Функционализированная изоляция клеток-мишеней на основе проводов: метод ex vivo для выделения раковых клеток из периферической крови с шипами

0 просмотров4:08 мин • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Молекулы адгезии эпителиальных клеток, или EpCAM, представляют собой поверхностные трансмембранные гликопротеины, сверхэкспрессируемые в быстро пролиферирующих эпителиальных клетках при раке предстательной железы. Чтобы выделить клетки, экспрессирующие EpCAM, начните с медицинской проволоки с функционализированным наконечником с золотым покрытием. Функционализация слоев полимерного геля, содержащего ковалентно связанные EpCAM-специфические антитела.

Погрузите проволоку в суспензию периферической крови, содержащую флуоресцентно меченые раковые клетки. Следите за тем, чтобы функционализированная часть оставалась смоченной в кровяной суспензии. EpCAMs на раковых клетках распознают и связываются со своими специфическими антителами, функционализированными на проводе.

Промойте с буфером, чтобы удалить все несвязанные элементы с поверхности провода. Согните провод и закрепите его на стеклянном предметном стекле, содержащем буфер, при этом функционализированная часть будет погружена в буфер. Используйте флуоресцентный микроскоп, чтобы проверить яркую флуоресценцию цитоплазмы и ядер клетки и подтвердить наличие захваченных клеток на проволоке.

Обработайте проволоку с помощью антиадгезионного буфера. Протеолитические ферменты в буфере расщепляют полимерный гель, высвобождая в буфер комплексы антитела-раковые клетки. Центрифугируйте проволочную сборку для сбора высвобождающихся комплексов антитело-клетка в грануле. Удалите проволоку и надосадочную жидкость, содержащую фермент. Повторно суспендируйте целевую клеточную гранулу в подходящей среде.

В 5 миллилитров периферической крови добавьте от 500 до 500 000 клеток, а затем перемешайте, перевернув трубку. После извлечения провода из отсека для хранения снимите резиновый колпачок, который удерживает провод, промойте провод в 1x фосфатно-солевом буфере и установите его в колпачок трубки. Затем инкубируйте трубку на наклонном роликовом миксере со скоростью 5 оборотов в минуту в течение 30 минут при комнатной температуре. После инкубации трижды промойте проволоку в 1x фосфатно-солевом буфере. Затем храните проволоку в 15-миллилитровой тубе, содержащей 1x фосфатно-солевой буфер, в темноте.

Нарисуйте прямоугольную область на предметном стекле с помощью смазочной ручки и добавьте на нее 500 микролитров 1x фосфатно-солевого буфера. Чтобы погрузить функциональную часть проволоки в 1x фосфатно-солевой буфер, согните нефункциональную часть проволоки и поместите ее на предметное стекло. Чтобы подсчитать количество захваченных ячеек, визуально осмотрите обе стороны провода. После осмотра перенесите проволоку обратно в 15-миллилитровую трубку с 1x фосфатно-солевым буфером и храните в темноте.

В 1 миллилитре 1x фосфатно-солевого буфера растворите 4 миллиграмм разделительного буферного компонента. Затем отфильтруйте раствор через стерильный фильтр размером 0,2 микрометра, чтобы получить готовый к использованию буфер. Далее прогрейте высвобождающий буфер до 37 градусов Цельсия в течение 5 минут. После нагревания перенесите 1,6 миллилитров разделительного буфера, чтобы полностью заполнить реакционную пробирку объемом 1,5 миллилитра. Далее инкубируйте функциональную часть проволоки в высвобождающем буфере при температуре 37 градусов Цельсия на водяной бане в течение 20 минут.

После инкубации поместите проволоку на шейкер со скоростью 500 оборотов в минуту на 15 минут. Затем центрифугируйте проволоку при 300 х г в течение 10 минут. После окончания центрифугирования вытесните проволоку из пробирки, закройте крышку и снова центрифугируйте пробирку при давлении 300 x g в течение 10 минут.

10:56

Характеристика опухолевых клеток с помощью медицинская проволока для захвата циркулирующих клеток опухоли: 3D подход, основанный на иммунофлюоресценции и ДНК рыбы

Похожие видео

0 Просмотры

10:35

На основе крови тест для обнаружения ROS1 и ОТСТАВКЕ стенограммы Fusion от циркулирующих рибонуклеиновой кислоты с использованием цифровой полимеразной цепной реакции

Похожие видео

0 Просмотры

08:33

Ориентация Альфа Синуклеин Агрегаты в кожных периферных нервных волокон по свободно плавающей иммунофлуоресценции Анализ

Похожие видео

0 Просмотры

07:32

Быстрое выделение жизнеспособного циркулирующих опухолевых клеток из образцов крови пациентов

Похожие видео

0 Просмотры

04:32

Иммунофлуоресцентный анализ: метод идентификации опухолевых клеток, захваченных на медицинской проволоке

Похожие видео

0 Просмотры

03:06

Отрицательная иммуномагнитная селекция: метод очистки В-клеток из мононуклеарных клеток периферической крови

Похожие видео

0 Просмотры

10:40

Метод Targeted Выделение клеток с помощью стеклянной поверхности функционализации

Похожие видео

0 Просмотры

10:12

Целевые ячейки предварительного обогащения и весь геном усилители на одну ячейку вниз по течению характеристика

Похожие видео

0 Просмотры

05:17

Микроманипуляции циркулирующей опухолевой клетки для молекулярного анализа вниз по течению и метастатического потенциального оценивания

Похожие видео

0 Просмотры

09:08

Выделение мононуклеарных клеток периферической крови человека и CD4+ Т-клеток у пациентов с синдромом Сезари для транскриптомного профилирования

Похожие видео

0 Просмотры

Последнее обновление: 1 августа 2026