Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 2:10 мин. • April 30th, 2023
Отбор проб из одной клетки позволяет выделить одну живую клетку из суспензии раковых клеток для последующего анализа.
Начните изоляцию с суспензии раковых клеток. Перенесите нужный объем такой суспензии на предметное стекло. Оставьте предметное стекло в покое на некоторое время, чтобы уменьшить движение частиц и позволить клеткам осесть.
Теперь перенесите предметное стекло под микроскоп, оснащенный микроманипулятором, подключенным к микрокапиллярному наконечнику. Этот высокоточный прибор облегчает физическое взаимодействие с клетками образца на микроскопическом уровне.
Направьте кончик микрокапилляра вплотную к одной целевой клетке. Применяя отсасывание, соберите клетку-мишень в микрокапилляр. Теперь перенесите микрокапилляр непосредственно в пробирку, содержащую нужный буфер для сбора.
Извлеките содержимое микрокапилляров, чтобы высвободить захваченную отдельную клетку в буфер. Храните изолированную живую одиночную клетку на льду до дальнейшего анализа.
Для проведения микроманипуляции перенесите все 100 микролитров клеточной суспензии на предметное стекло. Затем поместите предметное стекло на микроскоп, оснащенный микроманипулятором, и дайте клеткам отстояться в течение 5 минут. Затем в 0,2-миллилитровые ПЦР-пробирки пипетку 2 мкл лизиса клеток смешать мастером и перенести на лед. С помощью микроманипулятора соберите одну клетку в 1 микролитре 1X фосфатно-солевого буфера.
Затем перенесите клетку непосредственно в 2 микролитра мастер-смеси для лизиса клеток. Используйте настольную микрофугу, чтобы быстро раскрутить образцы при 2000 x g в течение 3 секунд, чтобы собрать жидкость на дне пробирки.