Пробоподготовка для метаболомики: метод подготовки образцов клеток для профилирования метаболитов

Метаболомика — это исследование, направленное на идентификацию и количественное определение метаболитов, присутствующих в клетках. Чтобы подготовить образец, начните с посева клеток рака молочной железы вместе с питательной средой в две пластины, помеченные как тестовые и контрольные. Выдерживать в течение трех дней при температуре 37 градусов по Цельсию. Теперь удалите среду и добавьте свежую среду с эстрадиолом в тестовой пластине и обычной средой в контрольной пластине.

Эстрадиол связывается с рецептором эстрогена альфа в клетках рака молочной железы, вызывая определенные экспрессии, вызывая изменение метаболитного состава. Инкубируйте пластины в течение желаемой продолжительности. Замените среду ледяным фосфатным буфером или PBS для промывки клеток, а затем добавьте ледяной ацетон. Ледяные реагенты останавливают действие протеаз и тем самым предотвращают деградацию белка.

Теперь с помощью скребка отделите клетки от пластин и перенесите их в пробирки с помощью пипетки. Возьмите 20 микролитров этой клеточной суспензии на гемоцитометр и посчитайте количество клеток. Храните образцы при температуре минус 80 градусов Цельсия до использования для дальнейшего анализа. В следующем прот