Микрожидкостных устройств с Groove Шаблоны для изучения Сотовая Поведение

Мы опишем протокол для изготовления микрожидкостных устройств, которые могут позволить захват клеток и культуры. При таком подходе узорной микроструктур, таких как пазы внутри микрожидкостных каналов используются для создания низкого напряжения сдвига регионов, в которых клетка может дока.

Меня зовут Цзян, я стипендиат Гарварда и Массачусетского технологического института, здравоохранения, науки и технологий. Так что мой опыт в этой лаборатории, я могу просто создать новое устройство для прогнозирования для изучения клеточного поведения. Я могу создать очень новое градиентное устройство, а также просто сгенерировать интеграцию с моим устройством прогнозирования.

Устройство TC может точно манипулировать взаимодействием клеток и взаимодействием клеток, а также контактом солнечного фактора клетки. Таким образом, используя систему ТС, я могу изучать основы клеточной биологии, а также применять некоторые биологические методы развития, а также биобиоинженерию стволовых клеток. Меня зовут Амир Манчи, и я студент бакалавриата, профессор лаборатории Хаана в Гарварде, отделение медицинских наук и технологий Массачусетского технологического института.

И я работал над микрофиллиевыми устройствами, и мы пытались в качестве доказательства принципа показать, что микрофлюидные устройства являются большими потенциальными устройствами для культивирования клеток, и проводили различные исследования, такие как исследования токсичности, и мы также пытались изучить и оптимизировать характеристику жидкости внутри этих устройств в зависимости от скорости потока. геометрия и другие различные параметры. Прямо сейчас мы начинаем с микропроизводственной комнаты, и то, что мы собираемся сделать, это то, что мы пытаемся сделать некоторые микрофлюидные устройства, чтобы сделать микрофолиевые устройства, нам нужны некоторые модели кремниевых пластин, и нам нужны некоторые формы PDMS поверх них. Этот полимер PDMS на самом деле представляет собой смесь двух разных веществ.

Он представляет собой смесь основы кремниевого эластомера, а также токового агента силиконового эластомера. Мы смешиваем эти два компонента в соотношении 10 к одному, то есть 10 оснований и один отвердитель. Теперь я хочу около 20 грамм моей основы здесь.

Мне также нужно два грамма отвердителя, а отвердитель гораздо менее плотный. Это произойдет гораздо быстрее, и мне нужно быть немного осторожным. Итак, сейчас около 22 градусов, и я хочу смешать основу и отвердитель вместе.

Поэтому для этого я буду использовать pipe. Я постараюсь смешать его как можно лучше. Я хочу залить этот полимер PDMS поверх кремниевых пластин, на которых на самом деле есть рисунок, и кремниевая пластина помогает придать рисунок формам PDMS.

Вы можете заметить, что у меня есть две кремниевые пластины прямо здесь, и причина в том, что одна из них предназначена для верхнего слоя нашего микронаполнителя, а другая - для нижнего слоя. Нам нужны два слоя в микрофлюидных устройствах, потому что мы пытаемся иметь канал внутри, и вся история микрофлюидных устройств заключается в том, что мы хотим, чтобы поток был внутри этих каналов. Поэтому мне нужно залить эту смесь поверх обеих силиконовых пластин, потому что у меня много пузырьков внутри этой смеси.

Я хочу удалить эти пузыри, и что мы делаем, так это используем вакуум, чтобы удалить эти пузыри. Мы вернулись в основную лабораторию, и, как я уже говорил ранее, потому что внутри смеси PDMS много пузырьков, и мы хотим удалить их, и я собираюсь поместить смеси поверх кремниевых пластин внутри вакуумной камеры. Я собираюсь закрыть камеру и открыть вакуум после того, как это будет сделано, мы собираемся поместить формы PDMS в духовку на ночь, чтобы сделать их более твердыми.

Итак, мы сейчас в лаборатории, и мы хотим собрать эти микрофолиевые устройства. Что мы собираемся сделать, так это взять формы PDMS, которые были внутри инкубатора всю ночь, и они сформировались, они сформировали узоры, которые были на кремниевых пластинах, и я собираюсь использовать два разных шаблона. Слева вы можете видеть микроканал, который будет верхним слоем, а справа вы можете увидеть несколько зеленых линий, которые будут нижним слоем.

А это есть, при этом будут образовываться пазы внутри микроустройства. Я начинаю с резки этих гелей, чтобы иметь возможность иметь верхний слой, который легко отделяется от силиконовой пластины. И что я сделаю, так это перенесу его в эту тарелку Петры лицевой стороной вверх так, чтобы узоры были обращены вверх.

И я собираюсь попробовать то же самое для канавок, которые были узорами зеленых линий. Итак, они сформируют нижний слой. Итак, как только гель будет разрезан, я собираюсь перенести его в чашку Petra и, чтобы предотвратить попадание пыли поверх узоров, я собираюсь обклеить их скотчем.

