a+new+subgroup+of+basolateral+MAGUKs%2C+is+required+for+septate+junctions+and+tracheal+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Drosophila Varicose, a member of a new subgroup of basolateral MAGUKs, is required for septate junctions and tracheal morphogenesis.</a> Development. 134 (5), 999-1009 (2007).</li>
<li>Jaspers, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+claudin+Megatrachea+protein+complex%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">The claudin Megatrachea protein complex.</a> J. Biol. Chem. 287 (44), 36756-36765 (2012).</li>
<li>Dietzl, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-wide+transgenic+RNAi+library+for+conditional+gene+inactivation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A genome-wide transgenic RNAi library for conditional gene inactivation in Drosophila.</a> Nature. 448 (7150), 151-156 (2007).</li>
<li>Zirin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+transgenic+Drosophila+resource+collections+for+loss-+and+gain-of-function+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Large-scale transgenic Drosophila resource collections for loss- and gain-of-function studies.</a> Genetics. 214 (4), 755-767 (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Tubo capilar para agulhas (Boro 1 X 0,5/Fibra)</td><td>FHC</td><td>30-30-1</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio confocal</td><td>Leica</td><td>Stellaris 5&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Cobrir vidro com espessura 22 x 22 para injeções</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-540-B</td><td></td></tr><tr><td>Cobertura de vidro 22 x 30 com espessura de 1,5 para imagem</td><td>Corning</td><td>2980-233</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de cultura para imunocoloração (6 x 50 mm) & nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-958-A</td><td></td></tr><tr><td>Gaula de coleta de embriões</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-100</td><td></td></tr><tr><td>Estereoscópio de fluorescência</td><td>Leica</td><td>MZ10 F</td><td></td></tr><tr><td>Óleo de halocarbonetos (700)</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-131</td><td></td></tr><tr><td>Heptano</td><td>Fisher Scientific</td><td>H350-4</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio de fluorescência invertida</td><td>Leica</td><td>DMi8</td><td></td></tr><tr><td>Cestos de malha para embriões decoriionizantes</td><td>Genesee Scientific</td><td>46-101</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A412-4</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulador</td><td>Narishige</td><td>MN151</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas de microscópio</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-544-2</td><td></td></tr><tr><td>Puxador de agulha</td><td>Instrumentos David Kopf</td><td>Modelo 720</td><td></td></tr><tr><td>Soro de Burro Normal</td><td>Jackson ImmunoRecherch</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td>Malha de nylon (120 um)</td><td>Genesee Scientific</td><td>57-102</td><td></td></tr><tr><td>Lente objetiva HC PL FLUOTR 10X/0.32 PH 1</td><td>Leica</td><td>11506537</td><td></td></tr><tr><td>Lente objetiva HC PL APO 10x/0.40 CS2</td><td>Leica</td><td>15506407</td><td></td></tr><tr><td>Lente objetiva HC PL APO 40x/1.30 CS2</td><td>Leica</td><td>15506358</td><td></td></tr><tr><td>Placas de Petri 60 x 15 mm</td><td>Corning</td><td>351007</td><td></td></tr><tr><td>Balanço plataforma</td><td>Globe Scientific</td><td>GTR-FS</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo primário (Coracle)</td><td>DSHB</td><td>C566.9</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo primário (Coracle)</td><td>DSHB</td><td>C615.16</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo primário (E. cadherina)</td><td>DSHB</td><td>DCAD2</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo primário (Mcr)</td><td>Laboratório de enfermaria, CWRU</td><td>Policlonal de porquinho-da-índia</td><td></td></tr><tr><td>Rodamina rotulada como dextrano de 10 kDa</td><td>Sondas Moleculares</td><td>D1824</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo secundário (anti-porquinho-da-índia Cy3)</td><td>Jackson ImmunoRecherch</td><td>706-165-148</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo secundário (Cy2 anti-rato donkey)</td><td>Jackson ImmunoRecherch</td><td>715-225-151</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo secundário (anti-rato de burro Cy5)</td><td>Jackson ImmunoRecherch</td><td>712-175-150</td><td></td></tr><tr><td>Agitador de mesa</td><td>New Brunswick Scientific</td><td>Agitador de plataforma C2</td><td></td></tr><tr><td>Tegosept (metil 4-hidroxibenzoato)</td><td>TCI</td><td>H0216</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP151500</td><td></td></tr><tr><td>Frascos para fixação (20 ml frascos de cintilação líquida WHEATON)</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-341-73C</td><td></td></tr><tr><td>Whatman 3MM&nbsp; Artigo sobre Cromatografia</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-716-6H</td><td></td></tr><tr><td><forte>Ações de mosca</forte></td><td><forte>Genótipo completo</forte></td><td><número forte>estoque</forte></td><td><forte>Fonte</forte></td></tr><tr><td>cor4</td><td>w*; P{neoFRT}43D cora4/CyO</td><td>52232</td><td>BDSC</td></tr><tr><td>W1118</td><td>w[1118]</td><td>5905</td><td>BDSC</td></tr><tr><td><forte>Solução</forte></td><td><forte>Receita</forte></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10x PBS</td><td>Misture 90 g de NaCl, 20 g de Na2HPO4 e 8,3 g de NaH2PO4.H2O e dH20 a 1L. Esterilize com o filtro. Dilua para 1X com dH2O para as etapas de lavagem na imunocoloração.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solução 10% Triton X-100</td><td>Misture 1 ml de Triton X-100 a 9 ml de dH2O em um balancim plataforma até dissolver. Armazene em temperatura ambiente.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>50% de água sanitária</td><td>Misture 10 ml de água sanitária comercial (hipoclorito de sódio 7,5%) com 10 ml de água antes de descoriar os embriões.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pratos de suco de maçã</td><td>Ferva 15 g de ágar Drosophila em 725 ml de dH2O. Adicione 25 g de açúcar e 250 ml de suco de maçã e misture até que esteja tudo ilibado. Deixe a solução esfriar até 55°C e depois adicione 1,3 g de tegosept e misture suavemente. Despeje em placas de Petri de 60 x 15 e deixe esfriar. Armazene em 4°C.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solução de bloqueio</td><td>Misture 9,8 ml de 1X PBS com 100 ul de 10% de Triton X-100 e 100 ul de Soro de Burro Normal em um tubo cônico de 15.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solução de lavagem embrionária</td><td>Prepare 10 vezes a solução de lavagem embrionária misturando 70 g de NaCl e 2 ml de Triton X-100 a 1L de dH2O. Dilua para 1X com dH2O para a solução funcional.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Corrigir</td><td>Pré-aqueça 10 ml de 1X PBS no micro-ondas. Adicione 0,4 g&nbsp; de paraformaldeído e pipeta para misturar. Adicione 10 ul de NaOH 14N para dissolver a velocidade. Coloque em um bloco de calor de 90°C até dissolver. Quando não restar paraformaldeído sólido, adicione 10 ul de 14N HCL para ajustar o pH para neutro. Sempre use jaleco, luvas e óculos ao usar paraformaldeído.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mídia de montagem</td><td>Misture 9 ml de glicerol e 1 ml de base 1M Tris pH 8,0. Adicione 0,05 g de n-propil-galato, &nbsp; Misture e aqueça para dissolver. Aliquot 0,5 ml em tubos eppendorf. &nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solução de dextrano de rodamina</td><td>Faça uma solução de corante fresca dissolvendo Dextrano 10 kDa marcado com Rodamina em 1 mg/ml em fosfato de sódio 0,5M, pH 7,5 e 5 mM de cloreto de potássio.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pasta de fermento</td><td>Misture 50 g de levedura comercial (Red Star) com uma pitada de sacarose e água suficiente para fazer uma pasta espessa. Armazene em 4°C.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

