Очистка самоорганизующихся белковых наночастиц с помощью аффинной хроматографии

Возьмем суспензию сконструированных бактерий, экспрессирующих рекомбинантные самоорганизующиеся белковые наночастицы с полигистидиновыми метками.

Ультразвуком высвобождают внутриклеточные компоненты.

Центрифуга для сбора надосадочной жидкости, содержащей белковые наночастицы. Разбавьте его буфером, не содержащим имидазола.

Возьмем колонку аффинной хроматографии, содержащую шарики агарозы с иммобилизованными катионами никеля.

Добавьте буфер с низкой концентрацией имидазола для уравновешивания колонок.

Добавьте бактериальный лизат на колонку.

Во время прогона полигистидин на белковых наночастицах прочно связывается с катионами никеля.

Между тем, такие загрязнители, как бактериальные липополисахариды и другие белки, слабо связываются с колонкой.

Промойте буфером, содержащим низкую концентрацию имидазола, чтобы удалить слабо связанные белки.

Введите изопропанол для удаления липополисахаридов и затем промыте.

Далее вводят буфер с промежуточной концентрацией имидазола. Имидазол конкурирует с гистидином за связывание с катионом никеля, высвобождая связанные белковые наночастицы.

Затем добавьте буфер, содержащий высокую концентрацию имидазола, чтобы полностью вымыть белковые наночастицы.

С