Следующим шагом является пробивание концов каналов, чтобы позволить клетке и среде течь внутрь и наружу. Что я собираюсь сделать, так это то, что у меня здесь широкая поверхность и я не могу видеть узоры сам, я собираюсь использовать это, чтобы иметь возможность видеть каналы, и я собираюсь пробить оба конца. Итак, я собираюсь пробить большой пуансон здесь, чтобы у него был резервный заказ, а с другой стороны я собираюсь пробить небольшое отверстие, чтобы иметь возможность использовать трубки из полиэтанола с другой стороны.

Теперь мы находимся в комнате микропроизводства, и следующим шагом будет прикрепление двух разных поверхностей, которые у нас есть. Для этого вы используете эту машину, которая называется плазменным очистителем, а сам процесс называется плазменной обработкой. Внутри этой камеры у нас будет плазменная среда, и при взаимодействии плазменной поверхности произойдет то, что плазма на самом деле нарушит слабый поверхностный баланс и заменит его высокореактивными химическими группами.

Итак, что сейчас произойдет, так это то, что я собираюсь вытащить ленты, которые он поместил сюда, чтобы предотвратить попадание пыли, и я собираюсь поместить эти формы внутрь камеры. Я собираюсь полностью закрыть эту дверь, сначала включить питание, а затем насос, и тогда мы будем готовы к работе. Мы заберем его через пять-10 минут.

Теперь я хочу выключить его, поэтому я выключаю насос и электричество, а затем открою камеру. На самом деле здесь есть отрицательное давление, поэтому вы можете услышать звук. Вот что, из-за отрицательного давления, поэтому я медленно вынимаю формы.

Поскольку у нас обе поверхности узора обращены лицевой стороной вверх, я собираюсь взять нижний слой, поместить его в левую руку и взять верхний слой, перевернуть его и поместить поверх моих бороздок, а затем надавить слои друг на друга. Прочность и долговечность адгезии являются преимуществом использования этого аппарата для плазменной обработки. И то, что вы видите здесь прямо сейчас, это то, что вы можете видеть канал на верхнем слое, и вы можете видеть рифленые узоры на нижнем слое, и он готов к следующему шагу.

А затем принесите сюда эту комнату культуры, эту культурную еду, а затем блюдо с открытой дверью. А затем мы можем просто загрузить фибронектин, вынуть 60 микролитров фиброина и затем загрузить его в устройство. А затем, чтобы создать некоторый поток внутри устройства, чтобы вызвать небольшое покрытие, вибрацию внутри канала, мы можем просто мягко всасывать выход.

После этого мы можем просто поместить это устройство на инкубатор и через час охлаждать вибрацию внутри инкубатора. Мы просто вынимаем пробу из инкубатора, а затем просто используем пять ржавчин, три, три волокна ржавчины. Мы просто отправляем fusion и dis shade, а затем помещаем среду, а затем мы просто определяем ячейки с помощью счетчика клеток.

Обычно мы видим миллион городских ячеек, сидя внутри устройства. Таким образом, после диссоциации мы можем всего пару раз нажать шампунь, а затем вынуть суспензию продаж, а затем загрузить внутреннюю часть канала, чтобы лучше загрузить ячейку внутри канала. Вы можете просто мягко подавать с помощью аспирата.

Суммарная среда и поверхностная суспензия аспирируются через выходную ячейку, как правило, автоматически, вы знаете, засевают селективный, глобальный канал. После этого можно просто разобрать и поставить инкубатор на один час, это до тех пор, пока клетка полностью не распространится внутрь канала. А затем мы можем просто ввести присадку пять и проп-йодид, а также гидроперекись.

А затем изучите свой анализ временной гипотезы. Мы можем просто взять образец внутри тканевой культуры, а затем мы можем просто сделать раствор двумя миллиметровыми средами DM DM, а также 20 микролитров добавить пять 40 микролитров йода, 100 миллилитров перекиси водорода. А затем возьмите двухметровый фильтрующий материал с приложением пять, проп. йодид, гидроперсайд, а затем поставьте шприц вслед.

Положите две мельничные среды и присоедините пять пропорций йодида, гидроперсайда. Мы можем просто поместить раствор внутрь потолка, а затем удалить пузырь и затем подключить C-медведя. Это газонепроницаемые теплые потолки Hamilton.

Это три медведя. Это одноразовые потолочные потолки. Это игла 27 калибра.

Это полиэтиленовая трубка PE 20. После загрузки раствора внутрь шприца, вы можете просто пару раз набить и надавить, и надавить, и надавить, а затем иногда немного наклона, постучать по шприцу, а затем удалить пузырь и также вытянуть раствор. Итак, еще раз полностью надавите, удалите пузырь и затем аккуратно запрограммируйте снова.

Итак, возьмите раствор на один прием пищи, а затем мы можем переключить клапан. Надавите, протолкните раствор через трехходовой клапан и полностью в трубку. Итак, наконец, решение, выходим через кончик нашей трубки, а затем мы можем просто подключить трубку к микроустройству и начать вводить одну микротрубку в минуту.