experimentos de imunocoloração e penetração de corantes para definir proteínas de junção septata plissada no núcleo em epitélios embrionários de drosophila

Immunostaining and Dye Penetration Experiments to Define Core Pleated Septate Junction Proteins in Drosophila Embryonic Epithelia

Experimentos de imunocoloração e penetração de corantes para definir proteínas de junção septata plissada no núcleo em epitélios embrionários de Drosophila

The purpose of these protocols is to evaluate the organization and barrier function of pleated Septate Junctions (pSJs) in the ectodermally-derived ...

immunostaining-dye-penetration-experiments-to-define-core-pleated

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia do Desenvolvimento

Este protocolo demonstra como executar imunohistoquímica em dissecados larva Drosophila.

Drosophila larval MNJ Imunohistoquímica

Dissecção e imagem das Zonas de Ativos no Drosophila Junção neuromuscular

A imunocoloração é uma técnica eficaz para visualizar tipos específicos de células e proteínas dentro dos tecidos. Ao utilizar a sonicação, o protocolo descrito aqui alivia a necessidade de dissecar tecidos de Drosophila melanogaster de embriões e larvas em estágio avançado antes da imunocoloração. Fornecemos uma metodologia eficiente para a imunocoloração de larvas de montagem inteira fixadas em formaldeído.

