Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 6:59 мин. • July 8th, 2025
Мультимерные белковые комплексы необходимы для различных биологических процессов.
Чтобы разделить белковые комплексы в их нативном состоянии с помощью multimer-PAGE, берут лизат тканей, содержащий нужные комплексы. Загрузите лизат в гелевую сборку для нативной модели Blue PAGE.
Заполните систему щелочным рабочим буфером, содержащим синий анионный краситель, и подключите его к источнику питания. При щелочном pH молекулы красителя связываются с белковым комплексом, придавая ему общий отрицательный заряд без денатурации. Этот отрицательно заряженный, неповрежденный белковый комплекс мигрирует через гель в виде синей полосы.
После минимального прогона и позволяя неповрежденному белку мигрировать в разрешающий гель, удалите полоску, содержащую комплекс. Инкубируйте полоску в растворе, содержащем сшивающий агент, чтобы позволить его реакционноспособным группам взаимодействовать с аминогруппами проксимального белка, стабилизируя мультимерный комплекс.
Замените сшивающий раствор реагентом для гашения, чтобы снизить активность непрореагировавших сшивателей. Добавьте SDS - анионное моющее средство, которое придает равномерный отрицательный заряд неповрежденному белковому комплексу, сохраняя
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео