Метод аффинитной хроматографии для очистки рекомбинантного бактериального белка

Возьмём суспензию бактериальных клеток, экспрессирующих белок с полигистидином.

Соник на льду, чтобы минимизировать разрушение белка. Высокочастотные звуковые волны лизируют клетки, высвобождая внутриклеточный содержимое, включая целевой белок.

Центрифуга для отделения мусора и переноса белков, содержащих супернатант, в шприц.

Фильтруйте супернатант, чтобы удалить заполнители и предотвратить закупорку хроматографической колонки.

Возьмите колонку аффинной хроматографии на основе никеля и уравновесьте её для оптимальной очистки белка.

Загрузите фильтрат на колонну. Метка полигистидина связывается с ионами никеля на колонной смоле, обездвиживая целевые белки.

Промыйте колонку буфером для удаления несвязанных белков и следите за ультрафиолетовым поглощением элуата, чтобы подтвердить их удаление нецелевых белков.

Добавьте элюсионный буфер, содержащий имидазол, который конкурирует с меткой полигистидина для связывания никеля, высвобождая белки.

Второй скачок поглощения УФ-излучения подтверждает элюирование целевого белка, который готов к дальнейшему использованию.

Соникуйте клетки на льду, используя пять циклов по 15-секундному импульсу и 30-секундной паузе.

После центрифугирования лизата клетки п