С. elegans Рассечение бластомеров: метод удаления яичной скорлупы и диссоциации эмбриональных клеток

- Для этого вскрытия используйте две микропипетки: одну с отверстием примерно такой же ширины, как у яйца, и другую, которая в два раза шире, а также ряд растворов, организованных в лунки для облегчения быстрого переноса между ними.

Сначала поместите взрослых гермафродитов в раствор яичной соли, который осмотически сбалансирован, чтобы предотвратить разрыв эмбрионов. Разрежьте червей пополам, чтобы освободить развивающиеся эмбрионы.

Затем определите эмбрионы двухклеточной стадии. Эти клетки представляют собой бластомеры, образующиеся в результате деления оплодотворенной яйцеклетки. С помощью микропипетки с большим отверстием перенесите эмбрион в раствор гипохлорита, отбеливателя, который начнет разрушать защитную яичную скорлупу.

Через 40-55 секунд перенесите эмбрион в питательную среду Шелтона, или SGM. Кратко промойте каждый эмбрион в двух лунках SGM, чтобы удалить все следы отбеливателя, прежде чем поместить их в третью лунку.

Теперь используйте меньшую микропипетку для многократного пипетирования эмбриона, обеспечивая механическую силу для удаления яичной скорлупы и обнажения бластомеров. Аккуратно продолжайте пипетировать эмбрион, чтобы отделить отдельные клетки бластомера. В