Простая сложная система подсчета очков для оценки фенотипа мыши Модели мозжечковая атаксия

Мы разработали комплексную систему оценки фенотипа для оценки тяжести и прогрессирования заболевания. На мышиных моделях мозжечковой атаксии мы проводим четыре различных теста: тест уступа, заднюю конечность, сцепление, походку и кифоз, используя шкалу от нуля до трех для каждого теста для комбинированного балла от нуля до 12. Для всех четырех измерений тест уступа был выполнен для непосредственного измерения координации.

Сцепление задних конечностей является маркером прогрессирования заболевания у ряда мышиных моделей нейродегенерации. Походка является мерой координации и мышечной функции. Кифоз — это искривление позвоночника в шейно-грудном отделе, распространенное у мышей с моделями двигательной системы и спинномозговой нейродегенерации, которые выполняют каждый тест и записывают баллы.

Средняя сумма четырех оценок или средняя совокупная оценка фенотипа вычисляется для каждой группы мышей и наносится на график. При применении этого протокола к различным моделям мышей важно сначала проанализировать результаты отдельных тестов, чтобы определить идеальную комбинацию четырех описанных показателей. Этот конкретный протокол был разработан для различения пораженных и непораженных людей, а также для количественной оценки прогрессирования фенотипа заболевания в мышиных моделях спинальной мозжечковой атаксии.

Тип седьмой. Здравствуйте, меня зовут Стефани Фур из лаборатории доктора Гвен Гарден на кафедре неврологии Вашингтонского университета. Сегодня мы покажем вам простой и чувствительный метод оценки тяжести заболевания на мышиных моделях мозжечковой атаксии.

Мы используем эту процедуру в нашей лаборатории для количественной оценки фенотипических различий в мышиных моделях спинальной мозжечковой атаксии седьмого типа или SCA 7, а также для отслеживания прогрессирования фенотипа SCA 7 с течением времени. Итак, приступим. Тест уступа является прямым измерением координации, которая нарушается при мозжечках, атаксиях и многих других нейродегенеративных заболеваниях.

Это измеряет наиболее близко к человеческим признакам мозжечковой атаксии для предотвращения смещения. Экспериментатор, проводящий оценку, не должен обладать знаниями о генотипе животного. Во время оценки отдельные показатели оцениваются по шкале от нуля до трех, где ноль представляет отсутствие фенотипа, а три — его наиболее серьезное проявление.

Начните с того, что поднимите мышь из клетки и поместите ее на выступ клетки. Понаблюдайте за мышью, когда она идет по карнизу клетки и опускается в свою клетку. Мышь дикого типа будет ходить по выступу, не теряя равновесия, и будет грациозно опускаться обратно в клетку, используя лапы.

Такому поведению присваивается нулевая оценка. Если мышь теряет опору во время ходьбы по уступу, но в остальном кажется скоординированной, она получает один балл. Если она не эффективно использует задние лапы или не может грациозно опуститься в клетку.

Он получает двойку баллов, если падает с уступа или почти падает при ходьбе или попытке спуститься, или трясется и вообще отказывается двигаться. Несмотря на поощрение, он получает три балла. Проведите испытание уступа три раза, чтобы обеспечить точное измерение, и запишите результаты теста уступа.

Теперь давайте посмотрим, как забить обхват задними конечностями. Сцепление задних конечностей является маркером прогрессирования заболевания у ряда мышиных моделей нейродегенерации, включая некоторые мозжечковые атаксии. Чтобы начать оценку, возьмитесь за хвост у его основания и поднимите наиболее свободный из всех окружающих предметов.

Наблюдайте за положением задних конечностей в течение примерно 10 секунд. Если задние конечности последовательно растопырены наружу в сторону от живота, ему присваивается нулевой балл. Если одна задняя конечность втянута к брюшной полости более чем на 50% времени в подвешенном состоянии, она получает балл 1.

Если обе задние конечности частично втянуты к брюшной полости более чем на 50% времени в подвешенном состоянии, он получает двойку баллов. Если задние конечности полностью втянуты и касаются живота более 50% времени в подвешенном состоянии, он получает три балла. Проведите тест три раза и запишите оценку сцепления задних конечностей.

Теперь давайте посмотрим, как оценить походку. Тест на ходьбу является мерой координации и мышечной функции. Чтобы начать тест, извлеките мышь из клетки и положите ее на ровную поверхность головой в сторону от исследователя.

Наблюдайте за ходом мыши сзади. Если мышь нормально двигается, опираясь на вес своего тела на все конечности, при этом живот не касается земли, а обе задние конечности участвуют равномерно, она получает нулевую оценку. Если у него наблюдается тремор или кажется, что он хромает при ходьбе, или его ноги слегка направлены в сторону от тела, он получает балл в один балл.

Если во время локомоции наблюдается сильный тремор, сильная хромота, опущенный таз или ноги более сильно отклоняются от тела, он назначается. Два. Если мышь с трудом продвигается вперед и волочит брюшком по земле, она получает тройку. Понаблюдайте за мышками GA три раза и запишите счет за катание.

Теперь давайте посмотрим. Кифоз тестовый кифоз представляет собой характерное дорсальное искривление позвоночника. Это распространенное проявление нейродегенеративных заболеваний с вовлечением двигательных систем, в том числе спинальных мозжечковых атаксий у мышей.

Это вызвано потерей мышечного тонуса в мышцах позвоночника на фоне нейродегенерации. Для начала извлеките мышь из клетки и положите ее на ровную поверхность. Наблюдайте за ним, пока он идет.

Если мышь способна легко выпрямлять позвоночник при ходьбе и не имеет стойкого кифоза, она получает нулевую оценку. Если мышь проявляет легкий кифоз, но способна выпрямить позвоночник, она получает оценку в один балл. Если он не в состоянии выпрямиться, то полностью и поддерживается стойкий, но слабо выраженный кифоз, он получает двойку баллов.

Если мышь сохраняет выраженный кифоз при ходьбе или во время сидения, ей присваивается три балла. Понаблюдайте за оценкой кифоза мыши три раза. Поместите мышь обратно в клетку и запишите ее показатель кифоза.

Ниже приведен репрезентативный график оценки составного фенотипа модели трансгенной спино-мозжечковой атаксии седьмого типа, известной как Flock SCA 7 92 Q. Баллы четырех измерений были суммированы для каждой мыши, и средний совокупный балл был рассчитан для обоих генотипов каждого возраста. Здесь f Fluxed, SCA 7 92 Q мыши демонстрируют прогрессирующий фенотип SCA seven, который значительно отличается от нетрансгенных однопометников. Важно отметить, что этот растущий показатель фенотипа с течением времени согласуется с прогрессирующим характером заболевания человека.

Мы только что показали вам, как использовать комбинированную систему оценки фенотипа для оценки тяжести и прогрессирования заболевания на мышиных моделях мозжечковой атаксии. При проведении этой процедуры важно помнить, что ожирение является искажающим фактором во всех четырех описанных тестах. Результаты отдельных тестов могут быть проанализированы отдельно, чтобы сначала определить их идеальную комбинацию в составной системе оценки фенотипа, наиболее подходящей для вашей модели мыши.

Вот и все. Спасибо за просмотр и удачи в ваших экспериментах.