Facilitou-Sonication Imunofluorescência Coloração de Late-estágio embrionário e larval<em&gt; Drosophila</em&gt; Tecidos<em&gt; In Situ</em

As estruturas adultas de Drosophila são derivadas de estruturas semelhantes a sacos chamadas discos imaginais. A análise desses discos fornece informações sobre muitos processos de desenvolvimento, incluindo determinação de tecidos, estabelecimento de limites de compartimentos, proliferação celular, especificação do destino celular e polaridade celular planar. Este protocolo é usado para preparar discos imaginais para microscopia de luz / fluorescente.

Dissecção e Imunocoloração do Imaginário discos de Drosophila melanogaster

Este protocolo demonstra como Ensaio de Proximidade A ligadura pode ser utilizada para detectar em interacções proteína-proteína in situ na junção neuromuscular, de larvas de Drosophila. Com esta técnica, os discos grande e Hu-li Shao tai são apresentados para formar um complexo na região pós-sináptica, uma associação previamente identificado por meio de co-imunoprecipitação.

Detecção de In Situ Complexos proteína-proteína no Drosophila Larval Junção Neuromuscular Usando Proximity Ligation Assay

Um protocolo de imunocoloração de montagem total em embriões de pulgões é apresentado, no qual são abordadas as condições críticas para diminuir a coloração de fundo e aumentar a permeabilidade do tecido. Essas condições são desenvolvidas especificamente para a detecção eficaz da expressão de proteínas nos tecidos embrionários de pulgões.

Identificação de condições críticas para Immunostaining no Pea Aphid Embriões: Aumento Tissue permeabilidade e diminuir a coloração de fundo

Apresentamos aqui um protocolo aprimorado para a preparação e imunossagem completa de testículos Drosophila, adequados para microscopia confocal e também permitindo rotulagem reprodutível e confiável. Ilustramos este protocolo por representação 3D e quantificação de experimentos de colocalização nos grandes espermatos S4-S5.

Imunostaining de Testes Drosophila de Monte Inteiro para Análise Confocal 3D de Grandes Espermatocitos

Aqui, descrevemos um protocolo de detecção e localização da proteína de embrião Drosophila e RNA da coleta à pré-incorporação e incorporação, imunostaining e mRNA in situ hibridização.

Um Protocolo para Imunohistoquímica e Distribuição In-situ de RNA dentro do Embrião Drosophila Precoce

O presente protocolo detalha a preparação e visualização do tecido fixo do notum pupal Drosophila . Pode ser usado para tecido intacto ou ferido, e a arquitetura original do tecido é preservada. Os procedimentos de dissecação, fixação e coloração estão descritos neste artigo.

Dissecando, consertando e visualizando o Drosophila Pupal Notum

Aqui, apresentamos um protocolo detalhado para visualizar as redes de microtúbulos nas junções neuromusculares e células musculares. Combinado com as poderosas ferramentas genéticas de Drosophila melanogaster, este protocolo facilita muito a triagem genética e a análise da dinâmica de microtúbulos para o papel das proteínas reguladoras da rede de microtúbulos no sistema nervoso.

Usando a junção neuromuscular de larvas de Drosophila e células musculares para visualizar a rede de microtúbulos

Este protocolo descreve a marcação e a injeção de fluorescência personalizadas baseadas em anticorpos em embriões iniciais de Drosophila para permitir imagens vivas de proteínas de baixa abundância ou modificações pós-traducionais que são difíceis de detectar usando abordagens tradicionais de GFP/mCherry-tag.

Visualizando Proteínas de Baixa Abundância e Modificações Pós-Traducionais em Embriões Vivos de Drosophila Via Injeção de Anticorpos Fluorescentes

Aprenda a avaliar a organização e função de barreira das junções septata plissadas em embriões de Drosophila usando imunocoloração e ensaios de permeabilidade a corantes.

Experimentos de imunocoloração e penetração de corantes para definir proteínas de junção septata plissada no núcleo em epitélios embrionários de Drosophila (Vídeo) | JoVE Journal

Experimentos de imunocoloração e penetração de corantes para definir proteínas de junção septata plissada no núcleo em epitélios embrionários de Drosophila

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