Аффинный капиллярный электрофорез со сдвигом подвижности: метод анализа взаимодействий выборка-лиганд в зависимости от дифференциальной миграции комплексов белок-лиганд

Лиганды, такие как ионы металлов, нековалентно связываются с определенным белком, образуя бело-металл-ионный комплекс. Это связывание изменяет общий заряд белка, что позволяет охарактеризовать эти комплексы с помощью аффинного капиллярного электрофореза.

Для начала возьмите тонкий, предварительно кондиционированный стеклянный капилляр с заряженными силанольными группами на внутренней поверхности. Промойте капилляр раствором ЭДТА. ЭДТА является хелатирующим агентом, который удаляет любые примеси ионов металлов. Теперь гидродинамически вводите раствор образца, содержащий нужный белок, в капилляр с его положительного конца или анода.

Подайте высоковольтное напряжение для создания электроосмотического потока, заставляя белки в их нативной конформации с присущими им зарядами двигаться внутри капилляра к катоду. Запишите характер миграции несвязанных белков из капилляра.

Далее введите в капилляр определенный раствор лиганда вместе с образцами белка и подайте такое же напряжение. Внутри капилляра молекулы лиганда нековалентно связываются с белком-мишенью, образуя комплексы.

Это вызывает конформационные изменения в белках, что приводит к изменению присущих им зарядов и влияет на соотношени