Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence <em>in situ</em> Hybridization for Rapid Detection of <em>Salmonella</em> on Fresh Produce

Bledar Bisha; Byron F. Brehm-Stecher

doi:10.3791/2308

Сочетание Клей-ленты на основе выборки и флуоресценции На месте Гибридизация для быстрог...

JoVE Journal
Immunology and Infection

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Immunology and Infection

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Сочетание Клей-ленты на основе выборки и флуоресценции На месте Гибридизация для быстрого обнаружения Сальмонеллы На Fresh Produce

Full Text

13,541 Views

09:10 min

October 18, 2010

DOI: 10.3791/2308-v

Bledar Bisha¹, Byron F. Brehm-Stecher²

¹Center for Meat Safety and Quality, Department of Animal Sciences,Colorado State University, ²Rapid Microbial Detection and Control Laboratory, Department of Food Science and Human Nutrition,Iowa State University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This protocol describes a method for sampling the surfaces of fresh produce, such as tomatoes, using adhesive tape. It enables rapid detection of Salmonella through fluorescence in situ hybridization (FISH).

Key Study Components

Area of Science

Microbiology
Food Safety
Molecular Biology

Background

Salmonella is a significant foodborne pathogen.
Traditional methods for detecting Salmonella can be time-consuming.
Fluorescence in situ hybridization (FISH) allows for rapid detection.
Adhesive tape sampling is a novel approach for surface sampling.

Purpose of Study

To develop a simple method for sampling fresh produce surfaces.
To enable rapid molecular detection of Salmonella.
To improve food safety protocols in produce handling.

Methods Used

Application of adhesive tape to collect surface-bound cells.
Cell fixation and dehydration in an ethanol series.
Hybridization using a Salmonella-specific oligonucleotide probe cocktail.
Washing and analysis of samples via fluorescence microscopy.

Main Results

Successful extraction of Salmonella from fresh produce surfaces.
Rapid detection achieved through FISH methodology.
Demonstrated effectiveness of adhesive tape sampling.
Potential for enhancing food safety measures.

Conclusions

The adhesive tape method is a viable option for sampling.
FISH provides a rapid detection technique for pathogens.
This approach can be integrated into food safety practices.

Frequently Asked Questions

What is the main advantage of using adhesive tape for sampling?

Adhesive tape allows for easy collection of surface-bound cells without complex equipment.

How does FISH work in detecting Salmonella?

FISH uses fluorescent probes that bind specifically to Salmonella RNA, allowing for visualization under a microscope.

Can this method be applied to other types of produce?

Yes, the adhesive tape sampling method can be adapted for various fresh produce surfaces.

What are the limitations of this method?

Potential limitations include the need for careful handling to avoid contamination and the specificity of the probes used.

Is prior knowledge of microbiology required to perform this protocol?

Basic understanding of microbiological techniques and safety protocols is recommended.

How long does the entire process take?

The entire sampling and detection process can be completed in a few hours, making it relatively quick.

Этот протокол описывает простую клей-ленты на основе подход к отбору проб из помидоров и другой свежей поверхности продукции, с последующим быстрым целом обнаружения ячейки

Общая цель этой процедуры состоит в том, чтобы соединить отбор проб свежих продуктов с помощью клейкой ленты с молекулярным детектированием видов сальмонеллы на целых клетках с помощью быстрой флуоресценции при гибридизации C-2, также известной как рыба. Это достигается путем наложения липкой ленты на нужный материал и извлечения поверхностно связанных клеток. Ленты для заряда элемента могут быть проанализированы непосредственно или подвергнуты обогащению в твердой или жидкой фазе.

Второй этап процедуры – это лента, самофиксация и обезвоживание в этаноловом ряду для клеток, на которые ссылается бульон или обогащают им. Второй этап включает фиксацию клеток в суспензии с последующей суспензией Resus клеток в буфере для хранения. Третий этап процедуры заключается в выполнении быстрой стадии гибридизации на ленте с использованием коктейля олигонуклеотидных зондов, специфичного для сальмонеллы, с последующим удалением избытка зонда с помощью промывочной буферной промывки для образцов, проанализированных по факсу, на рыбной стадии проводится в суспензии, а избыток зонда может быть удален с помощью простой стадии разбавления перед анализом.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos